Capan-1人胰腺癌細胞背景簡介

Capan-1人胰腺癌貼壁細胞系來源于一位40歲白人男性患者的肝轉(zhuǎn)移。這種細胞系是通過將胰腺癌組織接種到裸鼠體內(nèi)，然后從裸鼠體內(nèi)分離出腫瘤細胞并進行體外培養(yǎng)而建立的。細胞表達粘液素，Rh+， HLA A2,，A9，B13，B17。含有刺激素受體和乙二醇激素受體。

Capan-1人胰腺癌細胞形態(tài)特征

capan-1細胞前期呈島狀生長，生長緩慢，后期細胞量多，增殖速度加快，培養(yǎng)液消耗快。

Capan-1人胰腺癌細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱：Capan-1人胰腺癌細胞

細胞別稱：CaPan-1; CAPAN-1; Capan 1; CAPAN 1; Capan1; CAPAN1; 人胰腺癌細胞

種屬來源：人

組織來源：胰腺

形態(tài)特性：貼壁生長，多邊形細胞樣

STR位點信息：Amelogenin：X;CSF1PO：11;D2S1338：20,24;D3S1358：15;D5S818：11;D7S820：10,11;D8S1179：14,16;D13S317：9;D16S539：13,14;D18S51：12;D19S433：14,15;D21S11：28,30;FGA：24;PentaD：9,13;PentaE：10,12;TH01：6;TPOX：8,11;vWA：16

保藏機構(gòu)：AddexBio;C0018001/31;ATCC; HTB-79;BCRJ; 0265;CLS; 300143;DSMZ; ACC-244;IZSLER; BS TCL 9;KCLB; 30079

培養(yǎng)基：80%IMDM+20%FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

capan-1細胞好養(yǎng)嗎

細胞培養(yǎng)的基本條件

實驗室條件

1.無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風淋間，操作間

2.儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍色100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

4.試劑：IMDM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1.無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴75%酒精

Capan-1人胰腺癌細胞復蘇步驟

1)準備：紫外線照臺30min，提前打開水浴鍋設(shè)置37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20分鐘(或者放在超凈工作臺常溫放30min)。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL移液槍，3mL巴氏管。檢查離心機，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達到37℃時，戴上手套和護目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1mLCapan-1細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細胞1min內(nèi)融化，加4mL培養(yǎng)基混合均勻，移入離心機中100rpm離心3min，以75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用3mL巴氏管取5mL新鮮培養(yǎng)基到一個新的6cm培養(yǎng)皿中，(若離心后細胞量較多，可取12mL新鮮培養(yǎng)基到一個新的10cm培養(yǎng)皿中)，標記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1mL新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻)，將Capan-1細胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫30個8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

5)確定Capan-1細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動)，第二天換液并檢查細胞密度。

Capan-1人胰腺癌細胞傳代操作

從培養(yǎng)箱拿出Capan-1細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，當Capan-1細胞狀態(tài)良好，且密度達到85%左右的時候即可進行傳代;

打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個藍色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取4ml不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm皿)到細胞培養(yǎng)皿中(若是10cm皿則取8ml1xPBS)，輕輕晃動以清洗細胞表面1-2次;

用廢液泵吸走PBS廢液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細胞，消化1-3min(根據(jù)細胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時間長一點或者放入CO2培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細胞胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

用1ml移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對細胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)毎灿袀?，把培養(yǎng)瓶中所有細胞懸液用吸1ml移液槍移入無菌離心管中。

將裝有Capan-1細胞懸液的離心管放入離心機中(配平)，1000轉(zhuǎn)離心3-5min，用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取1-2mL新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻)，將細胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫30個8字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

確定Capan-1細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動)。第二天再觀察細胞密度。

Capan-1人胰腺癌細胞凍存準備

從培養(yǎng)箱拿出Capan-1細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細胞密度達80–90%時，可進行細胞凍存操作，以T25瓶為例

Capan-1細胞凍存步驟

a.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000rpm條件下離心4min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，在Capan-1細胞凍存管上貼上細胞標簽(細胞標簽上包含：細胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80度凍存盒里，放置24小時后，即可移入液氮中保存，標記好入庫位置和凍存日期。

特別注意 該細胞比較難消化，且消化后貼壁時間較長，因此傳代處理后24-48h內(nèi)盡量不要移動，防止影響貼壁，該細胞易聚團成斑塊狀生長，生長非常緩慢，屬正?，F(xiàn)象，保持營養(yǎng)充足即可。

Capan-1細胞培養(yǎng)常見問題

capan-1細胞是KRAS突變嗎?

PANC-1(BC-C-HU-041)：來源于一位56歲女性患者原位胰頭癌，該來源胰頭癌有轉(zhuǎn)移至胰周淋巴結(jié)，分泌較高水平的血管內(nèi)皮生長因子，屬于 KRAS、TP53和p16基因突變胰腺癌。

Capan-1人胰腺癌細胞復蘇活率很低怎么辦?

