細胞簡介

神經(jīng)小膠質(zhì)細胞分離自腦組織;大腦分左右兩個半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個半球都有三個面，即外側(cè)面(約占整個皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積);半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。小膠質(zhì)細胞是神經(jīng)膠質(zhì)細胞的一種，相當于腦和脊髓中的巨噬細胞，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的第一道也是最主要的一道免疫防線。小膠質(zhì)細胞大約占大腦中的神經(jīng)膠質(zhì)細胞的20%，小膠質(zhì)細胞不停地清除著中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的損壞的神經(jīng)，斑塊及感染性物質(zhì)。無數(shù)臨床上和神經(jīng)病理學(xué)研究表明激活的小膠質(zhì)細胞在神經(jīng)退化類疾病的發(fā)病機理中起到十分重要的作用，如帕金森病、多發(fā)性硬化和阿茲海默癥等。但是過多激活或失控的小膠質(zhì)細胞會引起神經(jīng)毒性。它們是促炎因子和氧化應(yīng)激的重要來源，如腫瘤壞死因子(TNF)，一氧化氮，白介素等有神經(jīng)毒性的物質(zhì)。神經(jīng)小膠質(zhì)細胞的主要功能：①神經(jīng)膠質(zhì)出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉(zhuǎn)化的過程中;②當程序性細胞死亡時，或在大腦發(fā)育的過程中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損或受到病理損壞時，神經(jīng)膠質(zhì)可做為大腦的巨噬細胞;③膠質(zhì)細胞能在Ⅱ類組織相容性復(fù)合體表達CD-4陽性T細胞時表達抗原，能進行Fc介導(dǎo)的巨噬作用，并且與造血細胞和巨噬細胞組織共享抗原。

細胞形態(tài)

小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞形態(tài)

細胞特點

①神經(jīng)膠質(zhì)出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉(zhuǎn)化的過程中;當程序性細胞死亡時，或在大腦發(fā)育的過程中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損或受到病理損壞時，神經(jīng)膠質(zhì)可做為大腦的巨噬細胞;

②膠質(zhì)細胞能在Ⅱ類組織相容性復(fù)合體表達CD-4陽性T細胞時表達抗原，能進行Fc介導(dǎo)的巨噬作用，并且與造血細胞和巨噬細胞組織共享抗原。

實驗準備

1. 工具

小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基 Microglia Basal Medium (MBM)(IMP-M120-1)、HBSS緩沖液、PBS磷酸緩沖液、10% FBS DMEM培養(yǎng)基、75%酒精、多聚賴氨酸、尖頭鑷、彎鑷、剪刀、冰盤、10 厘米培養(yǎng)皿、6 厘米 培養(yǎng)皿

2. 提前開啟紫外線照射超凈臺30分鐘。將培養(yǎng)基和添加劑室溫融化，使用前室溫中預(yù)溫10-30 分鐘。HBSS緩沖液緩沖液預(yù)冷，紫外照射完畢后，75%酒精消毒超凈臺，超凈臺通風(fēng)10 分鐘以上。

3. 包被培養(yǎng)皿：將10x的多聚賴氨酸稀釋成1x的工作液，將培養(yǎng)瓶底部加滿。過夜或兩小時，結(jié)束后，使用PBS緩沖液洗2-3次備用。

操作步驟

1. 取3個10 厘米 培養(yǎng)皿，3個6 厘米 培養(yǎng)皿倒入HBSS緩沖液，置于冰盤上

2. 取出生2天內(nèi)的新生鼠，泡入裝有75%酒精的離心管內(nèi)

3. 待小鼠死亡后，在1中漂洗2-3次

4. 取腦子：用尖頭鑷剝離鼠頭部及腦殼，取出腦子，放入6 厘米培養(yǎng)皿

5. 剝腦膜：將一個腦移至一個新的6 厘米 培養(yǎng)皿(兩三個腦子用一個6 厘米培養(yǎng)皿，防止太久HBSS緩沖液升溫)，在解剖鏡下去除嗅球，小腦及兩個大腦半球中間的連接物，將剝干凈的皮層放入新的6 厘米培養(yǎng)皿。

6. 將剝離好的皮層夾碎至漿糊狀，組織使用10%FBS DMEM培養(yǎng)基稀釋，準備鋪入包被的培養(yǎng)瓶

T75培養(yǎng)瓶3個腦袋，大培養(yǎng)瓶 4-5個腦袋。

7. 培養(yǎng)三天后，更換神經(jīng)小膠質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基，換液后一周左右長滿，期間不用再換液。

細胞鑒定

1. 形態(tài)觀察

小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈梭形、多角形，細胞屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群

2. 標志物鑒定

逸漠實驗室分離的小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細胞經(jīng)CD11b免疫熒光鑒定，純度可達90%以上

小鼠小膠質(zhì)細胞標志物熒光鑒定