TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞簡(jiǎn)介

TC-1，小鼠肺上皮細(xì)胞。1996年由Ken-Yu Lin等人取自C57BL/6小鼠的原代肺上皮細(xì)胞，使用人乳頭瘤病毒HPV-16 E6和E7永生化，然后用活化的ras癌基因轉(zhuǎn)化，最終形成了表達(dá)E6和E7的致瘤細(xì)胞系TC-1，同時(shí)驗(yàn)證了牛痘病毒疫苗Sig/E7/LAMP1抗TC-1腫瘤的作用機(jī)制。

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞分離自小鼠肺組織，可用于分析肺上皮細(xì)胞對(duì)外界因素的反應(yīng)。因此，小鼠肺部的TC-1可以作為疾病的體外模型。TC-1對(duì)于研Chemicalbook究肺的發(fā)育、損傷和修復(fù)是必不可少的。從事呼吸系統(tǒng)疾病如急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、囊性纖維化、肺氣腫和肺炎研究的人員通常依賴TC-1進(jìn)行研究。

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞分離自小鼠肺組織，TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞是肺細(xì)胞的主要類型之一，可用于分析肺上皮細(xì)胞對(duì)外界因素的反應(yīng)。

tc1細(xì)胞形態(tài)

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：TC-1，小鼠肺上皮細(xì)胞

細(xì)胞別稱：TC-1[JHU-1]; Tissue Culture-1;小鼠肺上皮細(xì)胞

種屬來源：小鼠

Breed/subspecies: C57BL/6.

組織來源：肺

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

培養(yǎng)基：90%1640+10%FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗(yàn)室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)-操作平臺(tái)、CO2 培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級(jí)水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍(lán)色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗(yàn)服，常噴 75%酒精

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1.準(zhǔn)備：紫外線照臺(tái) 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘(或者放在超凈工作臺(tái)常溫放 30min)。在操作臺(tái)上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到 37℃時(shí)，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLTC-1小鼠肺上皮細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時(shí)不斷輕輕搖動(dòng)凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機(jī)中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的 6cm 培養(yǎng)皿中，(若離心后細(xì)胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的 10cm 培養(yǎng)皿中)，標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫 30 個(gè) 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動(dòng))，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞傳代操作

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺(tái) 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時(shí)以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿出TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到 85%左右的時(shí)候即可進(jìn)行傳代;

4)打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個(gè)藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm 皿)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中(若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS)，輕輕晃動(dòng)以清洗細(xì)胞表面1-2次;

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)以便胰酶浸泡到每個(gè)細(xì)胞，消化 1-3min(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個(gè)角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對(duì)TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

7)將裝有TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中(配平)，1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫 30 個(gè) 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

8) 確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動(dòng))。第二天再觀察細(xì)胞密度。

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺(tái) 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時(shí)以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿出TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞，在顯微鏡下觀察TC-1細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá) 80–90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25 瓶為例

TC-1小鼠肺上皮細(xì)胞凍存步驟

a.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液， 在細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽(細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時(shí)后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫位置和凍存日期。

TC1細(xì)胞文獻(xiàn)溯源

1989年始，迄今為止，關(guān)于小鼠肺上皮細(xì)胞的文獻(xiàn)已有23篇。

在pubmed數(shù)據(jù)庫中用“TC-1 cell respiratory”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為2015年Savannah Maggio 在PLoS One. 發(fā)表的“Control of Francisella tularensis Intracellular Growthby Pulmonary Epithelial Cells”。

● 土拉弗朗西氏菌在多種宿主細(xì)胞類型中增殖，但其毒力與在巨噬細(xì)胞中生長(zhǎng)的能力相關(guān)。

● 研究使用小鼠肺上皮細(xì)胞系(TC-1細(xì)胞)探討土拉弗朗西氏菌在非巨噬細(xì)胞宿主細(xì)胞中的生長(zhǎng)控制要求。

● 細(xì)胞因子IFN-γ、TNF和IL-17A的組合可激活小鼠肺上皮細(xì)胞，抑制土拉弗朗西氏菌的細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)。

● 小鼠肺上皮細(xì)胞通過產(chǎn)生iNOS和活性氮中間體來控制土拉弗朗西氏菌的生長(zhǎng)。

● 小鼠肺上皮細(xì)胞在體內(nèi)和體外均可通過活性氮中間體抑制土拉弗朗西氏菌的細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)。

TC-1細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域

● 學(xué)者利用小鼠肺上皮細(xì)胞(TC-1)進(jìn)行基因工程方面的研究，例如建立小鼠肺腺癌模型，對(duì)于理解腫瘤發(fā)生、治療反應(yīng)和耐藥性機(jī)制具有不可估量的價(jià)值。肺上皮還是一種免疫活性屏障表面，可以感知?dú)獾拉h(huán)境的變化并與駐留和招募的免疫細(xì)胞相互作用。我們可以研究小鼠肺上皮細(xì)胞與局部神經(jīng)元和免疫系統(tǒng)的相互作用。

● 研究者可以利用TC-1研究肺腺癌的包括生長(zhǎng)、形態(tài)、致瘤性、轉(zhuǎn)移能力、外源代謝、突變狀態(tài)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性、細(xì)胞遺傳學(xué)和電導(dǎo)等生物特性。

