實驗前準備

提前開啟紫外線照射超凈臺30min。

將培養(yǎng)基和添加劑室溫融化，使用前室溫中預(yù)溫10-30min。

紫外照射完畢后，75%酒精消毒超凈臺，超凈臺通風10min以上。

完全培養(yǎng)基的配制

添加劑按1:100比例加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，輕柔搖勻培養(yǎng)基后備用。

臍帶MSC制備

(1)采集健康足月新生兒臍帶。

(2)75%酒精消毒臍帶儲運瓶，在超凈臺中取出臍帶，酒精浸泡1min，用生理鹽水清洗(將淤血清洗干凈)，將臍帶剪短至2-3cm。

(3)小心地將靜脈血管和動脈血管剖離，撕取華通膠。

(4)華通膠置于加少量生理鹽水的50ml離心管中(華通膠不少于8ml)，剪碎至1立方厘米大小。

(5)300g，8min離心，取上清做菌檢。

(6)生理鹽水清洗2-3遍，300g，8min離心。

(7)用10ml移液管將華通膠塊平分到150cm2的培養(yǎng)皿中(根據(jù)華通氏膠的量確定培養(yǎng)皿的個數(shù))，加入15ml的完全培養(yǎng)基。

(8)在培養(yǎng)瓶上標記相關(guān)信息，包括樣本編碼、操作項目、操作時間、操作人等。

(9)小心將培養(yǎng)瓶放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)最初5-7天，保持培養(yǎng)瓶絕對靜止。

(10)根據(jù)細胞生長情況，每隔3天進行一次半量換液或全量換液。

(11)D13-D14收獲細胞。

(12)不同培養(yǎng)器皿的組織塊植入量及培養(yǎng)基添加量見下表：