BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞簡介

BEAS-2B(B210)人正常肺上皮細胞是一種來源于人類正常肺上皮細胞的細胞系，是廣泛用于研究肺上皮細胞生物學(xué)、毒理學(xué)和藥理學(xué)等領(lǐng)域的細胞系。BEAS-2B細胞由美國國立癌癥研究所(National Cancer Institute)的Barbara C. Reynolds教授于1988年從健康人的肺組織中分離和培養(yǎng)而來，是一種無限增殖的細胞系，具有上皮細胞的特性和功能。

BEAS-2B細胞用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆，BEAS-2B細胞保留了對血清反應(yīng)進行鱗關(guān)分化的能力，并有用于篩選誘導(dǎo)或影響分化及致癌的化學(xué)或生物制劑。BEAS-2B細胞角蛋白及SV40抗原染色陽性。

BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞形態(tài)特征

BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱：BEAS-2B，人支氣管上皮樣細胞

細胞別稱：Beas-2B; BEAS 2B; BEAS2B; Beas2B; Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B；人支氣管上皮樣細胞；人支氣管上皮樣細胞

種屬來源：人

組織來源：肺；支氣管；正常；上皮；病毒轉(zhuǎn)化

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

STR位點信息：Amelogenin：X, Y；D8S1179：13, 15；D21S1128, 30；D7S820：10, 13；CSF1PO：9, 12；D3S1358：15, 17；TH01：7, 9.3；D13S317：13；D16S539：12；D2S1338：22, 23；D19S433：13.2, 15.2；vWA：17, 18；THOX：6, 11；D18S51：18, 19；D5S818：12, 13；FGA：20, 24

保藏機構(gòu)：ATCC; CRL-9609 ECACC; 95102433

培養(yǎng)基：90%DMEM+10%FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞培養(yǎng)條件

beas2b細胞培養(yǎng)基本條件

實驗室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul黃色 20-200ul;藍色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴 75%酒精

人支氣管上皮細胞 beas-2b復(fù)蘇步驟

1.準備：紫外線照臺 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘（或者放在超凈工作臺常溫放 30min）。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭（已滅菌），培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達到 37℃時，戴上手套和護目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLBEAS-2B人宮頸癌細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中，（若離心后細胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中），標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細胞名稱。

4)用廢液泵（吸力不要太大）取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后（充分混勻），將細胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻BEAS-2B人宮頸癌細胞（一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

5)確定細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。（盡量平直放入不要晃動），第二天換液并檢查細胞密度。

人支氣管上皮細胞 beas-2b傳代操作

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出BEAS-2B人宮頸癌細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，當(dāng)細胞狀態(tài)良好，且密度達到 85%左右的時候即可進行傳代；

4)打開廢液泵，用廢液泵吸頭（吸力不要太大）取一個藍色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS（6cm 皿）到細胞培養(yǎng)皿中（若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS），輕輕晃動以清洗細胞表面1-2次；

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細胞，消化 1-3min（根據(jù)細胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時間長一點或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘）后，在顯微鏡下觀察細胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細胞胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對BEAS-2B人宮頸癌細胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)毎灿袀?，把培養(yǎng)瓶中所有細胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

7)將裝有BEAS-2B人宮頸癌細胞懸液的離心管放入離心機中（配平），1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后（充分混勻），將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞（一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

8) 確定細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。（盡量平直放入不要晃動）。第二天再觀察細胞密度。

人支氣管上皮細胞 beas-2b傳代小貼士

1.細胞密度：BEAS-2B細胞的密度應(yīng)該控制在70%-80%。過高的密度會導(dǎo)致細胞死亡，而過低的密度會影響實驗結(jié)果。

2. 培養(yǎng)條件：BEAS-2B細胞的培養(yǎng)條件應(yīng)該控制在37℃、5% CO2和95%相對濕度的條件下。保持培養(yǎng)條件的穩(wěn)定性對于細胞的生長和傳代至關(guān)重要。

3. 染色體異常：BEAS-2B細胞具有一定的染色體異常。因此，在進行染色體相關(guān)研究時需要注意這一點。

4. 無菌操作：在進行細胞培養(yǎng)和實驗操作時，需要進行無菌操作，以避免細菌和真菌等的污染。

人支氣管上皮細胞beas-2b凍存準備

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出Hela人宮頸癌細胞，在顯微鏡下觀察Hela細胞密度和細胞狀態(tài)，待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細胞密度達 80–90%時，可進行細胞凍存操作，以T25 瓶為例

人支氣管上皮細胞beas-2b凍存步驟

a.收集beas-2b細胞及細胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL beas-2b細胞懸液， 在細胞凍存管上貼上細胞標(biāo)簽（細胞標(biāo)簽上包含：細胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基）。

c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫位置和凍存日期。

BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞培養(yǎng)常見問題

1.BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞形態(tài)和atcc形態(tài)上皮樣不同?