Capan-1細胞復蘇活率較低，狀態(tài)養(yǎng)好后，一般4、5天才能長滿。

Capan-1這個細胞的話正常一周可以傳幾代呢?

Capan-1細胞一分二的話，4-5天左右可以傳代，capan-1細胞比較難消化，且消化后貼壁時間較長，因此傳代處理后24-48h內(nèi)盡量不要移動，防止影響貼壁，該細胞易聚團成斑塊狀生長，生長非常緩慢，屬正常現(xiàn)象，保持營養(yǎng)充足即可。

Capan-1人胰腺癌細胞培養(yǎng)過程中有什么要注意的嗎

Capan-1細胞培養(yǎng)中分泌物較多，前期呈島狀生長，生長緩慢，后期細胞量多，增殖速度加快，培養(yǎng)液消耗快，所以要注意培養(yǎng)液顏色，容易營養(yǎng)不夠，及時換液，需要2天換一次液，這個細胞匯合度達80-90%細胞量就非常多。

Capan-1人胰腺癌細胞的特點

1. 貼壁生長：CAPAN-1細胞系在體外培養(yǎng)時，需要貼附在培養(yǎng)皿的底部，形成單層細胞。

2. 高增殖率：CAPAN-1細胞系具有較高的增殖率，可以在短時間內(nèi)達到較高的細胞密度。

3. 腫瘤特異性：CAPAN-1細胞系來源于人類胰腺癌，因此具有腫瘤特異性，可以用于研究胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展和治療。

4. 穩(wěn)定傳代：CAPAN-1細胞系可以在體外穩(wěn)定傳代，保持其生物學特性和表型。

Capan-1人胰腺癌細胞應(yīng)用

CAPAN-1細胞系在胰腺癌研究中具有廣泛的應(yīng)用，如用于研究胰腺癌的發(fā)病機制、藥物篩選、基因表達分析等。同時，由于其來源于人類胰腺癌，因此在研究過程中可以更好地模擬胰腺癌的生理環(huán)境，提高研究的準確性和可靠性。

CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系可以用于大蒜素制劑對人胰腺癌細胞Capan-1生長增殖作用的體外實驗研究

觀察研究大蒜素制劑(Allicin)對體外培養(yǎng)的CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系生長增殖的影響及其對Capan-1細胞周期的作用,以及細胞體外遷移能力的影響,為大蒜素制劑用于臨床胰腺癌的治療提供實驗依據(jù)。

方法

1. 測定體外培養(yǎng)的CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系的細胞活力、貼壁率,應(yīng)用四唑鹽比色法(MTT)測定Capan-1細胞在不同時間、不同濃度的OD值,繪制生長曲線,確定最佳細胞接種濃度及藥物干預區(qū)間。

2. 四唑鹽比色法(MTT)測定不同濃度,不同作用時間的大蒜素制齊(Allicin)對CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系的生長增殖抑制作用,測定其IC50,并于倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化。

3. 流式細胞術(shù)檢測大蒜素制劑(Allicin)對CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系細胞周期的影響并分析證實是否有誘導凋亡的作用;細胞劃痕實驗檢測大蒜素制劑(Allicin)對人胰腺癌細胞株Capan-1株遷移能力的影響。

結(jié)果

1. CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系常規(guī)培養(yǎng),存活率均>95%符合本實驗要求,MTT測定的生長曲線提示按照6×103/孔的密度接種于96孔板內(nèi)可提供足夠的細胞生長空間及營養(yǎng)成分,使細胞于接種24小時后,適應(yīng)新環(huán)境,逐漸進入快速繁殖期。

2. 選取6×103/孔濃度CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系接種于96孔板后的24—72小時左右作為藥物干預實驗區(qū)間,該區(qū)間能夠保證細胞始終處于一個穩(wěn)定的對數(shù)生長期;在此條件下MTT法檢測不同濃度大蒜素制劑對Capan-1細胞生長抑制率具有時間和劑量依賴性。

3. 流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示大蒜素制劑可使CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系周期阻滯于G2/M期,抑制細胞有絲分裂的進程,同時可見典型的亞二倍體峰即凋亡峰(AP)出現(xiàn);TUNEL凋亡實驗進一步證實大蒜素制劑能誘導Capan-1細胞凋亡的發(fā)生;細胞劃痕實驗結(jié)果顯示大蒜素制劑能夠明顯降低人胰腺癌Capan-1細胞的遷移能力。

結(jié)論

1. 不同濃度大蒜素制劑(Allicin)作用不同時間對CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系生長增殖具有明顯的抑制作用,呈時-效和量-效依賴關(guān)系,具有時間依賴性和劑量依賴性。

2. 大蒜素制劑(Allicin)能誘導CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系凋亡,并將細胞周期阻滯于G2/M期,從而抑制細胞的分裂增殖。

3. 大蒜素制劑能夠明顯降低CAPAN-1人胰腺癌貼壁細胞系細胞的遷移能力。

4.大蒜素制劑(Allicin)可能是有前景的抑制胰腺癌細胞的藥物。

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