細(xì)胞簡(jiǎn)介

小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦組織;大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積);半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積;大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞，是哺乳動(dòng)物腦內(nèi)分布最廣泛的一類(lèi)細(xì)胞，也是膠質(zhì)細(xì)胞中體積最大的一種。用經(jīng)典的金屬浸鍍技術(shù)(銀染色)顯示此類(lèi)膠質(zhì)細(xì)胞呈星形，從胞體發(fā)出許多長(zhǎng)而分支的突起，伸展充填在神經(jīng)細(xì)胞的胞體及其突起之間，起支持和分隔神經(jīng)細(xì)胞的作用。細(xì)胞突起的末端常膨大形成腳板或稱(chēng)終足，有些腳板貼附在鄰近的毛細(xì)血管壁上，因此這些腳板又被稱(chēng)為血管足或血管周足，靠近腦脊髓表面的腳板則附著在軟膜內(nèi)表面，彼此連接構(gòu)成膠質(zhì)界膜。細(xì)胞剛分離時(shí)呈圓形，24 h后大部分細(xì)胞貼壁，均勻分布于瓶底，部分細(xì)胞伸出細(xì)小突起，培養(yǎng)4-5 d后細(xì)胞數(shù)量明顯增多，呈扁平、多角形，胞質(zhì)豐富且核漿較少，細(xì)胞核呈橢圓形，偏于胞體一側(cè)。神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要細(xì)胞組成，不僅具有支持功能，還能夠合成及分泌多種神經(jīng)活性物質(zhì)，在維持神經(jīng)元內(nèi)外環(huán)境、生存、遷移、免疫調(diào)節(jié)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、軸突生長(zhǎng)及功能整合等方面具有重要作用。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1. 工具

小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基Astrocyte basal Medium (ABM)、HBSS緩沖液、PBS磷酸緩沖液、75%酒精、多聚賴(lài)氨酸、尖頭鑷、彎鑷、剪刀、冰盤(pán)、10 厘米培養(yǎng)皿、6 厘米培養(yǎng)皿

2. 提前開(kāi)啟紫外線照射超凈臺(tái)30分鐘。將培養(yǎng)基和添加劑室溫融化，使用前室溫中預(yù)溫10-30 分鐘。HBSS緩沖液緩沖液預(yù)冷，紫外照射完畢后，75%酒精消毒超凈臺(tái)，超凈臺(tái)通風(fēng)10 分鐘以上。

3. 包被培養(yǎng)皿：將10x的多聚賴(lài)氨酸稀釋成1x的工作液，將培養(yǎng)瓶底部加滿。過(guò)夜或兩小時(shí)，結(jié)束后，使用PBS緩沖液洗2-3次備用。

操作步驟

1. 取3個(gè)10 厘米 培養(yǎng)皿，3個(gè)6 厘米 培養(yǎng)皿倒入HBSS緩沖液,置于冰盤(pán)上

2. 取出生2天內(nèi)的新生鼠，泡入裝有75%酒精的離心管內(nèi)

3. 待小鼠死亡后，在1中漂洗2-3次

4. 取腦子：用尖頭鑷剝離鼠頭部及腦殼，取出腦子，放入6 厘米培養(yǎng)皿

5. 剝腦膜：將一個(gè)腦移至一個(gè)新的6 厘米 培養(yǎng)皿(兩三個(gè)腦子用一個(gè)6 厘米培養(yǎng)皿，防止太久HBSS緩沖液升溫)，在解剖鏡下去除嗅球，小腦及兩個(gè)大腦半球中間的連接物，將剝干凈的皮層放入新的6 厘米培養(yǎng)皿。

6. 將剝離好的皮層夾碎至漿糊狀，組織使用神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基稀釋?zhuān)瑴?zhǔn)備鋪入包被的培養(yǎng)瓶

T75培養(yǎng)瓶3個(gè)腦袋，大培養(yǎng)瓶 4-5個(gè)腦袋。

7. 每3-5天換液，一般12天左右長(zhǎng)滿，長(zhǎng)滿后開(kāi)始傳代，

細(xì)胞鑒定

1. 形態(tài)觀察

小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈梭形、多角形，細(xì)胞可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳。

2. 標(biāo)志物鑒定

小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上。