CNE1人鼻咽癌細胞背景簡介

CNE細胞株來源于一位58歲女性鼻咽癌患者，EXPASY細胞庫顯示細胞存在交叉污染，STR結(jié)果顯示它與CNE-2相同，似乎是HeLa和未知來源細胞系的雜交種，PubMed=24991015的RNASeq數(shù)據(jù)也證實了這一點，最初被認為來自一名58歲的鼻咽癌女性患者。

CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系是一種實驗細胞，主要用于科學(xué)研究。它源自人鼻咽癌細胞，經(jīng)分離、傳代、凍存等步驟制成。這種細胞系具有廣泛的應(yīng)用價值，如鼻咽癌研究、抗癌藥物篩選等。

鼻咽癌是一種常見的頭頸部惡性腫瘤，發(fā)病率較高，且易于轉(zhuǎn)移。因此，對鼻咽癌的研究具有重要的臨床意義。CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系就是在這種背景下建立起來的。

CNE1人鼻咽癌細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱：CNE1人鼻咽癌細胞

細胞別稱：CNE；CNE1；人鼻咽癌細胞

種屬來源：人

組織來源：鼻

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

STR位點信息：Amelogenin：X;CSF1PO：10,11;D2S1338：17,23;D3S1358：15,18;D5S818：11,12;D7S820：10,12;D8S1179：12,16;D13S317：10,12,13.3;D16S539：9,10;D18S51：13,16;D19S433：13;D21S11：27,30;FGA:18,21;TH01:6,7,9;TPOX：8,12;vWA：14,16

保藏機構(gòu)：CCTCC; Ubigene

培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

CNE-1人鼻咽癌細胞培養(yǎng)操作說明

細胞培養(yǎng)的基本條件

實驗室條件

1.無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2.儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍色100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

4.試劑：RPMI-1640培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范疇

無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴75%酒精

CNE-1人鼻咽癌細胞復(fù)蘇步驟

實驗準備

提前打開水浴鍋設(shè)置37C，提前開啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺開燈通風(fēng)10min，用75%酒精擦拭臺面

CNE-1人鼻咽癌細胞復(fù)蘇方法

1.從液氮罐中迅速取出凍存管，立即放入37°C水浴箱中；

2.輕輕搖晃，使CNE-1細胞快速融化解凍，最好在1min內(nèi)完成；

3.將凍存管移入離心機中1000rpm離心3min；

4.取4mL完全培養(yǎng)基到一個新的6cm培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿上標記細胞名稱，日期和所用培養(yǎng)基名稱；

5.離心結(jié)束后，以75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺；

6.從凍存管中吸走上清，用1ml完全培養(yǎng)基重懸后，移入6cm皿中；

7.“8字法”搖勻后，鏡檢是否鋪勻；

8.把培養(yǎng)皿放入C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天觀察CNE-1細胞株貼壁情況。

注意事項

1.操作凍存細胞時應(yīng)使用手套、工作服和防護面具等，以避免事故的發(fā)生;

2.復(fù)蘇細胞時，應(yīng)保持管蓋擰緊，將管蓋以下部分浸入37℃水浴中解凍，解凍過程要快;

CNE-1人鼻咽癌細胞傳代操作

從培養(yǎng)箱拿出CNE-1細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，當細胞狀態(tài)良好，且密度達到80%以上時，即可進行傳代；

1.將CNE-1細胞培養(yǎng)皿放入超凈工作臺中，吸去上清，沿血壁加入5ml PBS；

2.輕洗CNE-1細胞表面，洗去表面培養(yǎng)基，再將PBS棄去；

3.加入2ml胰酶，37℃消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細胞是否脫落；

4.加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化，將細胞吹散，移入15ml離心機管中，1000rpm，離心5min；

5.取兩個新的6cm培養(yǎng)皿，各加入6-8ml完全培養(yǎng)基，在培養(yǎng)皿上標記細胞名稱，日期和所用培養(yǎng)基名稱；

6.離心結(jié)束后，用75%的酒精噴管身后，放回工作臺中，吸去上清；

7.取2ml完全培養(yǎng)基重懸細胞，平均分配到2個皿中，“8字法”搖勻后，鏡檢是否鋪勻；

8.把培養(yǎng)皿放入C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天觀察CNE-1細胞系貼壁情況；

注意事項

1.培養(yǎng)過程中需維持細胞處于對數(shù)生長期，80%左右即可傳代，傳代比例請參照說明書建議;

2.消化時間不宜過長，大部分細胞回縮變圓并有少量細胞脫落即可中止消化，難消化的細胞可分次消化，每次時間不超過5min。

3.培養(yǎng)過程中需要定期換液，一般細胞建議2-3天換液一次。

CNE-1人鼻咽癌細胞凍存準備

從培養(yǎng)箱拿出CNE-1細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細胞密度達80–90%時，可進行細胞凍存操作，以T25瓶為例

CNE-1細胞凍存步驟

1.將細胞培養(yǎng)皿放入超凈工作臺，吸去上清，沿皿壁加入5ml PBS，輕洗細胞表面，洗去表面培養(yǎng)基，再將PBS吸去;

