宮頸癌細胞hela的由來

HeLa細胞是第一個來自人體組織經(jīng)連續(xù)培養(yǎng)獲得的非整倍體上皮樣細胞系，是由GeyGO等在1951年從一位31歲美國黑人婦女海瑞塔?拉克斯（Henrietta Lacks）的宮頸癌組織建立的，經(jīng)原始組織切片重新觀察，Jones等將其診斷為腺癌。HeLa細胞角蛋白陽性，p53表達量較低，但表達正常水平的pRB（視網(wǎng)膜母細胞瘤抑制因子）。HeLa細胞含有人乳頭狀瘤病毒HPV18序列，需在2級生物安全防護臺操作。HeLa細胞可以用于3D細胞培養(yǎng)和生物制品生產(chǎn)，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主，還可用于篩選具有侵襲潛力的大腸桿菌菌株。

不同于其他一般的人類細胞，此細胞株不會衰老致死，并可以無限分裂下去。此HeLa細胞系跟其他癌細胞系相比，增殖異常迅速。HeLa細胞是一種人工培養(yǎng)、具有無限增殖能力的細胞。

Hela 人宮頸癌細胞產(chǎn)品信息

細胞名稱：HELA，人宮頸癌細胞

別稱：HELA; Hela; He La; He-La; Henrietta Lacks cells; Helacyton gartleri

種屬來源：女人，31歲

組織來源：子宮

細胞形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

倍增時間：~32-48 hours

培養(yǎng)基：90%MEM+10% FBS+1%PS

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

保藏機構(gòu)：ATCC；CCL-2 BCRC； 60005 BCRJ；0100 DSMZ； ACC-57 ECACC；08011102 ECACC；93021013

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

基因表達情況：Lysophosphatidylcholine (lyso-PC) induces AP-1 activity and c-jun N-terminal kinase activity (JNK1) by a protein kinase C-independent pathway. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

hela細胞形態(tài)特征

Hela人宮頸癌細胞培養(yǎng)操作說明

細胞培養(yǎng)的基本條件

實驗室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細胞、離心機-離心收集細胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復蘇細胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細胞、純水儀-制備一級水

器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul；黃色 20-200ul；藍色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實驗服，常噴 75%酒精

人宮頸癌細胞Hela復蘇步驟

1.準備：紫外線照臺 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘（或者放在超凈工作臺常溫放 30min）。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭（已滅菌），培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達到 37℃時，戴上手套和護目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLHela人宮頸癌細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中，（若離心后細胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中），標記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細胞名稱。

4)用廢液泵（吸力不要太大）取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后（充分混勻），將細胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻Hela人宮頸癌細胞（一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

5)確定細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。（盡量平直放入不要晃動），第二天換液并檢查細胞密度。

Hela人宮頸癌細胞復蘇小貼士

1. 進細胞間前檢查 CO2%壓力；

2. 離心時間為 3min，速度為 1000 轉(zhuǎn)，不要離心太久，避免對細胞傷害較大；

3. 重懸細胞時不要吹打過猛過久，避免對細胞的傷害較大；

4.使用過程中，巴氏管，槍頭都不要重復使用，且取液時不要碰壁；

5.離心后應(yīng)盡快去掉上清凍存液，防止其在常溫下對細胞產(chǎn)生較大毒性。

Hela人宮頸癌細胞傳代操作

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出Hela人宮頸癌細胞，在顯微鏡下觀察細胞密度和細胞狀態(tài)，當細胞狀態(tài)良好，且密度達到 85%左右的時候即可進行傳代；

4)打開廢液泵，用廢液泵吸頭（吸力不要太大）取一個藍色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS（6cm 皿）到細胞培養(yǎng)皿中（若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS），輕輕晃動以清洗細胞表面1-2次；

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細胞，消化 1-3min（根據(jù)細胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時間長一點或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘）后，在顯微鏡下觀察細胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細胞胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對Hela人宮頸癌細胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)毎灿袀?，把培養(yǎng)瓶中所有細胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

7)將裝有Hela人宮頸癌細胞懸液的離心管放入離心機中（配平），1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細胞后（充分混勻），將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細胞（一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細胞。

