背景簡(jiǎn)介
C166是從12天大的小鼠胚胎卵黃囊中分離出來(lái)的內(nèi)皮細(xì)胞系,可用于心血管疾病和干細(xì)胞研究。該細(xì)胞系應(yīng)可用于研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞分化和確定器官特異性內(nèi)皮細(xì)胞異質(zhì)性建立的機(jī)制。該細(xì)胞系可以支持多能造血干細(xì)胞的穩(wěn)定增殖,從而產(chǎn)生足夠數(shù)量的細(xì)胞用于研究其后續(xù)發(fā)育和分化的機(jī)制,C166細(xì)胞系是由
F1 胚胎細(xì)胞建立的,F(xiàn)1 胚胎是通過(guò)將雌性 NMRI/GSF 小鼠與轉(zhuǎn)基因人類 fes (fps/fes) 原癌基因的雄性 CD-1
小鼠交配獲得的。這些小鼠表達(dá)人類 fes (fps/fes)
原癌基因的激活等位基因的多個(gè)拷貝,并表現(xiàn)出血管豐富性,進(jìn)展為多灶性血管瘤。C166細(xì)胞表現(xiàn)出正常的內(nèi)皮特征,例如放置在基質(zhì)膠上時(shí)重排成管狀結(jié)構(gòu),并在匯合時(shí)保留鵝卵石形態(tài)。細(xì)胞組成型表達(dá)由抗體
MECA-99 識(shí)別的血管尋址蛋白。
該細(xì)胞系表達(dá)高水平的由 fes (fps/fes) 原癌基因編碼的細(xì)胞質(zhì)蛋白酪氨酸激酶。
一、細(xì)胞基本屬性 |
細(xì)胞名稱 | C166小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞(免疫熒光鑒定報(bào)告) |
細(xì)胞別稱 | C166;Clone 166;小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞 |
種屬來(lái)源 | 小鼠 |
組織來(lái)源 | 卵黃囊 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
形態(tài)特征 | 成纖維細(xì)胞樣 |
背景介紹 | C166小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞CD44免疫熒光染色為陽(yáng)性,CD45免疫熒光染色為陰性,純度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 |
培養(yǎng)基 | DMEM+10%FBS+PS |
重要提醒 | 該細(xì)胞對(duì)血清要求比較高 |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-2581 |
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ |
傳代比例 | 首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或2個(gè)6cm皿 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
產(chǎn)品貨期 | 2周左右 |
運(yùn)輸方式 | T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞(包郵) |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
到貨方式 | 活細(xì)胞(常溫運(yùn)輸)
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收貨處理 | 1.收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有,請(qǐng)立即和我們聯(lián)系;如果沒(méi)有,請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁,再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài),在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí),最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 |
傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) |
傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞,棄去消化液,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm離心4 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
到貨方式 | 凍存細(xì)胞(干冰運(yùn)輸) |
收貨處理 | 1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨,請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā),細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 |
培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。 3. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息,建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 5. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同,導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異,對(duì)于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為,不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。 |
三、細(xì)胞凍存操作 |
凍存液配方 | 無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存 |
凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞,那就用1ml完培重懸后,取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù),剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞? 如果沒(méi)要求,那就按平時(shí),一個(gè)皿凍一管。 |
凍存方法 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加1 mL血清重懸細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 3.將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 |
C166細(xì)胞文獻(xiàn)溯源
1996年始,迄今為止,關(guān)于Mouse vascular endothelial cells C166人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞的文獻(xiàn)有29篇。

在pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中用“Mouse vascular endothelial cells C166”搜索該關(guān)鍵詞,第一篇為1996年S J Wang 在“In Vitro Cell Dev Biol Anim.”上發(fā)表的“Isolation and propagation of yolk-sac-derived endothelial cells from a hypervascular transgenic mouse expressing a gain-of-function fps/fes proto-oncogene”。

C166細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域
C166細(xì)胞被廣泛用作血管內(nèi)皮細(xì)胞的模型,用于研究血管生成、炎癥、細(xì)胞間相互作用等。例如,研究人員利用C166細(xì)胞研究了炎癥反應(yīng)中的細(xì)胞因子表達(dá)和免疫細(xì)胞的相互作用,以及氧化應(yīng)激和DNA損傷在C166細(xì)胞中的作用和分子機(jī)制。此外,還研究了影響C166細(xì)胞周期和增殖的因素,以及特定基因的表達(dá)和調(diào)控。
在藥物篩選和毒理學(xué)研究方面,研究人員利用C166細(xì)胞評(píng)估各種藥物、化合物的毒性和生物活性,包括抗腫瘤藥物、天然產(chǎn)物、食品添加劑等。例如,研究人員研究了抗腫瘤藥物對(duì)C166細(xì)胞的影響,以及它們?cè)谥委煱┌Y方面的潛力。此外,還研究了天然產(chǎn)物和食品添加劑對(duì)C166細(xì)胞的生物活性,以及它們?cè)诩膊☆A(yù)防方面的潛在作用。
在細(xì)胞凋亡和自噬方面,學(xué)者探索了誘導(dǎo)C166細(xì)胞凋亡和自噬的化合物,以及這些過(guò)程的分子機(jī)制。例如,研究人員研究了特定藥物或化合物如何影響C166細(xì)胞的凋亡和自噬過(guò)程,以及這些過(guò)程在疾病發(fā)生和發(fā)展中的作用。
在炎癥和免疫反應(yīng)中,學(xué)者研究了C166細(xì)胞在炎癥和免疫反應(yīng)中的作用,包括炎癥因子的表達(dá)和免疫細(xì)胞的相互作用。例如,研究人員研究了C166細(xì)胞如何響應(yīng)炎癥刺激,以及它們?nèi)绾闻c免疫細(xì)胞相互作用,從而影響炎癥反應(yīng)。
在氧化應(yīng)激和DNA損傷方面,學(xué)者研究了氧化應(yīng)激和DNA損傷在C166細(xì)胞中的作用和分子機(jī)制。例如,研究人員研究了氧化應(yīng)激如何影響C166細(xì)胞的存活和功能,以及DNA損傷如何誘導(dǎo)C166細(xì)胞的凋亡或自噬。
在細(xì)胞周期和增殖方面,學(xué)者研究了影響C166細(xì)胞周期和增殖的因素。例如,研究人員研究了特定藥物或化合物如何影響C166細(xì)胞的周期進(jìn)程和增殖能力。
在基因表達(dá)和調(diào)控方面,利用C166細(xì)胞研究特定基因的表達(dá)和調(diào)控。例如,研究人員研究了特定信號(hào)通路或環(huán)境因素如何調(diào)節(jié)C166細(xì)胞中特定基因的表達(dá)。
在微生物與宿主相互作用中,研究人員研究了腸道微生物與C166細(xì)胞之間的相互作用。例如,研究人員研究了腸道微生物如何影響C166細(xì)胞的存活和功能,以及C166細(xì)胞如何響應(yīng)腸道微生物的刺激。
在放射生物學(xué)中,學(xué)者探索了放射治療對(duì)C166細(xì)胞的影響。例如,研究人員研究了放射治療如何誘導(dǎo)C166細(xì)胞的凋亡或自噬,以及這些過(guò)程在放射治療效果中的作用。
在納米醫(yī)學(xué)中,學(xué)者研究了納米粒子、脂質(zhì)體等在C166細(xì)胞中的攝取和作用機(jī)制。例如,研究人員研究了特定納米粒子如何被C166細(xì)胞攝取,以及它們?cè)诩?xì)胞中的分布和作用。
研究涵蓋了藥物篩選、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)等多個(gè)方面,為理解血管疾病的發(fā)病機(jī)制和開(kāi)發(fā)新的治療方法提供了重要的基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)。
C166細(xì)胞標(biāo)志物:
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞系C166的標(biāo)志物包括CD31、CD34、VEGF受體(KDR/Flk-1、Flt-1)、Tie-2、VE-cadherin、PECAM-1、CD73、CD105和β-catenin等。這些標(biāo)志物對(duì)于識(shí)別和研究C166血管內(nèi)皮細(xì)胞至關(guān)重要。
答:部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件,我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件,出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過(guò)程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件,為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng),建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
答:細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式,常溫細(xì)胞貨期一般一周左右,復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨;凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話,一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨,細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管,實(shí)際發(fā)貨2管;原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管,凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸,所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
答:一般不建議重復(fù)利用,特別是貼壁不牢固細(xì)胞,重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差,漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過(guò)3次,其次需要注意無(wú)菌操作,避免污染。
答:不能回收使用的,運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多,所以收到細(xì)胞之后,培養(yǎng)箱靜置4-6h之后,請(qǐng)及時(shí)按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
答:這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn),與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān),偶爾有遇到這種情況,不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響,可以復(fù)蘇看下。
4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā);
5.細(xì)胞活性問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā);