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ATCC細(xì)胞培養(yǎng)
貨號：IM-M028 來源：ATCC
規(guī)格：1×106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，貼壁生長
培養(yǎng)基：90%DMEM+10%FBS+1%PS
傳代方法：1:2至1:3，每周 2-3次
RAW 264.7細(xì)胞不能用胰酶消化，細(xì)胞容易分化
價(jià)格：￥1200
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥800
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
RAW264.7細(xì)胞株源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性?？梢园嬛行约t并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖?？梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對腫瘤靶細(xì)胞無作用。
| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞（種屬鑒定報(bào)告） | |||
| 細(xì)胞別稱 | RAW264; RAW2647; RAW264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; Raw264.7；小鼠單核巨噬細(xì)胞 | |||
| 種屬來源 | 小鼠 | |||
| 年齡性別 | 雄；成年 | |||
| 組織來源 | Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細(xì)胞；巨噬細(xì)胞 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長，不用胰酶消化 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞 | |||
| STR位點(diǎn)信息 | Mouse STR 1-1：15,16;Mouse STR 1-2：17;Mouse STR 2-1：16;Mouse STR 3-2：14;Mouse STR 4-2：22.3;Mouse STR 5-5：14;Mouse STR 6-4：18;Mouse STR 6-7：12;Mouse STR 7-1：25.2;Mouse STR 8-1：13;Mouse STR 9-2：15;Mouse STR 11-2：17;Mouse STR 12-1;16;Mouse STR 13-1：16.2;Mouse STR 15-3：22.3;Mouse STR 17-2：14,16;Mouse STR 18-3：18;Mouse STR 19-2：14;Mouse STR X-1：24 | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 重要提醒 | 1、該細(xì)胞容易分化，不建議用胰酶消化。 2、密度過高時(shí)傳代細(xì)胞容易分化。 3、培養(yǎng)時(shí)存在少量分化細(xì)胞，屬于正?，F(xiàn)象。 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 生物安全等級 | 2 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體污染 | 無 | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; TIB-71 ECACC; 91062702 | |||
| 培養(yǎng)基 | 90%DMEM+10%FBS+1%PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 受體表達(dá)情況 | complement (C3) | |||
| 抗原表達(dá)情況 | H-2d | |||
| 基因表達(dá)情況 | lysozyme, H-2d; Tested and found negative for ectromelia virus (mousepox). | |||
| 倍增時(shí)間 | ~12-30小時(shí) | |||
| 染色體 | 32~41 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 發(fā)貨方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞 培養(yǎng)常見問題 | ||||
1.RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞收到貨，細(xì)胞不見？
原因分析：這是因?yàn)镽AW 264.7 細(xì)胞貼壁較松，快遞運(yùn)輸路上受到顛簸，可能會脫落。脫落的細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦。 解決方法：可以把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置4個(gè)小時(shí)就可以看到了。 如果靜置后看到的細(xì)胞仍偏少，請將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里，1200rpm(約250g)離心3分鐘，即可看到沉淀的細(xì)胞。 2.RAW 264.7細(xì)胞不貼壁怎么辦將RAW 264.7細(xì)胞離心收集，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞放到新的培養(yǎng)瓶里之后，可能會出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)漂浮、不貼壁的情況。這種情況下，把細(xì)胞離心收集，用1mL培養(yǎng)基重懸，慢慢地，輕輕地吹打，直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞，就可以重新鋪板了。 