常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨······
發(fā)布時間:2024-07-01 17:01:53 細胞資源庫平臺 訪問量:274
小鼠鱗狀細胞癌細胞系(Mouse Squamous Cell Carcinoma Cell Line)是一種用于科學研究和醫(yī)學研究的細胞模型。這種細胞系是從小鼠的鱗狀細胞癌腫瘤中分離出來的,并在實驗室條件下進行培養(yǎng)和傳代,以供研究使用。
細胞名稱:SCC7,小鼠鱗狀細胞癌細胞系
細胞別稱:SCC-7;SCCVII/St;SCCVII;SCC VII;小鼠鱗狀細胞癌細胞系
種屬來源:小鼠
組織來源:皮膚
生長特性:貼壁生長
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞類型:鱗狀癌細胞系
保藏機構:中國典型培養(yǎng)物保藏中心細胞庫
培養(yǎng)基:DF12+10% FBS+1%PS
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
SCC7小鼠頭頸鱗癌細胞系培養(yǎng)操作說明
實驗室條件
1. 無菌環(huán)境:無菌室包括更衣室,緩沖間,風淋間,操作間
2. 儀器設備:超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴
鍋-復蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水
3. 器材耗材:玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍色 100-1000ul)、濾器,吸管,多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿,培養(yǎng)瓶等。
4. 試劑:DF12基礎培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs
操作者工作范疇
1. 無菌操作:洗手,戴手套,穿實驗服,常噴 75%酒精
1.準備:紫外線照臺 30min,提前打開水浴鍋設置 37℃,培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘(或者放在超凈工作臺常溫放 30min)。在操作臺上擺放好物品,左邊放完全培養(yǎng)液,1mL 槍頭(已滅菌),培養(yǎng)皿,右上角放廢液缸,1mL 移液槍,3mL 巴氏管。檢查離心機,廢液泵。
2)待水浴鍋溫度達到 37℃時,戴上手套和護目鏡,從-196℃液氮罐中取出凍存管,將含有1 mLSCC7小鼠鱗狀細胞癌細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,同時不斷輕輕搖動凍存管,盡量保證凍存管內細胞 1min 內融化,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻, 移入離心機中 100rpm 離心 3min,以 75%酒精噴凍存管外部,移入無菌操作臺內。
3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中,(若離心后細胞量較多,可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中),標記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細胞名稱。
4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清,取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻),將細胞懸液加入到培養(yǎng)皿中,將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻SCC7小鼠鱗狀細胞癌細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻),最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。
5)確定SCC7小鼠鱗狀細胞癌細胞已鋪勻后,再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動),第二天換液并檢查細胞密度。
1) 準備工作:紫外線照臺 30min,準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品:培養(yǎng)液,胰酶,PBS(試劑提前拿出 37℃預熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿,巴士管,離心管(已滅菌),槍頭(已滅菌),移液槍,廢液缸。檢查離心機,廢液泵;
2)從培養(yǎng)箱拿出SCC7小鼠鱗狀細胞癌細胞,在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài),當細胞狀態(tài)良好,且密度達到 85%左右的時候即可進行傳代;
4)打開廢液泵,用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個藍色槍頭吸走上清廢液,用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm 皿)到細胞培養(yǎng)皿中(若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS),輕輕晃動以清洗細胞表面1-2次;
5)用廢液泵吸走 PBS 廢液,加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中,拿起培養(yǎng)皿輕輕轉動以便胰酶浸泡到每個細胞,消化 1-3min(根據細胞貼壁情況判斷,貼壁較牢的消化時間長一點或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后,在顯微鏡下觀察細胞是否變圓變亮,一旦發(fā)現(xiàn)大量細胞胞質回縮,細胞間隙增大,即將脫離培養(yǎng)皿底,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
