PANC-1人胰腺癌細(xì)胞簡(jiǎn)介

PANC-1，人胰腺癌細(xì)胞，1972年由M.Lieber中分離并建立，取自一位56歲患有胰腺癌的白人男性胰腺頭部腫瘤的導(dǎo)管組織。有文獻(xiàn)報(bào)道該細(xì)胞在無胸腺裸鼠體內(nèi)可致瘤，攜帶三個(gè)標(biāo)記染色體和一個(gè)小環(huán)狀染色體。癌細(xì)胞可以轉(zhuǎn)移，但分化能力較差。PANC-1細(xì)胞在腫瘤的排列和遷移中發(fā)揮中間絲角蛋白重組的作用，因此也被用于研究鈣介導(dǎo)的肌動(dòng)蛋白重置(CaAR)對(duì)生理變化的反應(yīng)。PANC-1表達(dá)CK5.6、MNF-116、波形蛋白、嗜鉻粒蛋白A、CD56和SSTR2，但癌胚抗原分泌不明顯。綜上所述，PANC-1細(xì)胞因其上皮形態(tài)、中間絲角蛋白重組和SSTR2受體的存在，被廣泛應(yīng)用于胰腺癌研究，適用于胰腺癌神經(jīng)內(nèi)分泌化療和肽受體放射性核素治療，是研究胰腺導(dǎo)管腺癌的癌變和腫瘤治療的首選體外模型。

panc1細(xì)胞形態(tài)圖片

panc1細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣，單層貼壁生長(zhǎng)，生長(zhǎng)過程中細(xì)胞會(huì)聚集。

PANC-1人胰腺癌細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：PANC-1，人胰腺癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱：Panc-1; PANC.1; Panc 1; PanC1; Panc1; PANC1; Panc-1-P;人胰腺癌細(xì)胞

種屬來源：人

年齡性別：男;56歲

組織來源：胰腺;胰管;上皮細(xì)胞癌

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

STR位點(diǎn)信息： Amelogenin：X;CSF1PO：10，12;D13S317：11;D16S539：11;D18S51：12;D19S433：11，16;D21S11：28;D2S1338：23，24;D3S1358：17;D5S818：11，13;D7S820：8，10;D8S1179：14，15;FGA：21;TH01：7，8;TPOX：8，11;vWA：15;

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-1469

培養(yǎng)基：90% DMEM+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

染色體：60~70

PANC-1人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗(yàn)室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)-操作平臺(tái)、CO2 培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級(jí)水

器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍(lán)色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗(yàn)服，常噴 75%酒精

PANC-1人胰腺癌細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1.準(zhǔn)備：紫外線照臺(tái) 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘(或者放在超凈工作臺(tái)常溫放 30min)。在操作臺(tái)上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭(已滅菌)，培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到 37℃時(shí)，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時(shí)不斷輕輕搖動(dòng)凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機(jī)中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的 6cm 培養(yǎng)皿中，(若離心后細(xì)胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的 10cm 培養(yǎng)皿中)，標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵(吸力不要太大)取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫 30 個(gè) 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。(盡量平直放入不要晃動(dòng))，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

PANC-1人胰腺癌細(xì)胞傳代操作

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺(tái) 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時(shí)以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿出細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到 85%左右的時(shí)候即可進(jìn)行傳代;

4)打開廢液泵，用廢液泵吸頭(吸力不要太大)取一個(gè)藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS(6cm 皿)到細(xì)胞培養(yǎng)皿中(若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS)，輕輕晃動(dòng)以清洗細(xì)胞表面1-2次;

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)以便胰酶浸泡到每個(gè)細(xì)胞，消化 1-3min(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘)后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個(gè)角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對(duì)細(xì)胞有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

7)將裝有細(xì)胞懸液的離心管放入離心機(jī)中(配平)，1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后(充分混勻)，將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞(一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫 30 個(gè) 8 字即可鋪勻)，最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

8) 確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(盡量平直放入不要晃動(dòng))。第二天再觀察細(xì)胞密度。

PANC-1人胰腺癌細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺(tái) 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS(試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時(shí)以上);傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管(已滅菌)，槍頭(已滅菌)，移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵;

