本視頻為廈門逸漠生物科技有限公司出品關(guān)于hESC細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠分裝與鋪板教程，我們對每一步操作都做了演示，以便科研老師更好地理解hESC細(xì)胞培養(yǎng)過程中基質(zhì)膠分裝與鋪板實驗過程。

hESC細(xì)胞培養(yǎng)教程之：基質(zhì)膠分裝與鋪板

一.Corning Matrigel Matrix使用說明

Corning Matrigel Matrix是由Corning公司生產(chǎn)的，是干細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的鋪底基質(zhì)之一；

Matrigel對溫度十分敏感，僅在4℃呈液態(tài)；常溫下形成基底膜三維膠質(zhì)結(jié)構(gòu)，需要干冰運輸，-20℃或-80℃儲存，注意顏色變化；

注意

收貨：收貨時，需要注意檢查泡沫箱內(nèi)干冰是否足量，Matrigel液面是否基本水平，以及瓶身側(cè)壁，瓶口有無融化的痕跡；

儲存：收貨確認(rèn)無異常后，將Matrigel儲存于-20℃冰箱，長期保存可置于-80℃冰箱。切勿儲存于冰箱外側(cè)靠門邊上，最好放置于內(nèi)側(cè)角落。

顏色：含酚紅Matrigel冷凍狀態(tài)下顏色為淡黃色/橙黃色，解凍后顏色為不同程度的紅色；

常規(guī)冰箱溫度波動較大，為了保證最佳使用效果，建議放在-80℃儲存；第一次融化后請分裝保存，避免反復(fù)凍融；

分裝前，請根據(jù)收到的 Matrigel 批號查詢此批號 Matrigel 的蛋白濃度（或Dilution Factor）；根據(jù)使用濃度（或Dilution Factor）和包被面積計算分裝體積和數(shù)量。

使用貨號為 354277 的 Matrigel（hESC-Qualified Matrigel），其操作說明中不標(biāo)注蛋白濃度，而是以 Dilution Factor 表示，如某批次的推薦 Dilution Factor 為278 μL，則表明 278 μL 可包被 4塊 6 孔板，分裝數(shù)量=5 mL / 0.278 =17.98管。

二、分裝 Matrigel

1.取一瓶冷凍的Matrigel，置于-4℃冰箱過夜，當(dāng)Matrigel完全融化后即可開始分裝；

2.準(zhǔn)備1mL無菌吸頭1盒，無菌的1.5 mL EP管若干，貼好標(biāo)簽（Matrigel批號，濃度，日期，操作人），放入EP冰盒上，均置于-20℃冰箱中預(yù)冷1小時以上；

3.完全融化的Matrigel為可流動的紅色液體;從冰箱取出插入碎冰中；

4.將完全融化的Matrigel、預(yù)冷的1.5 mL EP管-冰盒，1mL無菌吸頭轉(zhuǎn)移生物安全柜內(nèi)；

5.冰上混勻Matrigel，隨后調(diào)整移液器刻度，準(zhǔn)備分裝；

6.分裝時可用無菌剪刀將吸頭尖端剪去一小段；每分裝5管后更換新的吸頭，以減少吸頭堵塞的風(fēng)險；

7.將混勻的Matrigel無菌分裝于1.5 mL EP管（300 μl/管）中；將分裝好的Matrigel轉(zhuǎn)移至-20℃或-80℃冰箱保存；

三.Matrigel鋪板

1.取1支冷凍的Matrigel，EP管放入冰盒中，置于4℃冰箱解凍；

2.準(zhǔn)備1 mL 無菌吸頭1盒，置于-20℃冰箱中預(yù)冷1小時以上；

3.準(zhǔn)備1瓶冷藏的DMEM/F12，1支50 mL離心管，做上標(biāo)記；

4.取36 mL DMEM/F12于50 mL離心管中，置于4℃冰箱備用；

5.1小時后，將完全融化的Matrigel、冷藏的DMEM/F12，預(yù)冷的1 mL 無菌吸頭轉(zhuǎn)移到生物安全柜內(nèi)；

6. 取4快無菌的6孔板，置于生物安全柜內(nèi)，做上標(biāo)記；

7. 完全融化的Matrigel為可流動的紅色的液體；

8. 取1mL DMEM/F12，加入完全融化的Matrigel中，反復(fù)吹打20次以上充分混勻，吸取混勻的Matrigel，可加入剩余的DMEM/F12中，洗滌一次EP管；

9. 使用10 mL移液管，反復(fù)吹打30次，充分混勻；

10. 混勻后按照1.5 mL/孔分裝4塊六孔板中，十字輕輕搖晃均勻；

11. 將培養(yǎng)板置于37℃培養(yǎng)箱，1小時后即可使用；或使用封口膜封口，隨后置于4℃冰箱冷藏保存，兩周內(nèi)使用；

注意

1. 不同貨號和批號的Matrigel，濃度會有區(qū)別，具體請查詢COA文件；

2. 切勿將Matrigel儲存于自動除霜的冰箱中;在第一次融化后請分裝保存，避免反復(fù)凍融；

3. Matrigel對溫度十分敏感，與Matrigel接觸的所有試劑耗材（離心管，移液槍頭等）均需事先預(yù)冷，操作需全程在冰上進(jìn)行；

4. 包被的Matrigel時需要充分混勻，切勿將解凍后的Matrigel直接加入到DMEM/F12中混勻，會因混勻不充分而導(dǎo)致包被不均勻，進(jìn)而影響培養(yǎng)效果；

5. 包被好的Matrigel培養(yǎng)板，可在4℃保存2周，使用時提前置于室溫恢復(fù)30分鐘以上即可使用。