6)用 1ml 移液槍輕柔吹打,保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到,邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產生氣泡,因其對SCC7小鼠鱗狀細胞癌細胞有傷害;需輕柔吹打,用力吹打對細胞也有傷害),把培養(yǎng)瓶中所有細胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。
7)將裝有SCC7小鼠鱗狀細胞癌細胞懸液的離心管放入離心機中(配平),1000 轉離心 3-5min,用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清,取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后(充分混勻),將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻),最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。
8) 確定細胞已鋪勻后,再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動)。第二天再觀察細胞密度。
1) 準備工作:紫外線照臺 30min,準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品:培養(yǎng)液,胰酶,PBS(試劑提前拿出 37℃預熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿,巴士管,離心管(已滅菌),槍頭(已滅菌),移液槍,廢液缸。檢查離心機,廢液泵;
2)從培養(yǎng)箱拿出SCC7小鼠鱗狀細胞癌細胞,在顯微鏡下觀察Hela細胞密度和細胞狀態(tài),待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下,細胞密度達 80–90%時,可進行細胞凍存操作,以T25 瓶為例
a.收集scc7細胞株及細胞培養(yǎng)液,將培養(yǎng)瓶內所有培養(yǎng)基轉入無菌離心管,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數。
b.根據scc7細胞系數量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液, 在細胞凍存管上貼上細胞標簽(細胞標簽上包含:細胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基)。
c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里,放置 24 小時后,即可移入液氮中保存,標記好入庫位置和凍存日期。
C3H小鼠。SCC7細胞是一種被用于研究皮膚癌和癌癥生物學的細胞系。SCC7細胞來自于C3H小鼠,是一種小鼠皮膚鱗狀細胞癌細胞系。C3H小鼠是實驗室中常用的小鼠品系,廣泛應用于癌癥研究和藥物篩選等領域。SCC7細胞的原始來源可能與C3H小鼠體內的皮膚鱗狀細胞癌病灶有關。這些細胞被提取、培養(yǎng)和保存,以供科學家進行實驗研究和疾病模型研究。
scc7細胞培養(yǎng)基為DF12+10% FBS+1%PS。
1996年始,迄今為止,關于小鼠頭頸鱗癌細胞系的文獻已有118篇。
在pubmed數據庫中用“SCC7 murine”搜索該關鍵詞,第一篇為1996年P G Braunschweiger在Radiat Res.發(fā)表的“Radioresistance in murine solid tumors induced by interleukin-1”。
IL-1α對腫瘤細胞放射敏感性的影響尚未充分研究。
IL-1α給藥后,腫瘤克隆細胞表現(xiàn)出放射抵抗性,特征是放射劑量參數的變化,類似于缺氧條件下的放射抵抗性。
IL-1α與替拉帕胺具有協(xié)同抗腫瘤作用,表明放射抵抗性與缺氧有關● 放射抵抗性是暫時的,可能在12小時內發(fā)生重新供氧。
在有氧條件下,IL-1α對SCC-7細胞的無直接影響,但在原代培養(yǎng)中可誘導放射抵抗性。
腫瘤巨噬細胞產生的氧化應激可能是IL-1α在體外誘導放射抵抗性的原因。
體內和體外的氧化應激響應可能具有不同的機制來調節(jié)腫瘤放射敏感性。
小鼠頭頸鱗癌細胞(SCC7)是一種高糖酵解的細胞類型,這一特性在腫瘤細胞中常見,因為它們通常在低氧環(huán)境下進行代謝,需要快速獲取能量。
SCC7具有強大的增殖能力,研究人員常用SCC7來研究頭頸鱗癌的增殖和凋亡,以及免疫過程在當中起到的關鍵作用。
由于頭頸鱗癌腫瘤具有很強的生長和轉移能力,學者也經常利用SCC7細胞研究糖基化和自糖基化在細胞形態(tài)和功能中起關鍵作用。
研究人員可以利用SCC7細胞構建裸鼠/SCID小鼠/NOD-SCID小鼠荷瘤鼠模型,來研究頭頸鱗癌的發(fā)病機制、治療策略和預后分析。預后分析通常包括對小鼠存活時間、腫瘤體積、轉移情況等參數的監(jiān)測和統(tǒng)計分析。研究者可能會采用生存分析方法,比如Kaplan-Meier生存曲線和Cox比例風險模型,來評估不同處理組間的生存差異和相關因素的影響。
SCC7還具有基因沉默機制,用于調節(jié)細胞基因表達;外泌體細胞間可以起到信息傳遞的作用。研究人員可以利用SCC7研究這些機制,使用納米藥物靶向干預靶點,抑制腫瘤生長和轉移,同時增強免疫系統(tǒng)的反應。
在治療方面,研究人員可以利用移植該細胞的荷瘤鼠模型研究丹酚酸等藥物的抑癌和促凋亡機制;以及使用金納米棒作為化療耐藥干預手段,理解頭頸鱗癌的生物學特征和潛在治療策略。
CK5、CK14、CK17、p63、E-cadherin等,這些標志物通常參與了鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展和轉移過程。
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨······
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