2.加入2ml胰酶，37℃消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細胞是否脫落，可輕拍使未脫落細胞脫落;

3.加入3ml 完全培養(yǎng)基終止消化，將細胞吹散，移入15ml離心管中，1000rpm，離心4min;

4.取一定量的凍存管，打印標簽，寫明細胞名稱，凍存日期，所用培養(yǎng)基，貼標簽;

5.離心結(jié)束后，用75%的酒精噴管身后，放回工作臺中，吸去上清，取1ml無血清細胞凍存液重懸細胞，使細胞密度5×106~1×107/mL，后移入貼好標簽的凍存管中，用封口膜密封管口;

6.直接將細胞放入-80度冰箱中，24h后可移入液氮中保存;

注意事項

1.不同細胞消化時間有差異，以實際鏡檢結(jié)果為準，大部分細胞回縮變圓并有少量細胞脫落即可中止消化，消化時間不宜過長；

2.應(yīng)選擇匯合度80%-90%左右，細胞處于對數(shù)生長期時進行凍存操作，確保細胞凍存時狀態(tài)最佳，凍存密度可根據(jù)細胞特性進行調(diào)整；

3.我們使用的無血清細胞凍存液，可直接凍存細胞于-80度，無需程序降溫。

CNE-1人鼻咽癌細胞系特點

形態(tài)特征

CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系的細胞形態(tài)為多角形或長方形，核大而明顯，胞質(zhì)豐富。

生長特性

CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系生長迅速，傳代周期短，適合進行實驗室研究。

生物學(xué)特性

CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系具有較高的增殖活性和侵襲性，適合用于研究鼻咽癌的生物學(xué)特性、藥物敏感性、基因表達等方面的內(nèi)容。

CNE-1人鼻咽癌細胞應(yīng)用

CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系可以用于亞砷酸體外抗人鼻咽癌細胞作用的實驗研究。

通過體外亞砷酸對CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系的增殖抑制，凋亡誘導(dǎo)及其相關(guān)蛋白表達的影響，探索亞砷酸發(fā)揮抗鼻咽癌細胞作用及誘導(dǎo)凋亡的可能機制。

方法

體外抗增殖研究

1. MTT法體外CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系培養(yǎng)于含不同濃度的亞砷酸、順鉑、5一氟脈嚓嚨，空白培養(yǎng)基作為對照;應(yīng)用研T法檢測24h、48h、72h和96h細胞的生長抑制率。

2. 倒置顯微鏡觀察CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系細胞生長狀態(tài)。

3. HE染色觀察CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系細胞形態(tài)。

4. 流式細胞儀(FCM)分析CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系細胞周期改變。

5. 細胞增殖標志檢測免疫組織化學(xué)染色方法檢測反映腫瘤細胞增殖活性的增殖細胞核抗原(PCNA)及人端粒酶催化亞基(hTRT)蛋白表達。

誘導(dǎo)凋亡研究

1.形態(tài)學(xué)采用HE染色、Hoechst 33342/PI雙染色在熒光顯微鏡下觀察細胞、透射電子顯微鏡觀察亞砷酸作用下CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系凋亡形態(tài)改變。

2流式細胞儀(F以)檢測凋亡的“亞二倍體”峰。

3. TIJNEL法原位觀察CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系凋亡細胞。

4. 免疫組織化學(xué)染色法(工HC)檢測亞砷酸誘導(dǎo)CNEI細胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bel一2、p53的表達。

結(jié)果

抗增殖作用

1. MTT法體外實驗顯示亞砷酸能顯著抑制CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系的增殖且有時間及濃度依賴性，隨著劑量增加和作用時間的延長亞砷酸抑制CNEI細胞增殖能力增強;相同質(zhì)量濃度的亞砷酸體外抑瘤能力優(yōu)于順鉑及5一氟脈嚓嚨。亞砷酸的Ic5。值在24h、48h、72h和96h分別為3.12 pg/mL、0.65 pg/InL、0.12p g/毗和0.08 pg/mL。

2.倒置顯徽鏡觀察亞砷酸作用組CNE-1人鼻咽癌貼壁細胞系體積縮小、折光性變?nèi)酰?003年5月林英城:亞砷酸體外抗人鼻咽癌細胞作用的實驗研究(碩士畢業(yè)論文丫貼壁細胞減少，脫落細胞增多。且隨著亞砷酸濃度的增加和作用時間的延長更為明顯。對照組細胞貼壁生長、鑲嵌狀排列鋪滿瓶壁。

3.HE染色未加藥對照組，細胞呈圓形、橢圓形，核漿比例大，可見核分裂相;亞砷酸作用組可見凋亡細胞。

4.FCM隨著亞砷酸濃度的增加和作用時間的延長，其GZ/M比例逐漸增高。

5.PCNA及hTRT免疫組織化學(xué)染色可見PCNA及hTRT陽性細胞平均灰度值隨著亞砷酸濃度的增加而逐漸減少。

參考文獻

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