細胞換液是指去除舊的培養(yǎng)基，換成新的完全培養(yǎng)基以繼續(xù)提供細胞充足的營養(yǎng)支持。當(dāng)舊培養(yǎng)基 ph 值改變(含酚紅的培養(yǎng)基通常是變酸發(fā)黃)時，需要及時進行換液。在培養(yǎng)細胞的過程中，換液是一項非常常規(guī)操作，它主要是為了清除細胞在生長過程中產(chǎn)生的各種代謝廢物，補充新鮮的培養(yǎng)基，促進細胞生長。細胞換液主要有全換液和半換液兩種方式，那么，不同方式的換液方法如何更換細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的溶液呢?

換液前工作準備

環(huán)境準備：相對密封、防塵、防菌的無菌室

操作者準備：雙手清潔呈可操作狀態(tài)

物品準備：超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、裝有75%醫(yī)用消毒酒精的酒精噴壺、PBS緩沖液、含血清培養(yǎng)基、巴氏吸管、移液器、廢液缸。

工作準備：預(yù)熱完全培養(yǎng)基，酒精棉擦拭培養(yǎng)基瓶外表面后移入生物安全柜/超凈工作臺。

細胞培養(yǎng)箱中取出的細胞，酒精棉擦拭培養(yǎng)瓶/皿外表面，移入生物安全柜/超凈工作臺?？梢陨缘却?，待生物安全柜中的循環(huán)風(fēng)將試劑瓶和培養(yǎng)瓶的外表面吹拂幾分鐘后，擰開培養(yǎng)基瓶蓋虛掩，擰開培養(yǎng)瓶瓶蓋虛掩，培養(yǎng)皿蓋不用擰。

細胞半換液和全換液操作步驟

第一種方式：細胞全換液

如果是貼壁細胞，可以用全量換液法，直接吸去全部舊培養(yǎng)基，補充足量新鮮完全培養(yǎng)基。

細胞全換液具體步驟

1.將器材放入超凈臺，打開紫外照射滅菌，若是培養(yǎng)的細胞對溫度比較敏感，可以將含血清的培養(yǎng)基瓶放入37℃的水浴箱使得培養(yǎng)基溫度在37℃，再轉(zhuǎn)移到超凈臺紫外滅菌。另外，細胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時左右。

2.從培養(yǎng)箱取出細胞培養(yǎng)瓶，用酒精噴壺在瓶子表面噴灑75%酒精消毒，轉(zhuǎn)移到超凈臺，打開蓋子，輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，可用移液器加入新鮮含血清培養(yǎng)基，注意一定不要從細胞貼壁面加入培養(yǎng)基，應(yīng)從側(cè)壁加，動作輕柔，以免沖落細胞。

3.加好培養(yǎng)基后，蓋上蓋子，在瓶子上做標記，注明換液時間，細胞種類，操作人員等信息。

4.放入培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴瓶子表面，然后應(yīng)記得整理操作臺，用酒精擦拭超凈臺臺面，清理廢液和垃圾。

第二種方式：細胞半換液

“細胞半換液”又稱“細胞半量換液”，即棄掉一半舊的培養(yǎng)基，再加一半新的進去。選它的原因其實與前面不加PBS的理由有點相近。

半換液原因

1.給細胞提供適應(yīng)的緩沖環(huán)境;

2.細胞生長過程中可能會分泌某些生長因子，促進生長;

3.節(jié)省材料

4.方便操作：比如96孔板，換液很麻煩。所以常采用排槍進行半換液;

5.對于懸浮細胞的培養(yǎng)，有時也會選用半換液減低細胞密度;

細胞半換液操作步驟

如果是懸浮細胞，可以用半量換液法。

1.即吸去一半舊培養(yǎng)基

2.補充新鮮完全培養(yǎng)基(會損失一半細胞)。

懸浮細胞如果不想損失細胞，那就需要將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到離心管中，離心去除舊培養(yǎng)基，再用新培養(yǎng)基重懸細胞沉淀。

細胞換液常見問題

1.細胞換液是否需要用PBS清洗?

我們知道，在“貼壁細胞傳代”中，培養(yǎng)基中的血清會抑制胰酶的活性，影響消化的效果，所以必須要PBS 的清洗。

但對于細胞換液，尚未查到有資料明確說明是否需要PBS清洗。

這里應(yīng)該根據(jù)細胞的具體情況考慮

a.若細胞比較“嬌氣”或生長狀態(tài)不是特別好時，建議還是不要用PBS清洗。一方面，細胞貼壁的狀態(tài)可能不是很牢固，PBS的沖洗會破壞細胞的貼壁狀態(tài);另一方面，PBS可能會洗掉細胞分泌的一些生長因子，這同樣不利于細胞狀態(tài)的調(diào)整。如果一定要洗，可以緩慢清洗，減少對細胞的傷害

b.當(dāng)細胞生長狀態(tài)不錯，或者顯微鏡下觀察細胞液中不是很干凈時，可以選擇用PBS清洗。一方面可以去除積累的代謝物;另一方面，也可將一些生長狀態(tài)不好或衰老的細胞洗脫下來，保持細胞活力。

細胞換液注意事項

1.在進行換液操作時，全程注意無菌，操作人員要穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩，手接觸到細胞培養(yǎng)瓶瓶口時一定要小心，避免造成污染。

2.加培養(yǎng)液時，不可直接加到細胞貼壁的面上。

3.換液前記得觀察細胞的狀態(tài)及拍照記錄

不光細胞維持培養(yǎng)時需要進行細胞換液，一些實驗操作也需要進行細胞換液。當(dāng)換液操作是實驗需要時，可能在添加新的培養(yǎng)基前需要 PBS 清洗細胞以去除舊培養(yǎng)基的影響， 新添加的培養(yǎng)基也可根據(jù)實驗需求進行特殊配制，不一定是完全培養(yǎng)基。