OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞簡介

OCI-LY3細胞于1983年從一名復發(fā)時患有B細胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL，彌漫性大B細胞淋巴瘤，DLBCL，4B期)的52歲男性骨髓樣本中建立，是一種激活型的B淋巴細胞。OCI-LY3細胞在文獻中描述為EBV陰性，缺乏典型的t(8;14)易位。OCI-LY3細胞HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、MLV均呈陰性。

彌漫性大B細胞淋巴瘤是一種非霍奇金淋巴瘤，來源于淋巴結和淋巴組織的惡性腫瘤。

彌漫性大B細胞淋巴瘤是由血液中的B淋巴細胞惡性增殖引起的。這些異常細胞失去正常的生長調(diào)控，快速繁殖并侵犯周圍組織，導致炎癥反應和免疫功能下降。

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞形態(tài)特征

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱：OCI-LY3，人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞

細胞別稱：OCI-LY3; OCI-ly3; OCI-LY-3; Oci-Ly-3; OCI-Ly 3; OCILY-3; OCI-Ly03; OCI Ly3; OCILY3; Ly3; LY3;人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞

種屬來源：人

年齡性別：男性

組織來源：彌漫大B淋巴瘤

細胞形態(tài)：單個或成團生長的圓形細胞

生長特性：懸浮生長

STR位點信息：Amelogenin：X,Y;CSF1PO：10,12;D2S1338：24;D3S1358：14;D5S818：12;D7S820：11,12;D8S1179：12,13;D13S317：11;D16S539：11,12;D18S51：17;D19S433：13,15;D21S11：28;FGA：21,23;PentaD：9;PentaE：7,11;TH01：7,9。3;TPOX：8,12;vWA：17

保藏機構：ATCC;DSMZ; ACC-761

培養(yǎng)基：IMDM +20%FBS+1%PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

OCI-LY3細胞培養(yǎng)注意事項

OCI-LY3細胞大部分聚集成葡萄串狀懸浮生長，細胞團較大時需要吹打成小團，防止團塊中間的細胞因營養(yǎng)不足而死亡，小團塊無需處理。除非實驗需要，不建議將細胞吹散成單個細胞；

OCI-LY3細胞對血清要求高，應該使用優(yōu)質(zhì)血清進行培養(yǎng)，血清比例為20%；

隨著培養(yǎng)時間增加，會有部分細胞貼壁伸展的情況，傳代時可以輕輕吹打細胞貼壁面，吹下的細胞可以正常傳代，未吹下的細胞無需收集；

OCI-LY3細胞培養(yǎng)過程存在密度依賴的情況，細胞接種密度不宜過低；

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞培養(yǎng)操作說明

OCILY3細胞培養(yǎng)的基本條件

實驗室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風淋間，操作間

2. 儀器設備：超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水

器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：IMDM基礎培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0。25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴 75%酒精

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞復蘇步驟

1.準備：紫外線照臺 30min，提前打開水浴鍋設置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘(或者放在超凈工作臺常溫放 30min)。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達到 37℃時，戴上手套和護目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLOCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中，(若離心后細胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中)，標記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻)，將細胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

5)確定細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動)，第二天換液并檢查細胞密度。

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞傳代操作

細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞凍存準備

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿出OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞，在顯微鏡下觀察OCI-LY3細胞密度和細胞狀態(tài)，待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細胞密度達 80–90%時，可進行細胞凍存操作，以T25 瓶為例

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞凍存步驟

a. 收集細胞及細胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b. 根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液， 在細胞凍存管上貼上細胞標簽(細胞標簽上包含：細胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基)。

c. 將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時后，即可移入液氮中保存，標記好入庫位置和凍存日期。

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞換液方法

半換液法

1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等;(培養(yǎng)基提前預熱)；

2. 將培養(yǎng)瓶靜置5-10min，待細胞沉底;(肉眼觀察細胞沉底情況)；

3. 吸頭緊貼液體表面，小心吸出一半的培養(yǎng)基，轉移到離心管；

4. 1000rpm 4min離心，離心管里若有細胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶；

5. 原瓶補充一半的新鮮培養(yǎng)基。

離心換液法

1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等;(培養(yǎng)基提前預熱)；

2. 將所有細胞懸液轉移至離心管中；

3. 1000rpm，4min離心；

4. 培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；

離心完成后棄上清，加適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細胞沉淀，將細胞懸液接種回培養(yǎng)瓶中，混勻細胞，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞培養(yǎng)常見問題

1. OCI-LY3細胞碎片多?

懸浮細胞受到運輸或者其他因素導致細胞損傷時，容易產(chǎn)生細胞碎片，碎片可通過低速離心(750rpm，4min)去除;低速離心同時也會丟失細胞，故細胞密度低的時候不適用，細胞密度低時應正常轉速離心，保留細胞優(yōu)先。