RAW 264.7脫落后傾向于抱團(tuán)，抱團(tuán)時(shí)細(xì)胞是活著的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團(tuán)的細(xì)胞吹散成單細(xì)胞，不然細(xì)胞很難重新貼壁。 3.RAW 264.7細(xì)胞形態(tài)是怎樣？RAW 264.7細(xì)胞被指定為粘附線并像單層一樣處理，但是培養(yǎng)物可以混合粘附和懸浮種群。 在培養(yǎng)RAW 264.7的初始階段，細(xì)胞附著并呈長方體狀，并帶有細(xì)長的延伸部分。隨著培養(yǎng)物變得更加密集，可能會有另一層圓形細(xì)胞附著在原始單層上。在極重的培養(yǎng)物中，細(xì)胞會釋放到培養(yǎng)基中。在重培養(yǎng)中，通常有附著細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。 4.RAW 264.7細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變異原因？原因分析：RAW264.7細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境惡劣或吞噬過多抗原后會促使該細(xì)胞呈現(xiàn)梭形、長梭形，形態(tài)發(fā)生變化。 解決辦法：改善細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，例如與細(xì)胞接觸的器皿保證無菌，使用質(zhì)量較高的胎牛血清。 5.RAW 264.7不同形態(tài)消化時(shí)間原因？原因分析：RAW264.7細(xì)胞老化后，形態(tài)發(fā)生變化，細(xì)胞偽足變得多且長，這使得這種形態(tài)的細(xì)胞變得較難消化。 解決辦法：可在正常時(shí)間終止消化，收集大部分正常狀態(tài)的細(xì)胞，再加入新的pbs繼續(xù)消化，而偽足過多過長的RAW264.7細(xì)胞，即使加pbs消化10min及以上也是難以消化下來的，勉強(qiáng)消化下來，對后續(xù)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也會產(chǎn)生較大影響，即沒必要每次傳代都收集全部細(xì)胞，已經(jīng)發(fā)生分化的細(xì)胞無需保留要及時(shí)丟棄。 6.RAW 264.7細(xì)胞生長速度緩慢原因？原因分析：傳代時(shí)匯合度過低會導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢，甚至難以貼壁，或是細(xì)胞發(fā)生了支原體污染。 解決辦法：定期傳代，控制好傳代比例，匯合度不可過低。及時(shí)進(jìn)行支原體檢測，如發(fā)現(xiàn)污染，即刻使用支原體去除試劑進(jìn)行清除。 7.RAW 264.7細(xì)胞分化處理？AW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)過程中密度過大，培養(yǎng)基顏色發(fā)黃都易刺激細(xì)胞分化，分化的RA264.7細(xì)胞呈多角形，體積明顯增大，時(shí)常有較長的黑色觸角。 8.RAW 264.7細(xì)胞如何避免細(xì)胞分化？RAW 264.7細(xì)胞消化時(shí)不能用胰酶消化，消化會造成細(xì)胞分化，客戶可以用移液槍吹打，會比巴氏吸管方便一點(diǎn)。 9.RAW 264.7細(xì)胞分化處理？前面我們說到RAW 264.7不能用胰酶消化，許多實(shí)驗(yàn)室用細(xì)胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。在這邊我們推薦“吹打傳代”方法，其操作步驟簡單，也能更好地控制細(xì)胞分化率。 一)吹打傳代操作步驟 a.輕拍幾下培養(yǎng)皿 b.用1ml 的槍或者巴氏管把細(xì)胞吹下來 c.細(xì)胞吹下來后轉(zhuǎn)移到15ml離心管 d.1200rpm(約250g) 離心3min e.去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞 f.按比例接種到新的培養(yǎng)皿中 二)吹打傳代時(shí)機(jī) a.當(dāng)細(xì)胞密度較低的時(shí)候，可能不太好吹下來。 b.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%的時(shí)候，最容易吹下。 三)操作注意事項(xiàng) a.RAW 264.7細(xì)胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好； b.分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時(shí)候請勿強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞； c.吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打; d.細(xì)胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時(shí)RAW 264.7 會出現(xiàn)太容易吹下的情況，連分化細(xì)胞都貼壁較松，此時(shí)更適宜用巴氏管吹打； e.培養(yǎng)時(shí)，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍。 10.RAW 264.7復(fù)蘇后存活率不高原因？RAW264.7細(xì)胞不同生長密度下細(xì)胞形態(tài)不同，若復(fù)蘇密度太高，細(xì)胞增殖過快，會加劇細(xì)胞的營養(yǎng)缺失，加速細(xì)胞老化;若復(fù)蘇密度太低，細(xì)胞生長緩慢。 解決辦法 直徑10cm的培養(yǎng)皿復(fù)蘇細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量控制在1.0×10^6~1.5×10^6個(gè)。 11.raw 264.7細(xì)胞大量堆疊，且出現(xiàn)百分之五十極化長腳現(xiàn)象raw 264.7細(xì)胞復(fù)起來也有極化的 養(yǎng)養(yǎng)就好了，可以消化下來重新鋪瓶。 