CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞背景簡(jiǎn)介

CFPAC-1是一種胰腺管腺癌細(xì)胞系，是從一個(gè)26歲的白人男性囊性纖維變性(CF)患者的肝轉(zhuǎn)移灶中建立的。這種細(xì)胞系表達(dá)囊性纖維變性跨膜調(diào)節(jié)因子(CFTR)，并且具有上皮樣形態(tài)，頂端微絨毛極化。此外，CFPAC-1細(xì)胞還表達(dá)胰腺管細(xì)胞特征性的細(xì)胞角蛋白和癌胚抗原，其倍增時(shí)間為30-32小時(shí)。

CFPAC-1細(xì)胞是亞3倍體的細(xì)胞系，36%的細(xì)胞的染色體模式數(shù)為75。這些細(xì)胞在傳代至24代時(shí)可以在免疫抑制小鼠中致瘤。因此，CFPAC-1細(xì)胞在醫(yī)學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中常被用于模擬和研究胰腺管腺癌的生物學(xué)特性，以及評(píng)估新藥物或治療方法對(duì)胰腺管腺癌的療效。

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞形態(tài)特征

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱：CFPac-1; CF PAC-1; CF-PAC1; CF-Pac1; CF Pac1; CFPAC1; CFPac1; CFPAC;人胰腺癌細(xì)胞

種屬來源：人，男;26歲

組織來源：胰腺管腺癌，肝轉(zhuǎn)移

特性特征：貼壁生長(zhǎng)，上皮細(xì)胞樣

STR位點(diǎn)信息：Amelogenin：X，Y;CSF1PO：10;D13S317：12;D16S539：9，11;D18S51：12;D19S433：13，15;D21S11：30，31.2;D2S1338：18，23;D3S1358：16;D5S818：10，11;D7S820：8，10;D8S1179：11，15;FGA：21，22;TH01：8;TPOX：8;vWA：17;

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-1918 ECACC; 91112501；中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心

培養(yǎng)基：IMDM+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間：~30-45 hours

致瘤性：Yes, in nude mice (passage 34)

抗原表達(dá)情況：CA19-9 antigen, 12000 units/mL, epithelial keratins

基因表達(dá)情況：carcinoembryonic antigen (CEA), 9ng/mL; pancreatic oncofetal antigen (POA), 28ng/mL; adenocarcinoma associated antigen (ACAA), 5000ng/mL; CA 19-9 antigen, 12000 units/mL; epithelial keratins

染色體：54~71

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗(yàn)室條件

1.無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2.儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)-操作平臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級(jí)水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍(lán)色100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

4.試劑：IMDM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1.無菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗(yàn)服，常噴75%酒精

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1)準(zhǔn)備：紫外線照臺(tái)30min，提前打開水浴鍋設(shè)置37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20分鐘(或者放在超凈工作臺(tái)常溫放30min)。在操作臺(tái)上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL移液槍，3mL巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到37℃時(shí)，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1mLCFPAC-1細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時(shí)不斷輕輕搖動(dòng)凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞1min內(nèi)融化，加4mL培養(yǎng)基混合均勻，移入離心機(jī)中100rpm離心3min，以75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

3)用3mL巴氏管取5mL新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的6cm培養(yǎng)皿中，(若離心后細(xì)胞量較多，可取12mL新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的10cm培養(yǎng)皿中)，標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1mL新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將CFPAC-1細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫30個(gè)8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定CFPAC-1細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動(dòng))，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞傳代操作

1.從培養(yǎng)箱拿出CFPAC-1細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)CFPAC-1細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到85%左右的時(shí)候即可進(jìn)行傳代;

2.打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個(gè)藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取4ml不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm皿)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中(若是10cm皿則取8ml1xPBS)，輕輕晃動(dòng)以清洗細(xì)胞表面1-2次;

3.用廢液泵吸走PBS廢液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)以便胰酶浸泡到每個(gè)細(xì)胞，消化1-3min(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)或者放入CO2培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

4.用1ml移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個(gè)角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對(duì)細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸1ml移液槍移入無菌離心管中。

5.將裝有CFPAC-1細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中(配平)，1000轉(zhuǎn)離心3-5min，用廢液泵取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1-2mL新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫30個(gè)8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

6.確定CFPAC-1細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動(dòng))。第二天再觀察細(xì)胞密度。

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

從培養(yǎng)箱拿出CFPAC-1細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá)80–90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25瓶為例

細(xì)胞凍存步驟

a.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000rpm條件下離心4min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，在CFPAC-1細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽(細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80度凍存盒里，放置24小時(shí)后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫位置和凍存日期。

cfpac-1胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

cfpac-1胰腺癌細(xì)胞胰酶消化多久

cfpac-1胰腺癌細(xì)胞不會(huì)難消化，一般培養(yǎng)箱放置1-2分鐘，不同的胰酶消化時(shí)間不同，以實(shí)際為主。

cfpac1細(xì)胞用什么培養(yǎng)基

cfpac1細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基IMDM+10%FBS+1%雙抗。

CFPAC-1人胰腺癌細(xì)胞應(yīng)用

CFPAC-1可以用于蟾毒靈通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯在胰腺癌細(xì)胞中發(fā)揮抗腫瘤作用

蟾毒靈對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡的影響及可能的分子機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是很多抗腫瘤藥物抑制腫瘤細(xì)胞增殖的重要機(jī)制。我們知道,凋亡過程受到凋亡促進(jìn)分子及凋亡抑制分子的共同調(diào)控,其中研究較多的凋亡抑制分子為Bcl-2,而凋亡促進(jìn)分子為P53,其他與凋亡調(diào)控相關(guān)的分子有Bax、Bcr-abl及PML-RARa等。近年來,越來越多的報(bào)道證明熱休克蛋白可以通過調(diào)控凋亡信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子發(fā)揮抗凋亡作用。Hsp27是小分子熱休克蛋白家族中的一員,它可以在不同的水平影響內(nèi)源性和外源性凋亡通路抑制細(xì)胞的凋亡促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。因此,研究以Hsp27為靶點(diǎn)的藥物對(duì)腫瘤的治療具有重要意義。

如前所述,蟾毒靈可以在多種腫瘤細(xì)胞中通過調(diào)控不同的分子通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,而最近的一項(xiàng)研究表明蟾毒靈可以通過靶向抑制Hsp27在骨肉瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)凋亡。我們感興趣的是蟾毒靈對(duì)胰腺癌細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。

選用PANC-1和CFPAC-1兩株胰腺癌細(xì)胞為模型,以不同濃度的蟾毒靈(OnM,50nM,100nM,200nM)作用于胰腺癌細(xì)胞48h,以適當(dāng)方法收集細(xì)胞,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率的改變;利用western blotting技術(shù)檢測(cè)PANC-1和CFPAC-1細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白及其上游調(diào)控分子表達(dá)水平的改變。流式檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著藥物濃度的增加,PANC-1和CFPAC-1細(xì)胞的凋亡比率增加,即蟾毒靈可以誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡,進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。Western blotting結(jié)果表明,經(jīng)蟾毒靈處理后,Hsp27及其下游分子p-Akt在胰腺癌細(xì)胞中下調(diào)。

同時(shí),該研究證明,經(jīng)藥物處理后,pro-caspase-3和pro-caspase-9被激活,而Bax表達(dá)水平升高,Bcl-2表達(dá)下降,即Bax/Bcl-2的比值增高。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推測(cè)蟾毒靈可能通過抑制Hsp27,進(jìn)而調(diào)控其下游關(guān)鍵的凋亡相關(guān)蛋白最終引起細(xì)胞發(fā)生凋亡。

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