● TC-1細(xì)胞可以用于生物被膜相關(guān)的研究，例如研究生物被膜對(duì)細(xì)胞黏附、侵襲和增殖的影響。

● TC-1細(xì)胞可用于研究肺損傷(調(diào)亡和炎癥)的自痊機(jī)制、干預(yù)方法。

● 研究者利用TC-1細(xì)胞用于藥物篩選和評(píng)估，例如對(duì)Incrna和脂多糖等潛在治療肺纖維化、砂肺和膿毒癥等疾病的候選藥物的敏感性。

● 在臨床上，TC-1細(xì)胞模型還可以用于研究膿毒癥等嚴(yán)重感染性疾病的病理機(jī)制，為治療提供參考依據(jù)。

淺析宮頸癌細(xì)胞TC-1在抗腫瘤藥物研發(fā)上的作用

宮頸癌是一種惡性腫瘤，主要病因是人乳頭瘤病毒HPV的持續(xù)感染，主要致病型有HPV16和HPV18。建立保持人宮頸癌生物學(xué)特性的小鼠宮頸癌模型，可以為進(jìn)一步研究宮頸癌的發(fā)病機(jī)制和研發(fā)治療宮頸癌的藥物提供了非常重要的科研工具。目前應(yīng)用較多的小鼠宮頸癌模型多為小鼠皮下注射HeLa細(xì)胞或CaSki細(xì)胞。TC-1 細(xì)胞為含有 HPV16 型 E6 / E7 基因的小鼠肺上皮細(xì)胞,通過接種 TC-1細(xì)胞也可以構(gòu)建進(jìn)行腫瘤實(shí)驗(yàn)研究的宮頸癌動(dòng)物模型。

鼠肺上皮細(xì)胞株TC-1、鼠源性的HPVl6陽性的腫瘤細(xì)胞株，可以廣泛用于宮頸癌的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。TC-1 細(xì)胞系可持續(xù)表達(dá) E6、E7 蛋白,具有和宮頸癌細(xì)胞相似的生物學(xué)行為,使建立鼠宮頸癌原位移植模型成為可能。主要表達(dá)在自然殺傷(NK)細(xì)胞、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)和腸內(nèi)皮細(xì)胞表面的CDl60，可結(jié)合配體sHIA-G1后能抑制血管增生，在抗腫瘤治療中為抑制新生血管形成提供良好分子靶標(biāo)。

如有研究者將C57BL/6小鼠接種TC-1宮頸癌細(xì)胞建立小鼠荷瘤模型，免疫磁珠分選小鼠脾臟細(xì)胞獲得CD8+T細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CDl60在CD8+T細(xì)胞上的表達(dá);流式細(xì)胞儀(FACS)分選CD8+T細(xì)胞獲得CDl60+CD8+T細(xì)胞群和CDl60-CD8+T細(xì)胞群，將兩群細(xì)胞分別與腫瘤細(xì)胞抗原肽熱休克蛋白70(HSP70)-TC-1復(fù)合物和去除CD8+T的脾細(xì)胞混合，兩群混合細(xì)胞各分為兩組，其中一組同時(shí)加入CDl60高親和力配體單純皰疹病毒侵入介導(dǎo)子(HVEM)的抗體，刺激培養(yǎng)6 d，羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(CFSE)標(biāo)記法檢測(cè)CD8+T細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞胞內(nèi)穿孔素和γ-干擾素(IFN-γ)的表達(dá)[1]。該研究發(fā)現(xiàn)CDl60在荷瘤小鼠的脾CD8+T細(xì)胞上表達(dá)升高且與其免疫活性功能的下降有關(guān);阻斷CDl60和HVEM的相互作用，部分逆轉(zhuǎn)了CD8+T細(xì)胞的免疫活性的抑制。

以TC-1細(xì)胞構(gòu)建的小鼠宮頸癌模型為研究對(duì)象，進(jìn)行抗腫瘤藥物研發(fā)的研究有很多。如有研究者觀察掌葉半夏脂溶性提取物(PE)對(duì)正常免疫功能荷瘤小鼠體內(nèi)免疫的影響[2]。實(shí)驗(yàn)選用宮頸癌TC-1細(xì)胞株種植于野生型C57BL/6小鼠右側(cè)頸背部皮下，建立正常免疫功能荷瘤小鼠模型，用于模擬正常機(jī)體患HPV(+)腫瘤后免疫功能狀態(tài)的改變。

人類疾病的動(dòng)物模型是具有人類疾病模擬性表現(xiàn)的動(dòng)物疾病材料，是實(shí)驗(yàn)假說和臨床假說的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，構(gòu)建小鼠宮頸癌模型為研究宮頸癌的發(fā)病機(jī)制、預(yù)防及治療策略提供了更為寬廣的研究基礎(chǔ)。美迪西藥效部經(jīng)過多年的經(jīng)驗(yàn)積累、多方驗(yàn)證和長(zhǎng)期實(shí)踐考驗(yàn)，已經(jīng)建立了完善的動(dòng)物模型庫，可根據(jù)客戶的需要提供各種有效的動(dòng)物模型，用來檢測(cè)藥物的有效性。

也有研究者研究了淫羊藿苷體外對(duì)致宮頸癌TC-1細(xì)胞的增殖抑制及促凋亡作用。方法是利用細(xì)胞培養(yǎng),用不同濃度的淫羊藿苷在一定的時(shí)間處理致宮頸癌TC-1細(xì)胞,光學(xué)顯微鏡直接觀察藥物對(duì)細(xì)胞的作用;MTT法檢測(cè)淫羊藿苷對(duì)TC-1細(xì)胞的增殖抑制作用;Dapi核染色、Annexin v-FITC/PI流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)細(xì)胞凋亡[3]。該研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷對(duì)TC-1細(xì)胞增殖有抑制和促凋亡作用,并呈時(shí)間濃度依賴性。

TC1細(xì)胞標(biāo)志物

E-cadherin、Cytokeratin 18、Aquaporin 5、Surfactant Protein-C和T1α。

TC1細(xì)胞參考文獻(xiàn)

Treatment of established tumors with a novel vaccine that enhances major histocompatibility class II presentation of tumor antigen.

Cancer Res. 56:21-26(1996)