BEAS-2B細胞為貼壁細胞，顯微鏡下呈典型上皮細胞樣，用不含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)時，BEAS-2B細胞具有典型的呼吸上皮細胞多邊形態(tài);用含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)時，密度低時細胞形態(tài)會呈長梭型，但密度高一些以后形態(tài)會變短。這是因為BEAS-2B細胞保留了對血清反應(yīng)進行鱗關(guān)分化的能力，培養(yǎng)時加與不加血清，會出現(xiàn)不同的細胞形態(tài)。

BEAS-2B常用的培養(yǎng)條件有2種：BEBM 支氣管上皮細胞生長培養(yǎng)基(不含血清)，或DMEM+10%FBS。用BEBM培養(yǎng)基培養(yǎng)時，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)先涂有溶解在BEBM培養(yǎng)基中的 0.01 mg/mL 纖連蛋白、0.03 mg/mL I 型牛膠原蛋白和 0.01 mg/mL 牛血清白蛋白的混合物。

2.BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞什么時候傳代?

80%左右匯合度時傳代，完全匯合會使細胞末端分化。

3.BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞消化時間?

放入37℃培養(yǎng)箱消化2分鐘左右。(不同的胰酶牌子存在差異，及時觀察，以實際情況為主。

BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞優(yōu)點

1. 來源穩(wěn)定

BEAS-2B細胞由美國國立癌癥研究所(National Cancer Institute)的Barbara C. Reynolds教授于1988年從健康人的肺組織中分離和培養(yǎng)而來。因此，BEAS-2B細胞的來源穩(wěn)定，能夠提供一致的研究結(jié)果。

2. 易于培養(yǎng)

BEAS-2B細胞易于培養(yǎng)，可以在常規(guī)的細胞培養(yǎng)條件下生長。其培養(yǎng)基成分簡單，不需要特殊的培養(yǎng)條件或培養(yǎng)設(shè)備。

3. 增殖速度快

BEAS-2B細胞的增殖速度較快，可以在較短時間內(nèi)得到大量的細胞。這對于大規(guī)模的實驗和藥物篩選具有重要意義。

4. 穩(wěn)定性好

BEAS-2B細胞具有穩(wěn)定的染色體組成和基因表達模式，可以長期穩(wěn)定地生長和傳代。這使得BEAS-2B細胞成為研究肺上皮細胞生物學(xué)和疾病機制的理想細胞模型。

5. 表達多種肺上皮細胞標(biāo)志物

BEAS-2B細胞表達多種肺上皮細胞標(biāo)志物，如細胞角蛋白(cytokeratin)、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)等。這些標(biāo)志物的表達水平可以用于評估BEAS-2B細胞的表型特征，以及研究肺上皮細胞的生理和病理過程。

6. 可用于研究肺部疾病

BEAS-2B細胞可以用于研究肺癌、哮喘、慢性阻塞性肺病等肺部疾病的發(fā)病機制和治療方法。例如，可以通過BEAS-2B細胞模擬空氣污染、化學(xué)品或藥物的毒性作用，評估它們對肺上皮細胞的影響。

7. 可用于毒性評估

BEAS-2B細胞可以用于評估化學(xué)品、藥物、凈化劑等的毒性作用。這些毒性評估可以在體外進行，避免動物實驗和人體試驗，具有較高的安全性和可靠性。

8. 用于開發(fā)肺上皮細胞相關(guān)疾病藥物

BEAS-2B細胞用于開發(fā)肺上皮細胞相關(guān)疾病的藥物具有重要意義。例如，可以使用BEAS-2B細胞來篩選和評估哮喘、肺癌等疾病的藥物，為疾病治療提供新的思路和方法。

9. 用于研究病毒感染機制

BEAS-2B細胞可以用于研究病毒感染機制和病毒的致病性。例如，可以使用BEAS-2B細胞研究呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)的感染機制和致病性，為疾病的預(yù)防和治療提供新的思路和方法。