2. OCI-LY3細胞生長慢或不生長怎么辦?

處理方法：懸浮細胞有密度依賴性，在高密度下狀態(tài)比較好，低密度時狀態(tài)較差，所以傳代比例要控制，細胞狀態(tài)不好時，傳代可以不用離心法，而是補液或者半換液的方式，以避免離心損失細胞。

3. OCI-LY3細胞為什么會貼壁?

細胞培養(yǎng)瓶靜置時間太長，細胞沉底后會出現(xiàn)少量貼壁現(xiàn)象，但這種貼壁非常松，吹一下或拍一下細胞就可以起來;此現(xiàn)象為正?，F(xiàn)象，無需特殊處理。

如果細胞貼的非常緊，形態(tài)已經(jīng)變成類似于上皮樣時，需考慮是否為細胞特性或者有其他因素刺激導致;日常操作避免染菌以及使用優(yōu)質(zhì)血清是預防懸浮細胞貼壁的有效方法。

4.OCI-LY3人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞復蘇后活率不高怎么處理?

OCI-LY3細胞復蘇后，死細胞多，活細胞只有少量幾顆?？梢灾劁亙商欤L緩慢，有少量小團，補5%血清。三四天后，細胞變多，團團變大，放置兩三天后，細胞變多。OCI-LY3細胞開始正常生長，長得快，OCI-LY3有細胞貼壁生長的現(xiàn)象。

OCI-LY3細胞應用研究

OCI-LY3細胞是一種常用的細胞系，?廣泛應用于生物學和醫(yī)學研究中。?這種細胞系通常用于研究淋巴細胞的生物學特性、?藥物篩選、?免疫學研究等領域。?例如，?它可以用于研究淋巴細胞的增殖、?分化、?凋亡等過程，?以及淋巴細胞與外界因素的相互作用。?此外，?OCI-LY3細胞還可以用于篩選針對淋巴細胞疾病的藥物，?如淋巴瘤等。?這些研究有助于我們更好地理解淋巴細胞的功能和疾病機制，?為開發(fā)新的治療方法和策略提供理論基礎。?

人淋巴瘤OC-Ly3細胞的免疫學特性研究和小鼠模型建立

以人彌漫大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)活化B細胞(activated B-cell,ABC)型細胞株OCH-Ly3為研究對象,探索ABC型的生物學特性及腫瘤相關分子的表達,以及小鼠成瘤條件。對不同條件下培養(yǎng)的OCI-Ly3細胞進行對比分析,觀察細胞生長形態(tài)及生物學特性;分析腫瘤相關抗原在OCI-Ly3細胞的表達情況;采用皮下和腹腔接種,在SCID小鼠中建立移植瘤動物模型。流式分析顯示,體外培養(yǎng)的OCI-Ly3細胞對c-Met,Ki-67和survivin等細胞增殖和凋亡相關標記物具有較高的表達;SCID小鼠皮下接種107OCI-Ly3細胞,成瘤率87。5%;腹腔接種2X107細胞,成瘤率75%;腫瘤組織符合人DLBCL的組織學特征,且分布彌散,具有較高的侵襲性。成功構建了人ABC型DLBCL的小鼠模型,并對OCI-Ly3細胞的體外培養(yǎng)特性和與腫瘤發(fā)生相關的免疫標記物進行了較為系統(tǒng)的檢測,為DLBCL的進一步研究提供了參考和工具。

彌漫大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是成人淋巴瘤中最常見的病理類型。Alizadeh 等人利用基因芯片技術將DLBCL分為2型:表達模式類似于正常的生發(fā)中心B細胞即GCB樣(germinal center B-cell-like),和表達模式類似于體外活化的外周血B細胞即ABC樣(activated B-cell-like)。研究表明,GCB型和ABC型在起源、致瘤機制、染色體異常部位等方面均有很大差別,且GCB型DLBCL的預后明顯好于ABC型。雖然DLBCL。分型對指導疾病的治療和預后具有較大的意義,但各型的發(fā)病機理及與治療和預后相關的因子,還有待于更深入的研究。DLBCL的相關動物模型為上述研究提供了良好的實驗工具。前期已對兩株GCB型人DLBCL細胞株(SUDHL-4和OCI-Ly19)進行了深入研究。研究選擇ABC型DLBCL細胞株OCI-Ly3,分別從皮下和腹腔注入重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠,探索在小鼠中建立人ABC樣DLBCL腫瘤模型的條件,及腫瘤生長和組織形態(tài)特點;并首次對培養(yǎng)的OCI-Ly3細胞進行免疫標記物分析。研究可為人DLBCL的進一步研究提供良好的動物模型。

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