MFC小鼠胃癌細(xì)胞簡(jiǎn)介

小鼠胃癌細(xì)胞(Mouse Forestomach Carcinoma cells，簡(jiǎn)稱MFC)是一種源自小鼠胃部的癌細(xì)胞系，通常用于癌癥研究，特別是在研究胃癌的發(fā)展和治療策略方面。MFC細(xì)胞保留了胃癌細(xì)胞的特征，包括上皮細(xì)胞樣形態(tài)和可能與胃癌發(fā)生相關(guān)的基因和蛋白質(zhì)表達(dá)。

MFC細(xì)胞系來(lái)源于小鼠癌癥模型，廣泛用于癌癥研究。這些細(xì)胞本質(zhì)上是上皮細(xì)胞，是研究胃腫瘤發(fā)生機(jī)制的重要工具。MFC細(xì)胞表現(xiàn)出胃癌的典型特征，包括快速增殖、侵襲行為，以及當(dāng)異種移植到免疫功能受損的小鼠中時(shí)形成腫瘤的能力。研究人員經(jīng)常使用這種細(xì)胞系來(lái)研究參與癌癥進(jìn)展的分子途徑，以及評(píng)估針對(duì)這種惡性腫瘤的潛在治療劑。

MFC細(xì)胞對(duì)于研究特定基因和蛋白質(zhì)在癌癥中的作用特別有用。它們通常用于基因表達(dá)研究、敲除實(shí)驗(yàn)和蛋白質(zhì)相互作用測(cè)定。該細(xì)胞系還可作為測(cè)試化療藥物療效和了解耐藥性機(jī)制的模型。此外，MFC細(xì)胞系用于探索腫瘤微環(huán)境的研究，包括癌癥細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞之間的相互作用?？傊?，MFC細(xì)胞系是促進(jìn)對(duì)癌癥生物學(xué)的理解和開(kāi)發(fā)新的治療策略的寶貴資源。

MFC小鼠胃癌細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：MFC，小鼠前胃癌細(xì)胞

種屬來(lái)源：小鼠

組織來(lái)源：胃

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

保藏機(jī)構(gòu)：CLS; 300652；KCB; KCB；92020YJ

培養(yǎng)基：DMEM+10%FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

MFC細(xì)胞形態(tài)

MFC小鼠胃癌細(xì)胞培養(yǎng)操作說(shuō)明

mfc細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗(yàn)室條件

1. 無(wú)菌環(huán)境：無(wú)菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)-操作平臺(tái)、CO2 培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級(jí)水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍(lán)色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無(wú)菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗(yàn)服，常噴 75%酒精

MFC小鼠胃癌細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1.準(zhǔn)備：紫外線照臺(tái) 30min，提前打開(kāi)水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘（或者放在超凈工作臺(tái)常溫放 30min）。在操作臺(tái)上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭（已滅菌），培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到 37℃時(shí)，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLMFC小鼠胃癌細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時(shí)不斷輕輕搖動(dòng)凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機(jī)中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的 6cm 培養(yǎng)皿中，（若離心后細(xì)胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的 10cm 培養(yǎng)皿中），標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵（吸力不要太大）取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后（充分混勻），將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫(huà)“8”字法鋪勻MFC小鼠胃癌細(xì)胞（一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫(huà) 30 個(gè) 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過(guò)夜。（盡量平直放入不要晃動(dòng)），第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

MFC小鼠胃癌細(xì)胞傳代操作

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺(tái) 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時(shí)以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出MFC小鼠胃癌細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到 85%左右的時(shí)候即可進(jìn)行傳代；

4)打開(kāi)廢液泵，用廢液泵吸頭（吸力不要太大）取一個(gè)藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS（6cm 皿）到細(xì)胞培養(yǎng)皿中（若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS），輕輕晃動(dòng)以清洗細(xì)胞表面1-2次；