2)從培養(yǎng)箱拿出細(xì)胞，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá) 80–90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25 瓶為例

PANC-1人胰腺癌細(xì)胞凍存步驟

a.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液， 在細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽(細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基)。

c.將凍存管入庫到-80 度凍存盒里，放置 24 小時(shí)后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫位置和凍存日期。

PANC-1人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)總結(jié)

PANC-1呈上皮細(xì)胞樣，單層貼壁生長(zhǎng)，生長(zhǎng)過程中細(xì)胞會(huì)聚集，但可以通過胰蛋白酶化來避免。PANC-1染色體核型為超三倍體，32%細(xì)胞中有61條染色體，22%細(xì)胞中有63條染色體。顯微鏡觀察結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)分析顯示存在三種不同的形態(tài)學(xué)模式：小細(xì)胞(桑葚胚)、中間細(xì)胞(星狀細(xì)胞)和大細(xì)胞(分離細(xì)胞)，可用于癌癥研究，也是個(gè)合適的轉(zhuǎn)染宿主。

PANC-1細(xì)胞常用DMEM培養(yǎng)基，含10% 胎牛血清，在37度、5% CO2培養(yǎng)箱中。PANC-1細(xì)胞增速較慢，倍增時(shí)間52h，建議每周2-3次更換新鮮培養(yǎng)基，在密度80%時(shí)傳代，傳代比例1:2-1:4。

PANC-1人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

1.PANC-1人胰腺癌細(xì)胞消化時(shí)間多久?

PANC-1細(xì)胞需要注意消化時(shí)間，一般PANC-1細(xì)胞放培養(yǎng)箱消化六分鐘左右，先用胰酶把細(xì)胞吹下來后再用培養(yǎng)液終止消化，消化時(shí)間不夠，易成團(tuán)。

2.PANC-1人胰腺癌細(xì)胞消化后抱團(tuán)怎么處理?

PANC-1細(xì)胞若消化后已經(jīng)抱團(tuán)，并且嚴(yán)重的話，建議不要繼續(xù)吹打，可以先放回培養(yǎng)箱中貼壁穩(wěn)定后，隔天在進(jìn)行消化重鋪，盡量避免影響細(xì)胞狀態(tài)，消化下來后在浸泡于胰酶中1-2分鐘后在用培養(yǎng)基終止，通過多次重鋪得到單咳且狀態(tài)好的細(xì)胞。

PANC-1細(xì)胞間連接緊密，消化的目的主要是處理細(xì)胞間的連接。在消化過程中，讓細(xì)胞在胰酶中待足夠長(zhǎng)時(shí)間以去除細(xì)胞間的連接。如消化時(shí)間不夠，則貼壁后會(huì)出面聚團(tuán)現(xiàn)象。建議消化過程中到鏡下觀察在中消化。細(xì)胞在消化后鋪回皿中時(shí)要盡快放入培養(yǎng)箱中，中途若晃動(dòng)細(xì)胞，單顆細(xì)胞還會(huì)黏連抱團(tuán)，建議鋪進(jìn)皿中搖勻后不再移動(dòng)，整個(gè)過程建議2mim內(nèi)，保證細(xì)胞單顆貼壁。

PANC-1細(xì)胞容易聚團(tuán)，消化時(shí)請(qǐng)盡量消化并輕輕吹散成單個(gè)細(xì)胞鋪板。

3.panc-1細(xì)胞生長(zhǎng)速度

PANC-1細(xì)胞倍增時(shí)間為52小時(shí)，一分二的話，2-3天左右長(zhǎng)滿。

參考文獻(xiàn)

Lieber M, et al. Establishment of a continuous tumor-cell line (panc-1) from a human carcinoma of the exocrine pancreas. Int. J. Cancer 15: 741-747, 1975. PubMed: 1140870

Wu MC, et al. Mechanism of sensitivity of cultured pancreatic carcinoma to asparaginase. Int. J. Cancer 22: 728-733, 1978. PubMed: 363626

Lan MS, et al. Polypeptide core of a human pancreatic tumor mucin antigen. Cancer Res. 50: 2997-3001, 1990. PubMed: 2334903