小鼠破骨細胞簡介

小鼠破骨細胞分離自骨組織和骨髓;破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞，位于骨組織表面的淺凹處。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統，其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡，若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化。因此多數學者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結構、功能探討骨吸收，形成相互平衡的機制。但破骨細胞是一種終末分化細胞，屬于不增殖細胞群，不能增殖和傳代，只能進行原代培養(yǎng)且存活時間較短。

小鼠破骨細胞原代分離培養(yǎng)所需試劑

小鼠破骨細胞基礎培養(yǎng)基、小鼠破骨細胞完全培養(yǎng)基、PBS磷酸緩沖液、紅細胞裂解液、破骨細胞培養(yǎng)添加物A、破骨細胞培養(yǎng)添加物B(試劑介紹完之后補充一句“以下簡稱添加物A,添加物B”)

小鼠破骨細胞原代分離傳代及鑒定方法

小鼠骨髓單核細胞誘導法

(1)6-8周齡小鼠頸椎脫臼處死，75%酒精浸泡滅菌10 min；

(2)取雙側股骨、脛骨，用無菌注射器吸取無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗骨髓腔3次，收集液體于15 mL離心管中， 1200 r/min離心3min；

(3)棄上清液，加入5 m紅細胞裂解液，4℃裂解15 min；

(4)300g離心10min，棄上清液，用小鼠破骨細胞基礎培養(yǎng)基重懸；

(5)1200 r/min離心3 min，棄上清液，用5 ml小鼠破骨細胞完全培養(yǎng)基重懸，接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，置入5% CO2、37℃ 細胞培養(yǎng)箱過夜(約24 小時)；

(6)收集上清離心，棄上清液，用5 mL含有添加物A的小鼠破骨細胞完全培養(yǎng)基重懸后，接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中(5x10^5 cells/cm2)，2天后細胞貼壁。

(7)棄上清液，用無菌PBS清洗2次。胰酶消化、反復吹打后收集液體，離心，棄上清液。重懸后，根據實驗需要，細胞計數后選擇合適細胞密度接種于不同細胞培養(yǎng)皿中(5x10^5 cells/cm2)；

(8)加入含培養(yǎng)添加物A添加物B的完全培養(yǎng)基，每兩天換液，4-6天后即可誘導出成熟的破骨細胞。

小鼠破骨細胞鑒定

1. 形態(tài)觀察

小鼠破骨細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈多核巨細胞，細胞屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群

2. 標志物檢測

第七天進行TRAP染色，2.5%戊二醛固定細胞10 min，蒸餾水充分沖洗，用TRAP染液處理50 min，蒸餾水充分沖洗后甘油封片。陽性染色細胞呈紅色，定位于胞漿, 陰性染色細胞呈黃色