l929細(xì)胞的簡介

L929，小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克隆，又名NCTC clone 929，是細(xì)胞系L的克隆細(xì)胞株。細(xì)胞系L是最早建立的連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系之一，取自一只100日齡的雄性C3H/An小鼠乳暈的正常皮下疏松結(jié)締組織和脂肪組織。

L929是其最早的克隆株，建立于1948年三月，選取第95代的細(xì)胞系L使用毛細(xì)管法分離單細(xì)胞建立起來的。經(jīng)檢測L929細(xì)胞鼠痘病毒呈陰性，對水泡性口炎和腦心肌炎病毒易感，在免疫抑制鼠體內(nèi)可成瘤，常用于細(xì)胞毒性研究，同時也是個合適的轉(zhuǎn)染宿主。

L929細(xì)胞成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長，常用于測定腫瘤壞死因子TNF-α和TNF-β。用TNF處理可引發(fā)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞死亡，因此L929細(xì)胞經(jīng)常用于免疫學(xué)測定。

L929細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：L929，小鼠成纖維細(xì)胞

細(xì)胞別稱：NCTC 929; NCTC-929; NCTC929; NCTC-929L; L cell; L cells; L-cell; L-cells; L cell line; L; Strain L-929; L-929; L 929; L929; L929(NCTC); Clone 929; Earles's cells; Earle's L cells

種屬來源：小鼠，雄；100日齡

組織來源：皮下結(jié)締組織

形態(tài)特征：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長

倍增時間：~28-36 hours

培養(yǎng)基：90%MEM+10%FBS+PS

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 3次

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CCL-1 ATCC; CRL-6364 BCRC; 60091 BCRJ; 0188 DSMZ; ACC-2 ECACC; 85011425 ECACC; 85103115 ECACC; 88102702

致癌性：Yes, in immunosuppressed mice.

L929成纖維細(xì)胞形態(tài)

l929細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)方法

細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺-操作平臺、CO2 培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級水

器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍(lán)色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗服，常噴 75%酒精

L929細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1.準(zhǔn)備：紫外線照臺 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘(或者放在超凈工作臺常溫放 30min)。在操作臺上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到 37℃時，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLL929小鼠成纖維細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時不斷輕輕搖動凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機(jī)中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 6cm 培養(yǎng)皿中，(若離心后細(xì)胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個新的 10cm 培養(yǎng)皿中)，標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻L929小鼠成纖維細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動)，第二天換液并檢查L929小鼠成纖維細(xì)胞密度。

L929小鼠成纖維細(xì)胞傳代操作步驟

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿L929小鼠成纖維細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到 85%左右的時候即可進(jìn)行傳代;

4)打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm 皿)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中(若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS)，輕輕晃動以清洗細(xì)胞表面1-2次;

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動以便胰酶浸泡到每個細(xì)胞，消化 1-3min(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時間長一點(diǎn)或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，L929小鼠成纖維細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對L929細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

7)將裝有L929小鼠成纖維細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中(配平)，1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺子上畫 30 個 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測是否鋪勻細(xì)胞。

8) 確定L929小鼠成纖維細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動)。第二天再觀察細(xì)胞密度。

L929小鼠成纖維細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿出L929小鼠成纖維細(xì)胞，在顯微鏡下觀察L929細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá) 80–90%時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25 瓶為例

L929小鼠成纖維細(xì)胞凍存步驟

a.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。

b.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液， 在細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽(細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫位置和凍存日期。

L929小鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

1.L929小鼠成纖維細(xì)胞復(fù)蘇之后活率不高怎么處理?

L929細(xì)胞復(fù)蘇后需要一定時間恢復(fù)狀態(tài)。復(fù)蘇活率較低，但不影響細(xì)胞生長。

2.L929小鼠成纖維細(xì)胞消化時間多久?

L929細(xì)胞貼壁較牢，傳代時建議1:2傳代，37℃培養(yǎng)箱消化3min，胰酶吹落后，再用完全培養(yǎng)液終止。

3.L929小鼠成纖維細(xì)胞形態(tài)不對，傳代之后大部分是圓形，梭形的細(xì)胞很少?

L929細(xì)胞形態(tài)展開較慢，貼壁四十八小時后展開形態(tài)會較多。

4.L929細(xì)胞可以存放到到-80冰箱嗎，還是需要放液氮罐?

L929細(xì)胞對凍存條件要求較高，建議程序降溫后，及時移入液氮保存。

小鼠成纖維L929細(xì)胞應(yīng)用

L929細(xì)胞的應(yīng)用包括研究不同濃度D-纈氨酸對小鼠成纖維細(xì)胞L929增殖和凋亡的影響。這些特性使得L929細(xì)胞成為生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中常用的細(xì)胞模型之一，特別是在研究細(xì)胞增殖、凋亡以及藥物對細(xì)胞影響等方面。

L929細(xì)胞為小鼠成纖維細(xì)胞，來源于小鼠結(jié)締組織，常用于生物醫(yī)學(xué)研究中的不同領(lǐng)域，主要包括病毒研究、抗腫瘤藥物測試、細(xì)胞生物學(xué)研究、細(xì)胞毒性測試和免疫學(xué)研究，具體如下：

1.病毒研究

L929細(xì)胞常被用于檢測和研究各種病毒，如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒和皰疹病毒等。L929細(xì)胞可以用于病毒復(fù)制、擴(kuò)增和病毒感染的研究。

2.抗腫瘤藥物測試

L929細(xì)胞可以用于評估抗腫瘤藥物的活性。通過將抗癌藥物與這些細(xì)胞共培養(yǎng)，可以測定藥物對細(xì)胞生長和增殖的影響，以評估其抗腫瘤潛力。

3.細(xì)胞生物學(xué)研究

L929細(xì)胞在細(xì)胞生物學(xué)研究中廣泛使用，特別是在涉及細(xì)胞增殖、凋亡、分化和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面。L929細(xì)胞可用于研究細(xì)胞周期、蛋白質(zhì)表達(dá)、基因調(diào)控和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)等生物學(xué)過程。

4.細(xì)胞毒性測試

L929細(xì)胞可以用于評估不同化合物、藥物或化學(xué)物質(zhì)對細(xì)胞的毒性。這種細(xì)胞毒性測試有助于確定某種物質(zhì)對細(xì)胞的安全性，特別是在新藥物或化學(xué)品的開發(fā)中。

5.免疫學(xué)研究

L929細(xì)胞可以用于研究免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞因子產(chǎn)生和免疫應(yīng)答。L929細(xì)胞可以作為免疫細(xì)胞的模型，用于模擬和研究免疫反應(yīng)。