Abcam; AddexBio; ATCC; BCRC; BCRJ; CCTCC; CLS; DSMZ; ECACC; HIVReagentProgram; ICLC; IZSLER; JCRB; KCB; KCLB; NCBI_Iran; RCB; TKG; Ubigene

THP-1人單核細胞白血病細胞培養(yǎng)常見問題

1.THP-1人單核細胞白血病細胞的特點？

a.THP-1細胞為懸浮生長，單顆生長，少部分松散成團。

b.THP-1細胞喜歡酸性環(huán)境：在偏酸性環(huán)境中，THP-1生長更快，所以當培養(yǎng)基稍微變黃(呈橘紅色)時，是適合細胞生長的，此時補液或半換液即可。

c.THP-1細胞有密度依賴性：THP-1細胞密度低時，生長較慢，培養(yǎng)密度維持在50萬-100萬細胞/毫升為宜;超過200萬/毫升則需要傳代。

d.THP-1細胞對血清要求高：血清質量差異可能引起細胞狀態(tài)變化，建議選用高質量的胎牛血清。選擇品質好的血清更有利于THP-1細胞生長。

e.THP-1細胞易受凍存影響，因此應選擇細胞狀態(tài)良好時凍存，并適量增加凍存的細胞量，以提高復蘇存活率。

f.THP-1細胞復蘇后通常需要3-5天的時間恢復狀態(tài)，建議復蘇后48小時不要接觸細胞，晃動培養(yǎng)瓶/皿，以免影響細胞狀態(tài)。

2.THP-1人單核細胞白血病細胞凍存過后復蘇困難怎么辦?

a.凍存前細胞狀態(tài)較好, 凍存總量不低于1*106/支.

b.復蘇后細胞接種密度建議3*106/ml。

c.如有細胞碎片，待細胞密度增大后通過低速離心去除。

3.THP-1細胞收貨時出現(xiàn)偽足，或是碎片較多怎么辦?

受到運輸影響，懸浮細胞會短暫性出現(xiàn)形態(tài)改變的現(xiàn)象，如偽足等。通過傳代培養(yǎng)，1周左右可以恢復正常。一些THP-1細胞在運輸途中死亡而產(chǎn)生碎片，通過傳代離心可以去除。

處理方法

收集THP-1細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液重新分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.THP-1人單核細胞白血病細胞培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生貼壁怎么處理?

THP-1細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)少量細胞貼壁屬于正常情況，不需要擔心。可以輕吹收集細胞或者丟棄貼壁部分細胞。

處理方法

只需將THP-1細胞懸液轉移至新瓶中即可。但如果當貼壁細胞的比例高于20%，說明細胞生長環(huán)境有異常，這時候就需要排查培養(yǎng)箱設置、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。

5.THP-1人單核細胞白血病細胞培養(yǎng)過程中細胞發(fā)生聚團怎么辦?

THP-1細胞培養(yǎng)過程中出現(xiàn)少量細胞聚團，呈葡萄串狀，屬于正?，F(xiàn)象，特別是THP-1細胞密度較低時，易出現(xiàn)這種情況。

處理方法

可以更換血清品牌或增大血清比例(不超過20%)有助于解決聚團問題。不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時，會自己分散開。

6.THP-1人單核細胞白血病細胞培養(yǎng)基里一定要加β-巰基乙醇嗎?

β-巰基乙醇是一種常用的培養(yǎng)補充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應激對THP-1細胞的影響。當細胞密度過大但需要維持時，可適當增加巰基乙醇的比例(不超過標準量的1.5倍)。

7.THP-1人單核細胞白血病細胞鏡下觀察時，難以聚焦或估算密度怎么辦?

THP-1細胞形態(tài)特征懸浮生長，懸浮細胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細胞沉底，之后再輕輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細胞密度。

8.THP-1人單核細胞白血病細胞培養(yǎng)注意事項

a.THP-1屬于懸浮細胞，顯微鏡下可見細胞呈圓形，透明度高，背景干凈，碎片很少，說明細胞狀態(tài)很好。

b.THP-1常用RPMI 1640培養(yǎng)基，含10%胎牛血清，在37度、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。特別注意的是THP-1喜歡酸性環(huán)境，對培養(yǎng)基pH值的變化很敏感，通常培養(yǎng)基顏色呈橘紅色時細胞最適宜生長。所以盡量使用相同Ph的1640。

c.THP-1細胞有密度依賴性，低密度時細胞生長慢，建議細胞量維持在每毫升50-100萬為宜，超過10^6/ml即可傳代，傳代比例采用1:3~1:4，換液不需要太頻繁，正常2~3天換1次液即可。

注意細胞的密度一定要高，介于5×105—— 106/ML之間，增值的快。細胞數(shù)量太少，不適合THP-1生長，一般狀態(tài)不好的THP-1在培養(yǎng)了3天后數(shù)量仍然不多，繼續(xù)培養(yǎng)一天或者兩天，培養(yǎng)基嚴重泛黃，細胞數(shù)會增加。

d.傳代后切忌常移出培養(yǎng)箱觀察，否則會影響細胞生長，狀態(tài)變差，一般首先表現(xiàn)為細胞內顆粒變多。一般THP-1 生長相當快，對于狀態(tài)已經(jīng)不好的情況，建議傳代后3～4天再觀察，一般4天時間培養(yǎng)基已明顯泛黃，細胞數(shù)量巨增

e.THP-1細胞培養(yǎng)時可能會有部分細胞聚團生長，若細胞團塊過大過多，應當輕輕將其吹散。

9.THP-1細胞狀態(tài)不太好，大小不均勻，有皺縮

THP-1細胞就是大大小小的，運輸導致的個別死細胞也是正常會有的，這個細胞長的很快，細胞量多了低速離心就可以去掉死細胞。養(yǎng)養(yǎng)就好了。

10.THP-1復蘇之后增值特別慢，還有一個就是PAM誘導了之后不貼壁

THP-1細胞加PAM是能貼壁的，但是得等細胞狀態(tài)好的時候，才能貼

第一個，細胞先調整好狀態(tài)才能貼壁，第二個，在誘導貼壁時注意細胞數(shù)量，不能太多因為因子濃度不夠也貼不上，太少了貼壁不上，觀察不到后續(xù)細胞，建議，24孔板做10000個細胞，然后5000個 15000個，20000個都做三個重復，然后每孔500微培養(yǎng)基。