8) 確定細胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。（盡量平直放入不要晃動）。第二天再觀察細胞密度。

Hela人宮頸癌細胞傳代小貼士

1)一定要防止細胞過消化，因過消化，使細胞成團，不均勻，且對細胞傷害很大，影響細胞貼壁和導致生長狀態(tài)差等。

2)若在加入未經(jīng) 37℃溫育的胰酶（指僅為室溫）消化細胞時，即使細胞已經(jīng)變圓，且透亮，用完全培養(yǎng)基終止消化后仍很難吹打下來。那是因為胰酶的溫度不適宜，可把殘留有胰酶作用的培養(yǎng)皿放到 CO2 培養(yǎng)箱中，放置 2-3min，讓胰酶在其最佳溫度（37℃）下消化細胞。

3)用力吹打和氣泡產(chǎn)生對細胞都有傷害，故應(yīng)輕柔吹打并盡量減少氣泡產(chǎn)生，吹打結(jié)束使細胞盡量分離成單個細胞。

4)一般 6cm 加完全培養(yǎng)基 5ml，10cm 培養(yǎng)皿加培養(yǎng)基 12-15ml，T25 瓶加培養(yǎng)基 8ml。

Hela人宮頸癌細胞凍存準備

1) 準備工作：紫外線照臺 30min，準備好細胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出Hela人宮頸癌細胞，在顯微鏡下觀察Hela細胞密度和細胞狀態(tài)，待細胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細胞密度達 80–90%時，可進行細胞凍存操作，以T25 瓶為例

Hela人宮頸癌細胞凍存步驟

a.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液， 在細胞凍存管上貼上細胞標簽（細胞標簽上包含：細胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基）。

c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時后，即可移入液氮中保存，標記好入庫位置和凍存日期。

Hela人宮頸癌細胞凍存小貼士

若是不確定細胞的冷凍條件或者細胞比較特殊，在做冷凍保存的同時，也可以用10%DMSO+90%FBS凍存幾管，或者凍存后隔天在復蘇一管測試，以防止冷凍失敗。

HeLa人宮頸癌細胞特點

1.細胞顆粒感較重

Hela細胞傳代培養(yǎng)時細胞內(nèi)黑點及細胞外顆粒較多，建議使用優(yōu)質(zhì)血清及培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞；

2.傳代、復蘇注意細胞狀態(tài)

Hela細胞消化或者復蘇操作不當容易導致細胞死亡裂解產(chǎn)生大量碎片及顆粒，進而影響活細胞狀態(tài)，注意消化或復蘇過程盡量輕柔，嚴格控制消化時間和復蘇操作規(guī)范，傳代或復蘇24h后建議觀察細胞，建議換液一次去除死亡細胞；

3.Hela細胞生長較快

Hela細胞增殖能力強，生長速度快，通常能夠以48小時的速度倍增，注意及時換液及傳代，平時培養(yǎng)可以略微多加點培養(yǎng)基；

4.Hela細胞極易出現(xiàn)交叉污染

Hela細胞作為最早建立的人源細胞系，目前已經(jīng)有200余種衍生細胞，該細胞污染并取代了諸多細胞系，在培養(yǎng)過程中應(yīng)注意操作，避免交叉污染其他細胞。

5.培養(yǎng)條件過酸或過堿，則可呈現(xiàn)為梭形而似成纖維細胞樣。

Hela人宮頸癌細胞培養(yǎng)常見問題

1 .hela細胞傳代的時候，細胞密度怎么計算?

嚴格意義上，hela細胞密度需要收集細胞懸液計數(shù)細胞數(shù)量，但在實際培養(yǎng)過程中，并不需要為了精確控制細胞數(shù)量而消化細胞計數(shù)。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養(yǎng)容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養(yǎng)容器底部，有細胞的區(qū)域占總區(qū)域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導致并不嚴謹，但也是相當直觀、簡便的表現(xiàn)細胞狀態(tài)的一種方式；

2 培養(yǎng)過程中hela細胞碎片較多怎么處理？

hela細胞內(nèi)的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現(xiàn)象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應(yīng)、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內(nèi)顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。