12.RAW 264.7巨噬細(xì)胞培養(yǎng)要點(diǎn)RAW264.7屬貼壁細(xì)胞，最好的形態(tài)呈現(xiàn)為小而圓、透亮，但其也極易出現(xiàn)偽足的細(xì)胞形態(tài)，這也是大家細(xì)胞總是養(yǎng)不好、消化傳代困難的根源，同時(shí)也是實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不理想的罪魁禍?zhǔn)住?/p> 1、RAW264.7具有很強(qiáng)的吞噬能力，當(dāng)吞噬抗原后，細(xì)胞會釋放趨化因子，進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞伸出偽足，增強(qiáng)粘附攀爬能力。細(xì)胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會促進(jìn)該細(xì)胞呈現(xiàn)梭形、長梭形，鏡下會看到具有細(xì)長偽足的小細(xì)胞被類似上皮的梭形大細(xì)胞取代。 2、每次傳代都很難消化下來。用力過大則對細(xì)胞損傷較大，這種細(xì)胞傳代時(shí)接種密度要大，否則容易使巨噬細(xì)胞向終末細(xì)胞分化，細(xì)胞變成長形，并且不能回復(fù)，這是培養(yǎng)這種細(xì)胞時(shí)最需要注意的問題。 3、RAW264.7細(xì)胞生長時(shí)喜歡結(jié)伴。正常生長狀態(tài)應(yīng)該是一小片一小片的生長，片片之間不連接，等到長到更多更密的時(shí)候會連成大片，并且會疊加成層。所以，要很好地控制好細(xì)胞的生長速度，不要等到疊加成層的時(shí)候再傳代。 4、洗用PBS洗去培養(yǎng)基，取2mlPBS浸泡細(xì)胞放置于培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞放置培養(yǎng)箱5-10ml后用1ml的移液槍把細(xì)胞吹落并收集，一般可掉落70%左右，細(xì)胞生長速度快，掉不下來的大多是分化貼壁牢固的細(xì)胞，可直接丟棄。 5、用培養(yǎng)的培養(yǎng)基棄掉剩余1-2ml，用舊培養(yǎng)基吹落，舊培養(yǎng)基程酸性，也可有效吹落細(xì)胞。 6、密度保持在80%-90%即可傳代，密度太大也容易出現(xiàn)分化，注意掌握細(xì)胞的密度。 7、RAW264.7細(xì)胞傳代后貼壁時(shí)間較短，半小時(shí)就能貼很多，剛貼壁是細(xì)胞呈圓形，折光度很好，鏡下觀察如小珍珠狀一個(gè)個(gè)地散落于瓶底面。生長一段時(shí)間后，部分細(xì)胞會變成類似四角形，伸出偽足之類的。這個(gè)時(shí)候就是提醒你注意傳代了，這部分細(xì)胞如再不傳代，很容易就老化掉。 (a)在細(xì)胞生長的初始階段，細(xì)胞以貼壁的形式生長并呈現(xiàn)出長方體的形態(tài)和有“偽足”延伸。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，細(xì)胞呈現(xiàn)圓形并以疊加的形式生長。細(xì)胞密度達(dá)到一定的程度，會有細(xì)胞以懸浮的方式散落到到培養(yǎng)基中，鏡下觀察會發(fā)現(xiàn)懸浮和貼壁的細(xì)胞會同時(shí)出現(xiàn)。 (b)該細(xì)胞傳代時(shí)不需要用胰酶消化。傳代時(shí)，用無菌細(xì)胞刮刮拭培養(yǎng)表面將細(xì)胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中。 (c)該細(xì)胞形態(tài)上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當(dāng)細(xì)胞密度較大時(shí)，細(xì)胞會輕微脫落變圓或者許多細(xì)胞堆積在一起，有些細(xì)胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細(xì)胞是存活的，在傳代時(shí)應(yīng)收集起來，離心后細(xì)胞沉淀可以繼續(xù)培養(yǎng)。 (d)血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞貼壁能力變化，應(yīng)選用高質(zhì)量的胎牛血清。 (e)該細(xì)胞不建議使用胰酶消化，胰酶會刺激分化; 超過3天不傳代細(xì)胞容易分化;培養(yǎng)時(shí)，存在少量分化細(xì)胞，屬于正?，F(xiàn)象。 (f)若需控制細(xì)胞的分化，RAW264.7使用吹打傳代，能更好地控制細(xì)胞分化率。 | ||||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 | |||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 2.加2 mL預(yù)熱的PBS溶液于培養(yǎng)瓶中，使PBS溶液浸潤所有細(xì)胞，然后輕輕吹下細(xì)胞，將吹下來的細(xì)胞及細(xì)胞懸液收集到無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 3.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請售后時(shí)請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費(fèi)售后。 | |||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量凍存即可。 如果沒要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基是否需要預(yù)熱
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基需要預(yù)熱?。預(yù)熱培養(yǎng)基可以減少環(huán)境的改變對細(xì)胞狀態(tài)的影響，避免細(xì)胞因溫度變化而產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而保持細(xì)胞的健康狀態(tài)和生長環(huán)境的一致性?。可以提前半小時(shí)左右，將培養(yǎng)基、PBS和胰酶在37°C下預(yù)熱，把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺中紫外照射滅菌。
血清使用前需不需要滅活