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)以便胰酶浸泡到每個(gè)細(xì)胞，消化 1-3min（根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘）后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個(gè)角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對(duì)MFC細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無(wú)菌離心管中。

7)將裝有MFC細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中（配平），1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后（充分混勻），將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫(huà)“8”字法鋪勻細(xì)胞（一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫(huà) 30 個(gè) 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

8) 確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。（盡量平直放入不要晃動(dòng)）。第二天再觀察細(xì)胞密度。

MFC細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺(tái) 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時(shí)以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出MFC小鼠胃癌細(xì)胞，在顯微鏡下觀察MFC細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá) 80–90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25 瓶為例

MFC小鼠胃癌細(xì)胞凍存步驟

a.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液， 在細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽（細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基）。

c.將凍存管入庫(kù)到-80 度凍存盒里，放置 24 小時(shí)后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫(kù)位置和凍存日期。

MFC小鼠胃癌細(xì)胞文獻(xiàn)溯源

1974年始，迄今為止，關(guān)于小鼠胃癌細(xì)胞的文獻(xiàn)已有220篇。

在pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中用“MFC cell line gastric carcinoma”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為1987年S S Qian在《中華腫瘤雜志》發(fā)表的“Establishment of a mouse forestomach carcinoma cell line (MFC) with spontaneous hematogenous metastasis and preliminary study of its biological characteristics”。

MFC小鼠胃癌細(xì)胞概述

該研究成功建立了一種小鼠前胃癌細(xì)胞系(MFC)，這種細(xì)胞易于通過(guò)血液轉(zhuǎn)移到肺部。MFC細(xì)胞經(jīng)過(guò)了連續(xù)的傳代，表現(xiàn)出缺乏接觸抑制的特點(diǎn)，并且具有多樣的細(xì)胞形態(tài)。在超微結(jié)構(gòu)上觀察到豐富的微絨毛和纖毛，細(xì)胞核形狀不規(guī)則。MFC細(xì)胞的倍增時(shí)間相對(duì)較短，有較高的有絲分裂指數(shù)。該細(xì)胞系對(duì)于同種移植的效率較高，并且能產(chǎn)生自發(fā)的肺部轉(zhuǎn)移。綜合而言，MFC細(xì)胞系保留了原發(fā)腫瘤的特征，可用于進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療、研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制以及分離特定的細(xì)胞亞群。

MFC小鼠胃癌細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域

MFC(小鼠胃癌細(xì)胞)是由錢(qián)書(shū)森、高進(jìn)等于1985年建立的，利用源自615小鼠前胃鱗癌移植瘤FC瘤組織，小塊法培養(yǎng)得到，已傳132代。MFC細(xì)胞細(xì)胞在615小鼠皮下移植100%成功。有學(xué)者利用MFC細(xì)胞研究其基因型、趨器官性和免疫監(jiān)視之間的聯(lián)系，以及不同轉(zhuǎn)移模式。

MFC細(xì)胞作為一種胃腫瘤細(xì)胞模型，可用于研究胃腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和治療策略。學(xué)者利用MCF細(xì)胞研究胃癌發(fā)病機(jī)制的分子機(jī)制和耐藥機(jī)制、設(shè)計(jì)新的靶向治療方法，提高患可以者的生存率;通過(guò)研究新抗原肽在MFC細(xì)胞中的表達(dá)，可以探索胃腫瘤的免疫原性及其在疫苗開(kāi)發(fā)中的應(yīng)用。

研究人員利用納米粒子技術(shù)，可以研究MFC細(xì)胞的增殖機(jī)制和調(diào)控因素，為胃腫瘤的藥物治療提供新的思路。研究者利用MFC細(xì)胞研究小鼠、大鼠胃內(nèi)菌群和丁酸等微生物代謝產(chǎn)物對(duì)胃腫瘤的影響，有助于揭示胃腫瘤的發(fā)病機(jī)制和尋找新的預(yù)防、治療策略。