細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產(chǎn)物，可以先吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗清除，再加新的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。潤洗不能清除的可以換液清洗后等細胞密度70-80%左右消化處理細胞，消化完成后加完全培養(yǎng)基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm（約150g）離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

3.hela細胞消化時間多久？

hela細胞系消化1-2分鐘即可。需要注意的是，該細胞貼壁能力較弱。需要注意的是每個客戶用的胰酶活力及消化步驟、試劑都是不一樣的，不能完全規(guī)定消化時間，以實際消化效果和客戶經(jīng)驗為準。

4.hela細胞一分兒多久長滿？

hela細胞系跟其它癌細胞相比，增殖異常迅速，一分二的話，1-2天就可以再傳代。

人宮頸癌Hela細胞應(yīng)用

通過HELA細胞的研究，我們能更好地理解癌癥的發(fā)生機制，開發(fā)更有效的醫(yī)學研究手段，并為人類健康做出貢獻。

Hela細胞通常呈橢圓形或梭形，大小約為20~30μm，屬于惡性腫瘤細胞系，具有無窮分裂和浸潤性生長的特點，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學研究中。最初在1951年取自于Henrietta Lacks的鱗狀細胞癌宮頸組織中，因此而命名。

Hela細胞的增殖能力強且生長速度快，倍增時間通常為48h，可以持續(xù)生長和分裂，是十分理想的細胞實驗?zāi)Ｐ汀?/p>

Hela細胞常用于癌癥學科相關(guān)研究中，用于探究癌癥的發(fā)生發(fā)展機制等。同時因其對不同的腫瘤治療方法可以產(chǎn)生多樣性反應(yīng)，因此Hela細胞也常作為腫瘤治療藥物篩選和治療效果評價的工具。在疫苗研制中，Hela細胞也常用于疫苗效果和安全性評價的模型。同時在基因編輯、細胞免疫學和病毒學研究中，也是常用的研究工具之一。

在醫(yī)學界，海拉細胞被廣泛應(yīng)用于腫瘤研究、生物實驗或者細胞培養(yǎng)，已經(jīng)成為醫(yī)學研究中非常重要的工具。這種細胞是現(xiàn)有來自人體的組織培養(yǎng)中最早的分離細胞，在世界各地的研究室繼續(xù)培養(yǎng)，廣泛應(yīng)用于各種研究。它們在體外容易增殖形成上皮性的細胞排列。染色體數(shù)頻率分布式為78-80，移植于人體皮下則形成腫瘤，在豚鼠的眼前房，大鼠的頰囊以及經(jīng)X射線皮質(zhì)酮處理的小鼠可作異種移植，由此可以認為仍保持著癌的性狀。廣泛被用作分析細胞營養(yǎng)要求、細胞增殖和各種細胞化學的研究材料。易從細胞群落作無性繁殖系分離，有各種變異系的報道。對脊髓灰質(zhì)炎病毒、腺病毒等的病毒有敏感性，并顯示有明顯的細胞變性，在病毒研究方面的利用價值頗大。

HeLa可以用于二甲雙胍通過影響肌動蛋白骨架重組抑制人宮頸癌HeLa細胞遷移、侵襲和增殖的研究。

總結(jié)起來，HELA細胞是一種腫瘤細胞系，具有快速增殖能力、無窮分裂能力和多樣化的反應(yīng)性。HELA細胞的培養(yǎng)相對簡單，但需要注意無菌操作和細胞狀態(tài)的監(jiān)控。HELA細胞在癌癥研究和藥物篩選中有著廣泛的應(yīng)用，為科學家們的研究提供了一個重要的細胞模型。

hela細胞轉(zhuǎn)染siRNA條件

RFECT，SIRNA做過hela細胞的轉(zhuǎn)染,用的24孔培養(yǎng)板，將siRNA 稀釋液與試劑稀釋液混合，細胞鋪板密度在45%左右。 設(shè)置siRNA濃度10nM，30nM，50nM，100nM四個梯度，每個梯度最好做2個復孔，轉(zhuǎn)染前一天鋪板，稀釋siRNA和轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)基必須是無血清培養(yǎng)基，血清的存在會干擾siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的混合，影響轉(zhuǎn)染效率。