一般培養(yǎng)細(xì)胞所使用的血清不需要滅活，滅活會導(dǎo)致血清部分營養(yǎng)損失、沉淀增多，滅活的優(yōu)勢(主要是滅活補(bǔ)體以免影響細(xì)胞生長)在實(shí)際培養(yǎng)過程中對于促進(jìn)細(xì)胞生長并沒有太大意義。部分細(xì)胞對于生長條件敏感，可以嘗試滅活血清培養(yǎng)，但大部分細(xì)胞并不需要。
血清融化后有沉淀會影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎
血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經(jīng)凍融后析出，導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無關(guān)，大部分品牌的血清都會有這種情況，不會影響細(xì)胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時(shí)可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細(xì)胞污染即可。
細(xì)胞為何生長不均勻
細(xì)胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時(shí)搖勻，但在細(xì)胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導(dǎo)致細(xì)胞生長不均勻。
細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理
一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長是正常現(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán))。
細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正?，F(xiàn)象
部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個(gè)是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時(shí)間等方法來調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。
細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系)；或者消化過度，對細(xì)胞有嚴(yán)重影響；或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞，傳代太?。换蛘呱L較快的細(xì)胞，傳代較密，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長)。
如何區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞
顯微鏡下觀察：活細(xì)胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細(xì)胞較暗。也可以通過臺盼藍(lán)染色來計(jì)算細(xì)胞活力。
何用臺盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞
用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000 個(gè)/毫升，在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?；罴?xì)胞排斥臺盼蘭，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞，注意計(jì)數(shù)需在加入臺盼藍(lán)10min內(nèi)完成。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的，可直接用計(jì)數(shù)儀進(jìn)行
何時(shí)須更換培養(yǎng)基
視細(xì)胞生長密度而定，常規(guī)細(xì)胞2天更換培養(yǎng)基。
細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好
一般情況下細(xì)胞生長至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長都有一個(gè)要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代，這類細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，否則會引起細(xì)胞分化。
貼壁細(xì)胞總有部分圓形還會有一些漂浮的是正常嗎
大部分貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)都會有一些圓形透亮的細(xì)胞存在，也會有一些圓形細(xì)胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細(xì)胞或由于局部空間不足被擠出的細(xì)胞，只要細(xì)胞持續(xù)增殖，都會有一些圓形細(xì)胞或脫落漂浮細(xì)胞，不影響細(xì)胞整體增殖和實(shí)驗(yàn)，保持正常換液、傳代周期即可。細(xì)胞具體情況也可以參考細(xì)胞庫不同細(xì)胞照片比對，大部分貼壁細(xì)胞都會有圓形細(xì)胞、脫落細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)顆粒等情況。
細(xì)胞內(nèi)很亮小泡泡是什么東西
一部分情況下細(xì)胞內(nèi)小亮點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)黑色顆粒或者一些粘附在細(xì)胞表面的碎片，這種黑點(diǎn)會在調(diào)整顯微鏡焦距時(shí)呈小黑點(diǎn)或者小亮點(diǎn)，容易被誤認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)小泡，其實(shí)只是細(xì)胞內(nèi)部或表面一些物質(zhì)折光形成的光學(xué)現(xiàn)象。也有些是細(xì)胞內(nèi)部脂滴，例如3T3-L1細(xì)胞在部分培養(yǎng)條件下可以明顯看到內(nèi)部脂滴，染色后更加清晰。
