MKN-7人胃癌細(xì)胞（STR鑒定報(bào)告）

貨號(hào)：IM-H456

規(guī)格：1×10⁶cells/T25或1mL凍存管

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：RPMI-1640+10% FBS+1% P/S

傳代比例：1:2至1:3，每周3次

培養(yǎng)環(huán)境：氣相：100%空氣;溫度：37℃

MKN-7消化時(shí)間建議培養(yǎng)箱5分鐘以上

MKN-7人胃癌細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

價(jià)格：￥1800

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背景介紹培養(yǎng)操作凍存步驟售后服務(wù)

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱(chēng)	MKN-7人胃癌細(xì)胞（STR鑒定報(bào)告）
細(xì)胞別稱(chēng)	MKN-7; MKN 7
種屬來(lái)源	人
年齡性別	女，39歲
組織來(lái)源	胃
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)	10代以?xún)?nèi)
STR位點(diǎn)	Amelogenin：X；CSF1PO：10,13；D3S1358：17；D5S818：9,13；D7S820：9；D8S1179：15；D13S317：8,12；D16S539：9,10；D18S51：13,18；D21S11：29,32.2；FGA：23；PentaD：10,11；PentaE：18；TH01：7,9；TPOX：9；vWA：17
STR鑒定圖片
生物安全等級(jí)	1
細(xì)胞規(guī)格	1×10 ⁶cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)	無(wú)
保藏機(jī)構(gòu)	CLS; JCRB; RCB; TKG
培養(yǎng)基	RPMI-1640＋10%FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件	氣相：100%空氣；溫度：37℃
凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
細(xì)胞貨期	現(xiàn)貨，1周左右
運(yùn)輸方式	復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用）順豐快遞
供應(yīng)限制	僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用
特別說(shuō)明	以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主
MKN-7人胃癌細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題
1.MKN-7人胃癌細(xì)胞傳代密度 MKN-7細(xì)胞呈上皮樣生長(zhǎng)，是密度依賴(lài)型細(xì)胞，接種細(xì)胞數(shù)量直接影響細(xì)胞生長(zhǎng)速度。建議融合度90%以上再進(jìn)行傳代。 2.MKN-7人胃癌細(xì)胞消化時(shí)間多久 MKN-7細(xì)胞不易消化，消化時(shí)間建議培養(yǎng)箱5分鐘以上，顯微鏡下觀察細(xì)胞全部脫落，再終止消化。終止后，建議使用完培收集2-3次，盡量減少操作損失。 3.MKN-7細(xì)胞凍存密度多大凍存MKN-7人胃癌細(xì)胞時(shí)，建議密度要略大于普通細(xì)胞(兩盤(pán)10cm皿凍3管)，以保證復(fù)蘇后細(xì)胞量。 4.MKN-7細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng) a.生長(zhǎng)速度很慢 MKN-7人胃癌細(xì)胞倍增時(shí)間約3天左右，正常培養(yǎng)5~7天可傳代一次; b.貼壁形態(tài)展開(kāi)較大 MKN-7人胃癌細(xì)胞消化之后一瓶細(xì)胞量比較少，傳代時(shí)的比例建議1：2，凍存時(shí)1瓶細(xì)胞只能凍一管; c.折光度較低 MKN-7人胃癌細(xì)胞在顯微鏡下觀察時(shí)，輪廓有時(shí)不清晰，觀察時(shí)顯微鏡亮度請(qǐng)勿太高，否則可能看不到細(xì)胞邊界; d.較難消化常規(guī)的消化方法難以把控，加入培養(yǎng)基后細(xì)胞會(huì)迅速貼壁。建議使用浸泡消化，使用胰酶完全浸潤(rùn)MKN-7人胃癌細(xì)胞，直接放入37℃ 的環(huán)境中進(jìn)行消化，消化時(shí)間一般在7~10分鐘。待部分細(xì)胞脫壁漂起后，鏡下觀察，大部分細(xì)胞有脫壁跡象后加入適量胰酶，輕輕吹打，將細(xì)胞吹落、吹散，隨后吸出器皿，加入培養(yǎng)基終止消化，離心收集。若還有少量細(xì)胞無(wú)法輕輕吹下，則在吸出脫落細(xì)胞后，加入胰酶繼續(xù)消化再收集。小貼士：使用這種消化方法，可能會(huì)造成一定的細(xì)胞損失。
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
到貨方式	復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸
收貨處理	1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系；如果沒(méi)有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
傳代密度	細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代方法	1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
到貨方式	凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸
收貨處理	1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復(fù)蘇操作	將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
注意事項(xiàng)	1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶(hù)先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶(hù)在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 5.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類(lèi)細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞? 如果沒(méi)要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。
凍存方法	待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10⁶~1x10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項(xiàng)	凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

參考文獻(xiàn)

Circular RNA circ0007360 Attenuates Gastric Cancer Progression by Altering the miR-762/IRF7 Axis. Front Cell Dev Biol. 2022 Feb 17;10:789073. doi: 10.3389/fcell.2022.789073. PMID: 35252169; PMCID: PMC8891931.

作者：Xing Y, Chen H, Guo Z, Zhou X.

細(xì)胞：Human gastric cancer cell lines AGS and MKN-7

2022年影響因子/JCR分區(qū)：6.081/Q1

科研細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)常見(jiàn)問(wèn)題

問(wèn)：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過(guò)程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問(wèn)：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？

答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話(huà)，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶(hù)復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以?xún)龃婕?xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。

問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？

答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過(guò)3次，其次需要注意無(wú)菌操作，避免污染。

問(wèn)：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請(qǐng)及時(shí)按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問(wèn)：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對(duì)復(fù)蘇會(huì)有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。

問(wèn)：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。