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原代細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

如何判斷原代細(xì)胞衰老了

1.形態(tài)學(xué)的觀察，細(xì)胞突起變大、或細(xì)胞扁平;2.β半乳糖苷染色判斷細(xì)胞是否衰老;3.增殖速率明顯下降;4.對相關(guān)的標(biāo)志物進(jìn)行檢測。

如何確保分離的原代細(xì)胞的活性

1.組織離體時(shí)間不能太久;2.低溫冰上分離，但也不能直接從-80℃冰箱上取出一塊冰;3.無菌操作體系;4.消化酶的濃度和消化時(shí)間的把控。

原代細(xì)胞可以無限的增殖

與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴(kuò)增能力。建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個(gè)增值困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細(xì)胞形態(tài)，因?yàn)樯倭炕祀s的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)可能隨著時(shí)間的推移，大量生長從而成為主要細(xì)胞。

如何讓原代細(xì)胞一直保持增殖能力

原代細(xì)胞傳代有限，可以通過構(gòu)建永生化細(xì)胞株使其獲得無限增殖的能力，即轉(zhuǎn)變?yōu)橛郎?xì)胞系。

原代細(xì)胞一般第幾代做實(shí)驗(yàn)比較好

5代以內(nèi)，3代最好。有些細(xì)胞比如特殊，如神經(jīng)元、巨噬為終末分化細(xì)胞，增殖能力很弱，建議客戶收到細(xì)胞請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)后直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，不建議傳代進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)和凍存。

原代細(xì)胞可以凍存嗎？凍存復(fù)蘇后活率差的原因是什么?

這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長性能的改變。凍存后復(fù)蘇活率低需要考慮凍存前細(xì)胞活性，細(xì)胞量以及凍存體系，凍存體系是指用的含血清的凍存液，還是一步凍存液，不同凍存方法對應(yīng)的操作方法不同需要注意。

通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因?yàn)檫@可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。

貼壁的原代細(xì)胞很難消化是怎么回事

細(xì)胞初代培養(yǎng)時(shí)在細(xì)胞皿上培養(yǎng)的時(shí)間過長，解決方法可以將酶的濃度降低，37℃培養(yǎng)箱中延長消化時(shí)間，或者分步消化。

原代上皮細(xì)胞傳代之后形態(tài)發(fā)生變化

上皮細(xì)胞，傳代容易變形，上皮細(xì)胞傳代后，不容易再次貼壁，這個(gè)時(shí)候可以使用代膜的培養(yǎng)瓶或者瓶子包被一下(基質(zhì)膠，鼠尾膠原，多聚賴氨酸等)都可以，上皮細(xì)胞，傳代非常有限， 且生長比較慢，一般建議盡快實(shí)驗(yàn)，不適合長時(shí)間去大量擴(kuò)增培養(yǎng)。

因原代細(xì)胞體外傳代有限，傳代次數(shù)皆為大部分人使用后的平均數(shù)據(jù)，受操作手法，培養(yǎng)環(huán)境，培養(yǎng)條件等因素綜合影響，建議收到后，盡快完成實(shí)驗(yàn)，不建議反復(fù)凍存一直傳代擴(kuò)增。

提取原代細(xì)胞經(jīng)常發(fā)生污染可以怎樣改善

首先要確保細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)室是否存在細(xì)菌污染，如果存在問題，需要將實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消毒，培養(yǎng)箱滅菌，檢查試劑耗材是否可用，第二個(gè)就是注意無菌操作，保證試劑、剪刀鑷子等無菌，第三是可以在培養(yǎng)液中加抗生素，雙抗、兩性霉素等。

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小鼠肺微血管周細(xì)胞培養(yǎng)視頻教程

• 第一節(jié):復(fù)蘇細(xì)胞收貨處理教程

• 第二節(jié):凍存細(xì)胞收貨處理教程

• 第三節(jié):細(xì)胞復(fù)蘇教程

• 第四節(jié):貼壁細(xì)胞傳代步驟

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