貨號(hào)：IM-M001 來(lái)源：JCRB
規(guī)格：1×106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)基：90%高糖DMEM+10% FBS+PS
傳代比例：1:2至1:3，每周 3次
B16細(xì)胞內(nèi)含黑色素，在細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生黑色素
貨期：現(xiàn)貨，1周左右發(fā)貨(復(fù)蘇包郵)，凍存當(dāng)天或隔天發(fā)貨(收干冰加運(yùn)輸費(fèi)200元)
價(jià)格：￥1200
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥800
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
B16細(xì)胞源于C57BL/6J小鼠黑色素瘤，可以產(chǎn)生黑色素，同基因小鼠體內(nèi)移植可成瘤。
| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞（種屬鑒定報(bào)告） | |||
| 細(xì)胞別稱 | B-16; B16 melanoma; B16 subline B78; B78 | |||
| 種屬 | C57BL/6小鼠 | |||
| 組織來(lái)源 | 皮膚 | |||
| 生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 生物安全等級(jí) | 1 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測(cè) | 無(wú) | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | JCRB; JCRB0202 KCB; KCB 93030YJ RCB; RCB1283 TKG; TKG 0144 | |||
| 培養(yǎng)基 | 90%DMEM+10% FBS+PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題 | ||||
1.B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)?B16細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，培養(yǎng)密度不宜過(guò)高，需要及時(shí)傳代和換液，細(xì)胞密度過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差，死亡; B16細(xì)胞內(nèi)含黑色素，在細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生黑色素，遇到培養(yǎng)基顏色變深，消化下來(lái)的細(xì)胞離心后，沉淀為黑褐色或者是灰黑色，此為正常現(xiàn)象。
2.B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞黑色素形成原因?B16細(xì)胞在體外培養(yǎng)有兩種培養(yǎng)條件：快速分裂增殖和分化成熟，培養(yǎng)基條件不同可改變?cè)摷?xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，使用RPMI-1640培養(yǎng)基可使其快速增殖，而使用DMEM培養(yǎng)基能誘導(dǎo)細(xì)胞分化成熟并合成黑色素。建議正常擴(kuò)增凍存請(qǐng)使用RPMI-1640培養(yǎng)基，若需要進(jìn)行分泌黑色素等后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，可以在擴(kuò)增凍存細(xì)胞后更換為DMEM培養(yǎng)來(lái)滿足實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。 更換培養(yǎng)條件，比如由RPMI-1640更換成DMEM會(huì)導(dǎo)致黑色素大量形成，細(xì)胞培養(yǎng)基變黑，但若穩(wěn)定培養(yǎng)時(shí)未更換培養(yǎng)基，出現(xiàn)培養(yǎng)基突然變黑的情況，有可能是以下幾個(gè)原因引起的： 細(xì)胞死亡 如果B16細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)大量細(xì)胞死亡，細(xì)胞的代謝產(chǎn)物和細(xì)胞碎片可能會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基變黑。這可能是由于細(xì)胞因狀態(tài)變差、污染或其他因素引起的。 解決方法 觀察B16細(xì)胞狀態(tài)，確保細(xì)胞的生長(zhǎng)條件和培養(yǎng)基正確。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞死亡過(guò)多，需要重新復(fù)蘇細(xì)胞。 細(xì)胞污染 如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)污染(細(xì)菌、真菌、支原體、黑膠蟲(chóng)等)，這些微生物的生長(zhǎng)和代謝產(chǎn)物可能導(dǎo)致培養(yǎng)基變黑。 解決方法 排查污染源，檢查培養(yǎng)環(huán)境，使用的試劑、耗材，注意無(wú)菌操作。如果遇到污染情況，應(yīng)立即更換培養(yǎng)基，進(jìn)行無(wú)菌處理并消除污染源。 3.B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇？B16-F10細(xì)胞可以在多種培養(yǎng)基中生長(zhǎng)和繁殖，如DMEM、RPMI-1640等。使用RPMI-1640培養(yǎng)基可使其快速增殖，而使用DMEM培養(yǎng)基能誘導(dǎo)細(xì)胞分化成熟并合成黑色素。 | ||||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系；如果沒(méi)有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 | |||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 5.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類(lèi)細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。 | |||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞? 如果沒(méi)要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
1972年始，迄今為止，關(guān)于小鼠黑色素瘤細(xì)胞(B16細(xì)胞)的文獻(xiàn)已有4548篇。
在pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中用“b16 cell line”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為1972年L M Pasztor在Cancer Res. 發(fā)表的“An amelanotic variant of B16 malignant melanoma”。
