Capan-2人胰腺癌細(xì)胞背景簡介

Capan-2細(xì)胞1975年建系，來源于一位名為J Fogh的56歲白人男性患者。

Capan-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系是一種來源于人類胰腺癌的貼壁細(xì)胞系。這些細(xì)胞系是通過將胰腺癌組織樣本移植到實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)皿中，并使用特定的生長條件和培養(yǎng)基來分離和培養(yǎng)的。

Capan-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系通常用于研究胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展和治療。這些細(xì)胞系可以提供一個(gè)體外模型，用于評估新的抗癌藥物的療效，以及研究腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性和分子機(jī)制。

在臨床實(shí)踐中，醫(yī)生可能會(huì)使用Capan-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系進(jìn)行診斷和治療決策。例如，通過分析這些細(xì)胞系的基因表達(dá)譜，可以幫助確定患者的癌癥類型和分級，從而指導(dǎo)個(gè)體化的治療方案。此外，研究人員還可以利用這些細(xì)胞系進(jìn)行藥物篩選和毒性測試，以尋找新的抗癌藥物或治療方法。

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：Capan-2人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱：CaPan-2; CAPAN-2; Capan 2; CAPAN 2; Capan2; CAPAN2;人胰腺癌細(xì)胞

種屬來源：人

組織來源：胰腺

形態(tài)特性：貼壁生長，上皮細(xì)胞樣

STR位點(diǎn)信息：Amelogenin：X;CSF1PO：11,12;D2S1338：19,25;D3S1358：17,18;D5S818：11,12;D7S820：9,11;D8S1179：12,13;D13S317：11,12;D16S539：9,13;D18S51：13;D19S433：13,15;D21S11：31;FGA：21,24;Penta D：13,15;Penta E：11;TH01：9.3;TPOX：8;vWA：16,17;

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; HTB-80，BCRJ; 0060，CLS; 300144，DSMZ; ACC-245，IZSLER; BS TCL 10，KCLB; 30080

培養(yǎng)基：MCCOYS 5A+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞形態(tài)特征

capan-2細(xì)胞形態(tài)特征成片生長，且生長速度較慢。

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗(yàn)室條件

1.無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2.儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)-操作平臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍(lán)色100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

4.試劑：MCCOYS 5A培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1.無菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗(yàn)服，常噴75%酒精

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1)準(zhǔn)備：紫外線照臺(tái)30min，提前打開水浴鍋設(shè)置37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20分鐘(或者放在超凈工作臺(tái)常溫放30min)。在操作臺(tái)上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL移液槍，3mL巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到37℃時(shí)，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1mLCapan-2細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時(shí)不斷輕輕搖動(dòng)凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞1min內(nèi)融化，加4mL培養(yǎng)基混合均勻，移入離心機(jī)中100rpm離心3min，以75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

3)用3mL巴氏管取5mL新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的6cm培養(yǎng)皿中，(若離心后細(xì)胞量較多，可取12mL新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的10cm培養(yǎng)皿中)，標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1mL新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將Capan-2細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫30個(gè)8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定Capan-2細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動(dòng))，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞傳代操作

從培養(yǎng)箱拿出Capan-2細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)Capan-2細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到85%左右的時(shí)候即可進(jìn)行傳代;

打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個(gè)藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取4ml不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm皿)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中(若是10cm皿則取8ml1xPBS)，輕輕晃動(dòng)以清洗細(xì)胞表面1-2次;

用廢液泵吸走PBS廢液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)以便胰酶浸泡到每個(gè)細(xì)胞，消化1-3min(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時(shí)間長一點(diǎn)或者放入CO2培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

用1ml移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個(gè)角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸1ml移液槍移入無菌離心管中。

將裝有Capan-2細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中(配平)，1000轉(zhuǎn)離心3-5min，用廢液泵取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1-2mL新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫30個(gè)8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細(xì)胞。

確定Capan-2細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動(dòng))。第二天再觀察細(xì)胞密度。

Capan-2細(xì)胞傳代小貼士

1. Capan-2細(xì)胞比較難消化，且消化后貼壁時(shí)間較長，因此傳代處理后48h內(nèi)盡量不要移動(dòng)，防止影響貼壁。

2. Capan-2細(xì)胞易聚團(tuán)成斑塊狀生長，生長非常緩慢，偶爾有少量細(xì)胞飄著是屬正?，F(xiàn)象，保持營養(yǎng)充足即可。

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

從培養(yǎng)箱拿出Capan-2細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá)80–90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25瓶為例

細(xì)胞凍存步驟

a.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000rpm條件下離心4min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，在Capan-2細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽(細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80度凍存盒里，放置24小時(shí)后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫位置和凍存日期。

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

capan-2細(xì)胞不好消化

capan-2細(xì)胞比較難消化，放置培養(yǎng)箱消化5-8min，不同的胰酶消化時(shí)間存在差異，capan-2消化后貼壁時(shí)間較長，因此傳代處理后48h內(nèi)盡量不要移動(dòng)，防止影響貼壁。

capan-2用什么培養(yǎng)基

capan-2細(xì)胞培養(yǎng)基：MCCOYS 5A+10% FBS+PS

capan-2細(xì)胞一分二多久長滿

capan-2細(xì)胞生長非常緩慢，一分二的話，一般7天左右長滿，capan-2細(xì)胞易聚團(tuán)成斑塊狀生長，偶爾有少量細(xì)胞飄著是屬正常現(xiàn)象，保持營養(yǎng)充足即可。

capan-2細(xì)胞生長特點(diǎn)

capan-2細(xì)胞中間連成一片，capan-2細(xì)胞形態(tài)特征成片生長，且生長速度較慢

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞應(yīng)用

Capan-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系可以用于KRT18增強(qiáng)c-Myc通路促進(jìn)胰腺癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究

收集36對未經(jīng)放化療的新鮮胰腺癌及癌旁組織樣本,通過Western blot實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測本研究中KRT18的表達(dá)量。在胰腺正常細(xì)胞HPNE和4種胰腺癌細(xì)胞As PC-1、CAPAN-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系、PANC-1、SW1990中通過q PCR實(shí)驗(yàn)和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測KRT18基因m RNA和蛋白表達(dá)水平。為進(jìn)一步研究KRT18對胰腺癌細(xì)胞惡性表型的影響。

本研究使用si RNA(si KRT18-1、si KRT18-2、si KRT18-3)分別轉(zhuǎn)染As PC-1細(xì)胞和CAPAN-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞。通過q PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測si KRT18-1、si KRT18-2、si KRT18-3在As PC-1細(xì)胞和CAPAN-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞中的敲減效率。為了明確KRT18對胰腺癌細(xì)胞增殖的影響,我們首先觀察在細(xì)胞轉(zhuǎn)染了KRT18 sh RNA后的CCK-8實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)的變化。

為了明確KRT18對胰腺癌細(xì)胞遷移的影響,我們觀察在細(xì)胞轉(zhuǎn)染了KRT18 sh RNA后的傷口愈合實(shí)驗(yàn)的變化。為了明確KRT18對胰腺癌細(xì)胞侵襲的影響,我們觀察在細(xì)胞轉(zhuǎn)染了KRT18 sh RNA后的Transwell實(shí)驗(yàn)的變化。EMT通路是在癌細(xì)胞中發(fā)揮著促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移作用最顯著和最重要的通路之一。

為了確認(rèn)KRT18是否通過調(diào)控EMT信號通路的活化影響As PC-1和CAPAN-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞轉(zhuǎn)移。我們通過Western blot檢測各組KRT18、E-鈣粘蛋白、N-鈣粘蛋白、波形蛋白及Snail的蛋白表達(dá)水平。由于在第一部分的研究中,我們發(fā)現(xiàn)c-Myc通路在高代謝亞型中明顯激活,而且c-Myc通路是在癌細(xì)胞中發(fā)揮著促癌作用最顯著和最重要的通路之一。可影響細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期、凋亡等多種過程。

為了進(jìn)一步確認(rèn)KRT18是否通過調(diào)控c-Myc信號通路的活化影響As PC-1和CAPAN-2人胰腺癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞轉(zhuǎn)移。我們通過Western blot檢測各組KRT18和c-Myc的蛋白表達(dá)水平。最后,為了進(jìn)一步確定KRT18促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移是否通過c-Myc通路介導(dǎo)。首先過表達(dá)KRT18,然后檢測c-Myc通路是否激活以及增殖、遷移、侵襲的表型是否被促進(jìn),最后通過c-Myc通路抑制劑檢查這些被促進(jìn)的過程是否得到有效回復(fù)。通過這樣的rescue回復(fù)實(shí)驗(yàn),檢驗(yàn)c-Myc通路是否可以介導(dǎo)KRT18的功能。為了進(jìn)一步明確其在胰腺癌細(xì)胞中的作用,我們通過構(gòu)建10只裸鼠胰腺癌移植瘤動(dòng)物模型,在體內(nèi)探究KRT18對胰腺癌腫瘤的生長作用。Western blot實(shí)驗(yàn)和IHC實(shí)驗(yàn)檢測不同模型分組組織中KRT18的表達(dá)量。

參考文獻(xiàn)

[1] Decreased miR-940 expression can predict a negative prognosis in early-stage nonsmoking female lung adenocarcinoma..Ma Qianli;Zhang Jin;Huang Jingjing;Wang Xiaowei;Xiao Fei;Xing Huajie;Wang Ye;Guo Yongqing;Shi Bin;Song Zhiyi;Liu Deruo;Si Chaozeng;Horinouchi Hidehito;Liang Chaoyang.Translational lung cancer research,2021

[2]Total Keratin-18(M65)as a Potential,Early,Non-Invasive Biomarker of Hepatocyte Injury in Alcohol Intoxicated Adolescents—A Preliminary Study.Zdanowicz Katarzyna;Olanski Witold;KowalczukKryston Monika;BobrusChociej Anna;Werpachowska Irena;Lebensztejn Dariusz Marek.Biomolecules,2021

[3]Diagnostic and prognostic impact of cytokeratin 18 expression in human tumors:a tissue microarray study on 11,952 tumors..Menz Anne;Weitbrecht Timo;Gorbokon Natalia;Büscheck Franziska;Luebke Andreas M;Kluth Martina;HubeMagg Claudia;Hinsch Andrea;H?flmayer Doris;Weidemann S?ren;Fraune Christoph;M?ller Katharina;Bernreuther Christian;Lebok Patrick;Clauditz Till;Sauter Guido;Uhlig Ria;Wilczak Waldemar;Steurer Stefan;Minner Sarah;Burandt Eike;Krech Rainer;Dum David;Krech Till;Marx Andreas;Simon Ronald.Molecular medicine(Cambridge,Mass.),2021

[4]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries.Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2021

[5]高楊.KRT18增強(qiáng)c-Myc通路促進(jìn)胰腺癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制研究[D].中國醫(yī)科大學(xué),2023.