部分細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)確實(shí)可能會有空泡，可以參考細(xì)胞庫照片比對。若細(xì)胞突然出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)空泡增多現(xiàn)象，通常是細(xì)胞受到壓力的表現(xiàn)，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌劑、不適當(dāng)?shù)腃O2環(huán)境對培養(yǎng)基中碳酸氫鈉濃度影響或培養(yǎng)基的營養(yǎng)消耗殆盡。
細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點(diǎn)、污染如何防范
可從以下幾個(gè)方面進(jìn)行判斷： 細(xì)胞小黑點(diǎn)如何判斷 1、運(yùn)動性：很多會動的小黑點(diǎn)，只是發(fā)生布朗運(yùn)動的細(xì)胞碎片。從運(yùn)動性上比較，浮躁的細(xì)菌活躍的多。 2、培養(yǎng)基的渾濁度：如果在顯微鏡下無法辨認(rèn)，那就交給時(shí)間吧。細(xì)胞培養(yǎng)基對于細(xì)菌來說是非常營養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細(xì)菌就會大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會變渾濁。通常在12小時(shí)內(nèi)就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時(shí)內(nèi)就非常明顯。被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基變黃且渾濁、未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基偏紅且澄清。 3、接種平板：將懷疑污染物接種在微生物培養(yǎng)平板中，觀察菌落形成情況。碎片?細(xì)菌?一目了然。
細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)與ATCC等官網(wǎng)照片有點(diǎn)區(qū)別正常嗎?
由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)環(huán)境、操作方法、培養(yǎng)基及血清品牌批次不同，細(xì)胞實(shí)際培養(yǎng)形態(tài)、狀態(tài)、生長速度等培養(yǎng)特性均有可能發(fā)生改變，甚至顯微鏡拍攝效果對細(xì)胞形態(tài)判斷都會有有一定影響。因此細(xì)胞形態(tài)只能作為實(shí)驗(yàn)過程中的參考項(xiàng)目，無法作為細(xì)胞狀態(tài)或者類型的判斷依據(jù)。實(shí)際上，細(xì)胞在不同細(xì)胞庫培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)都可能存在一定差異。
問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細(xì)胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？
答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
問：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？
答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。
問：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時(shí)按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復(fù)蘇會有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。
問：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。
1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液，細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況等，重發(fā)
2.細(xì)胞免費(fèi)售后期為一周，一周內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時(shí)拍照反饋。超出一周沒有任何反饋視為細(xì)胞培養(yǎng)正常，后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問題不再免費(fèi)重發(fā)
3.申請售后時(shí)請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，若無清晰照片及相應(yīng)信息，不予免費(fèi)售后
4.售后僅針對由于細(xì)胞自身狀態(tài)問題導(dǎo)致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細(xì)胞多次，出現(xiàn)死亡或者污染時(shí)不予免費(fèi)售后
5.凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶未反饋并復(fù)蘇2管失敗，我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)。凍存細(xì)胞售后均發(fā)復(fù)蘇培養(yǎng)，若要重發(fā)凍存細(xì)胞，需補(bǔ)加200元干冰運(yùn)輸費(fèi)用
6.客戶自行凍存細(xì)胞一定要注意凍存后復(fù)蘇一管檢查凍存活性，避免凍存死亡導(dǎo)致絕種。我方不對客戶凍存細(xì)胞死亡負(fù)責(zé)，客戶凍存細(xì)胞死亡時(shí)不予免費(fèi)售后
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