B16細(xì)胞系于1954年建系。B16細(xì)胞來(lái)源于C57BL/6J小鼠，這些小鼠在緬因州杰克遜實(shí)驗(yàn)室自發(fā)地在皮膚中形成腫瘤，常被用于研究黑色素瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移。B16是產(chǎn)生黑色素的上皮細(xì)胞，具有在脾臟、肝臟和肺部轉(zhuǎn)移的能力。黑色素瘤B16細(xì)胞以單層形式生長(zhǎng)，并表現(xiàn)出上皮樣和紡錘形細(xì)胞形態(tài)。B16細(xì)胞系的大小約為15.4 μm。B16細(xì)胞有不同的克隆亞系，包括B16GMCSF，B164A5，B16FLT3和B16F10。
在生物學(xué)特性方面，B16細(xì)胞常用于表達(dá)多種與黑色素瘤相關(guān)的基因和蛋白，包括酪氨酸酶、c-Kit和趨化因子受體CXCR4。
B16細(xì)胞被用于研究黑色素瘤的發(fā)病機(jī)制，包括黑色素生成、細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。
在腫瘤轉(zhuǎn)移的研究中，B16細(xì)胞被用于探索腫瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞之間的相互作用，以及腫瘤微環(huán)境對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。
B16細(xì)胞也被用于開(kāi)發(fā)和測(cè)試新的抗腫瘤藥物和治療方法，包括天然產(chǎn)物和中藥提取物。
小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16的標(biāo)志物包括MAA、Tyrosinase、Tyrosine Kinase、Cytokeratin、VEGFR、EGFR、Cyclin D1、Bcl-2、Bax、p53、Rb、Integrins和CAMs等。這些標(biāo)志物對(duì)于研究B1細(xì)胞的生物學(xué)特性和功能至關(guān)重要。
問(wèn)：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過(guò)程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問(wèn)：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？
答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？
答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過(guò)3次，其次需要注意無(wú)菌操作，避免污染。
問(wèn)：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請(qǐng)及時(shí)按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問(wèn)：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對(duì)復(fù)蘇會(huì)有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。
問(wèn)：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。
細(xì)胞重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)
1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；
2.收到細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；
3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
5.細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；
6.視具體情況而定。
細(xì)胞不予重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)
1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的，不重發(fā)；
6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)；
7.視具體情況而定。
常見(jiàn)細(xì)胞污染類(lèi)型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染類(lèi)型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲(chóng)污染,黑膠蟲(chóng)污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來(lái)源,一般是來(lái)自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤(rùn)的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細(xì)胞聚團(tuán)的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細(xì)胞可能聚集的一些原因包括:1.過(guò)度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過(guò)度生長(zhǎng)、5.污染等;如何避免聚團(tuán)細(xì)胞的生成;首先確認(rèn)當(dāng)前細(xì)胞生長(zhǎng)密度及狀態(tài),80%左右的生長(zhǎng)密度即可進(jìn)行傳代,此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數(shù)量也···
細(xì)胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細(xì)胞空泡情況有1.細(xì)胞老化2.培養(yǎng)液錯(cuò)誤配制;3.細(xì)胞消化時(shí)操作不當(dāng);4.污染等等,如細(xì)胞老化,解決方法,原代細(xì)胞使用較低代次進(jìn)行實(shí)驗(yàn),傳代細(xì)胞避免傳代次數(shù)過(guò)高
細(xì)胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細(xì)胞全換液;如果是貼壁細(xì)胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補(bǔ)充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細(xì)胞半換液;"細(xì)胞半換液"又稱"細(xì)胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進(jìn)去,選它的原因其實(shí)與前面不加···
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
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