一、單克隆穩(wěn)定株和混合穩(wěn)定株概念

單克隆穩(wěn)定株：來源于含有穩(wěn)定整合外源片段的單個細胞的擴增。

混合穩(wěn)定株：由多個單克隆穩(wěn)定株混合構(gòu)成的克隆群，不同的單克隆其外源片段的整合位點不一樣。

單克隆穩(wěn)定株和多克隆穩(wěn)定株特點

二、單克隆穩(wěn)定株和混合克隆穩(wěn)定株如何選擇

1.什么時候選擇混合克隆穩(wěn)定株

由于不同細胞基因組背景存在差異，且不同整合位點的單克隆細胞株表現(xiàn)出來的細胞表型可能不一致，所以使用混合克隆株更能去除細胞間差異造成的干擾，否則需要對多個單克隆穩(wěn)定株進行比較，才能獲得更精確的實驗數(shù)據(jù)。

為了去除細胞間差異，得到更精確的實驗結(jié)果，我們推薦您使用慢病毒感染，或者構(gòu)建混合克隆穩(wěn)定株！

● 感染效率70%～80%以上即可直接實驗，不會受到質(zhì)疑

● 高分低分文獻都使用混合克隆，國際承認

● 篩選單克隆株至少要用兩株細胞來去除細胞間差異，工作量翻倍，費用較高

2.為什么要挑選單克隆穩(wěn)定株

多克隆細胞系構(gòu)建成功后由于不同細胞克隆生長速度不一致，目的基因表達量比較低的細胞克隆增殖速度一般更快，因此在最初的10代左右會觀察到表達量逐漸下降，最后高表達量低增殖速度的細胞消失，低到中等表達量的細胞組成穩(wěn)定表達克隆。

對于轉(zhuǎn)染效率和表達效率低的細胞系，多克隆細胞篩選得到的細胞系中目的基因的表達量有可能不能滿足實驗要求。

單克隆細胞系在細胞克隆挑選后可以對目的基因表達量進行檢測，挑選出高表達的細胞克隆進行培養(yǎng)。這一步驟在轉(zhuǎn)染效率低的細胞株中尤其重要。

做細胞亞定位的穩(wěn)定細胞系，存在表達量過低、熒光信號不夠強，以及表達量過高、熒光蛋白聚集導致不能正確定位兩種問題。單克隆細胞系挑選可以直接選出定位正確的細胞克隆。

3.什么時候選擇單克隆穩(wěn)定株

多克隆細胞株篩選比較快速，費用較低。單克隆細胞株篩選周期長，費用高。因此如果多克隆細胞株可以滿足實驗要求，就沒有必要篩選單克隆細胞株了。

在需要構(gòu)建的細胞株轉(zhuǎn)染效率高，目的基因表達效率高的情況下，單克隆細胞株后得到的表達效果和多克隆細胞株并沒有顯著差異。這時多克隆細胞篩選是理想的選擇。反之則應選擇單克隆細胞篩選。需要進行細胞亞定位實驗的細胞系通常建議進行單克隆細胞篩選。

由于不同細胞系差異較大，直接判斷進行哪種實驗方案是很困難的。為此，我們提供免費預實驗服務，對您提供的細胞進行慢病毒轉(zhuǎn)染預實驗，實驗后提供實驗方案建議及細胞系構(gòu)建可行性評估。

單克隆穩(wěn)定株和多克隆穩(wěn)定株選擇指南

4.怎么判別篩選的穩(wěn)定株是單克隆

1)如果外源片段含有熒光標記，可以直接使用流式細胞儀檢測其熒光是否均一； 如果還有其它標簽，可以進行免疫熒光標記，再使用流式細胞儀觀察熒光分布是否出現(xiàn)均一峰值。因為不同單克隆由于整合位點不一樣，其表達強度也會受附近染色體結(jié)構(gòu)的影響，出現(xiàn)差異。

2)如果外源片段不含任何標簽或者熒光標記，則可以使用分子生物學比如Southern Blot的方法鑒定。

3)使用96孔板稀釋法篩選，得到的陽性克隆一般是單克隆。因為最初如果混有非整合細胞，則含有整合外源片段的單細胞多半會失去生長優(yōu)勢，無法得到陽性克隆。使用單克隆環(huán)法，如果挑取的是致密，單一的克隆，那么多半也是單克隆。

三、總結(jié)

當需要去除細胞群體干擾因素的時候，推薦使用單克隆穩(wěn)定細胞株，其基因組背景相對單一，對實驗結(jié)果干擾因素小。當進行系統(tǒng)生物學研究時，需考慮細胞群體因素，同時也是由于不同細胞個體差異大，而且不同整合位點的單克隆細胞株表現(xiàn)出來的細胞行為可能不一致，所以許多實驗使用混合克隆株更能去除細胞間差異造成的干擾。因此，選擇單克隆細胞株還是混合克隆細胞株，需要根據(jù)實驗目的而定。