BEAS-2B人支氣管上皮樣細胞應(yīng)用

BEAS-2B細胞是從肺癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出的上皮細胞。這個細胞引種自ATCC CRL-9609，又可被稱為支氣管上皮細胞。BEAS-2B細胞系最初是通過使用腺病毒12-SV40雜交病毒感染，并通過連續(xù)細胞傳代建立的永生化細胞系，它保留了對血清反應(yīng)進行鱗關(guān)分化的能力，這種能力可用于篩選誘導(dǎo)或影響分化及致癌的化學(xué)或生物制劑，因此 BEAS-2B細胞被認為是研究藥物代謝活化作用和呼吸系統(tǒng)腫瘤以及分子機制理想的細胞模型。

1.BEAS-2B 細胞在成骨和成脂分化方面與 hMSCs 具有相似的潛力

將細胞分化誘導(dǎo)21天后，用油紅染色分化脂肪細胞中的脂質(zhì)液泡，然后使用茜素紅染色分化骨細胞中的鈣沉積。結(jié)果表明BEAS-2B和在成骨發(fā)生或脂肪發(fā)生方面均顯示出幾乎相同的陽性染色，這說明BEAS-2B 細胞能像hMSC1細胞一樣能在誘導(dǎo)后表現(xiàn)出很強的骨細胞和脂肪細胞分化能力。

2.BEAS-2B可用于篩選化學(xué)和生物制劑誘導(dǎo)

目前，BEAS-2B已被廣泛用于研究肺癌發(fā)生的細胞和分子機制，其中包括上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在肺癌和肺炎球菌感染中的作用等。此外，BEAS-2B細胞系已被用作體外細胞模型，用于檢測和篩選具有潛在肺毒性或肺部致癌性的各種化學(xué)和生物制劑。

3.使用CRISPR-U在BEAS-2B細胞中實現(xiàn)基因編輯

基因編輯和細胞模型的建立對于推進功能基因組學(xué)、信號通路、新陳代謝、細胞死亡、藥物發(fā)現(xiàn)、藥物反應(yīng)和癌癥研究等領(lǐng)域具有重要的意義。BEAS-2B細胞作為研究藥物代謝活化作用和呼吸系統(tǒng)腫瘤以及分子機制的理想細胞模型，已經(jīng)有許多研究人員利用CRISPR/Cas9技術(shù)對其進行編輯以研究癌癥特征、耐藥機制的披露、癌癥治療、細胞死亡研究、功能基因組學(xué)、信號通路、藥物發(fā)現(xiàn)、藥物反應(yīng)和細胞治療等多種具有重要意義的課題。

BEAS-2B細胞應(yīng)用領(lǐng)域總結(jié)

人正常肺上皮細胞(BEAS-2B細胞)在維持肺部免疫穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著重要作用，對我們的肺提供保護，免受肺部遭受空氣中的病原體和污染物的侵害。

BEAS-2B細胞具有高度的自我復(fù)制能力，可以形成具有一致性的克隆。這一特性使得其在組織工程、細胞治療等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。

學(xué)者通過對BEAS-2B細胞進行免疫組化和細胞周期分析了解細胞的增殖和凋亡情況，以及細胞的分化狀態(tài)，進而研究肺癌的發(fā)病機制和藥物治療效果。

BEAS-2B細胞中的基因表達受到多種因素的影響，包括環(huán)境因素、遺傳因素等。通過研究人抗原調(diào)控作用，以及基因表達的變化，我們可以更好地了解肺上皮細胞的生理和病理過程，為肺癌的預(yù)防和治療提供新的思路和方法。

有學(xué)者利用BEAS-2B細胞研究肺部的氧化應(yīng)激和針對炎癥反應(yīng)的敏感性;還有學(xué)者通過基因芯片和信號通路的手段利用BEAS-2B細胞研究外泌體、hnrnp a2/b1等分子在肺癌發(fā)生和發(fā)展中的作用，以便更好地了解肺癌的發(fā)病機制。

BEAS-2B細胞文獻溯源

1988年始，迄今為止，關(guān)于人支氣管上皮樣細胞的文獻已有2231篇。

在pubmed數(shù)據(jù)庫中用“BEAS-2B cell line”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為1988年P(guān) Amstad 在Mol Carcinog. 發(fā)表的“Neoplastic transformation of a human bronchialepithelial cell line by a recombinant retrovirusencoding viral Harvey ras”。

beas-2b細胞文獻概述

通過v-Ha-ras癌基因激活的人支氣管上皮細胞系BEAS-2B在裸鼠體內(nèi)可快速轉(zhuǎn)化為間變性癌，且腫瘤細胞系的v-Ha-ras腫瘤轉(zhuǎn)化效率較正常細胞系高，支持了“永生化”假設(shè)。

細胞標(biāo)志物：Epithelial cell marker、c-Met Receptor和T1α。

參考文獻

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