U251MG人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞簡(jiǎn)介

U-251 MG(U251MG)人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞是來源于人星形膠質(zhì)瘤組織，經(jīng)永生化處理的穩(wěn)定細(xì)胞系，主要用于人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)科研研究。星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤(astrocytome)是最常見的膠質(zhì)瘤，約占膠質(zhì)細(xì)胞瘤的65%。研究表明，該腫瘤中原癌基因C-sis有過度表達(dá)，erb-B1則有擴(kuò)增。C-sis的過度表達(dá)導(dǎo)致PDGF-β鏈的增加;erb-B1擴(kuò)增則可使EGF受體過度表達(dá)。此外，腫瘤抑制基因P53、Rb、P16可有失活，提示這些改變可能與腫瘤性的生長(zhǎng)有關(guān)。

星形細(xì)胞瘤是一種始于腦或脊髓的細(xì)胞生長(zhǎng)物。生長(zhǎng)物被稱為腫瘤，始于星形膠質(zhì)細(xì)胞。星形膠質(zhì)細(xì)胞支持和連接腦和脊髓中的神經(jīng)細(xì)胞。星形細(xì)胞瘤的癥狀取決于腫瘤的位置。腦部星形細(xì)胞瘤可引起人格改變、癲癇發(fā)作、頭痛和惡心。

u251細(xì)胞形態(tài)

U251MG人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞產(chǎn)品信息

細(xì)胞名稱：U251MG，人類星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞

細(xì)胞別稱：U-251 MG; U-251-MG; U-251_MG; U251-MG; U251MG; U-251; U251; U251n; U251N; 251 MG; 251MG; 251 MG(6);人類星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞

種屬來源：人

組織來源：腦

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

STR位點(diǎn)信息：Amelogenin：X;CSF1PO：12,13;D2S1338：22,24;D3S1358：16,17;D5S818：11;D7S820：10,12;D8S1179: 13,15;D13S317：10,11;D16S539：12;D18S51：13;D19S433：13,15;D21S11：29;FGA：21,25;PentaD：10,12;PentaE：7;TH01：9.3;TPOX：8;vWA：16,18

培養(yǎng)基：89%DMEM+10%FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

U251MG細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

U251細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件

實(shí)驗(yàn)室條件

1. 無菌環(huán)境：無菌室包括更衣室，緩沖間，風(fēng)淋間，操作間

2. 儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)-操作平臺(tái)、CO2 培養(yǎng)箱-細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境、倒置顯微鏡-觀察細(xì)胞、離心機(jī)-離心收集細(xì)胞、冰箱-放置培養(yǎng)基等試劑、水浴鍋-復(fù)蘇細(xì)胞、真空泵-收集廢液、滅菌鍋-滅菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-凍存細(xì)胞、純水儀-制備一級(jí)水

3.器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色 0-10ul;黃色 20-200ul;藍(lán)色 100-1000ul)、濾器，吸管，多孔培養(yǎng)皿、6cm 皿、10cm 皿，培養(yǎng)瓶等。

4. 試劑：DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基、FBS胎牛血清、雙抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范疇

1. 無菌操作：洗手，戴手套，穿實(shí)驗(yàn)服，常噴 75%酒精

U251MG細(xì)胞復(fù)蘇步驟方法

1.準(zhǔn)備：紫外線照臺(tái) 30min，提前打開水浴鍋設(shè)置 37℃，培養(yǎng)基臨用前放水浴箱里溫育20 分鐘（或者放在超凈工作臺(tái)常溫放 30min）。在操作臺(tái)上擺放好物品，左邊放完全培養(yǎng)液，1mL 槍頭（已滅菌），培養(yǎng)皿，右上角放廢液缸，1mL 移液槍，3mL 巴氏管。檢查離心機(jī)，廢液泵。

2)待水浴鍋溫度達(dá)到 37℃時(shí)，戴上手套和護(hù)目鏡，從-196℃液氮罐中取出凍存管，將含有1 mLU251細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，同時(shí)不斷輕輕搖動(dòng)凍存管，盡量保證凍存管內(nèi)細(xì)胞 1min 內(nèi)融化，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻， 移入離心機(jī)中 100rpm 離心 3min，以 75%酒精噴凍存管外部，移入無菌操作臺(tái)內(nèi)。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的 6cm 培養(yǎng)皿中，（若離心后細(xì)胞量較多，可取 12mL 新鮮培養(yǎng)基到一個(gè)新的 10cm 培養(yǎng)皿中），標(biāo)記日期、所用培養(yǎng)基名稱和細(xì)胞名稱。

4)用廢液泵（吸力不要太大）取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后（充分混勻），將細(xì)胞懸液加入到培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻U251MG（一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫 30 個(gè) 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

5)確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱過夜。（盡量平直放入不要晃動(dòng)），第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

U251MG細(xì)胞傳代操作步驟

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺(tái) 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時(shí)以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出U251MG，在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好，且密度達(dá)到 85%左右的時(shí)候即可進(jìn)行傳代；

4)打開廢液泵，用廢液泵吸頭（吸力不要太大）取一個(gè)藍(lán)色槍頭吸走上清廢液，用巴士管取 4ml 不含鈣、鎂離子的1xPBS（6cm 皿）到細(xì)胞培養(yǎng)皿中（若是 10cm 皿則取 8ml 1xPBS），輕輕晃動(dòng)以清洗細(xì)胞表面1-2次；

5)用廢液泵吸走 PBS 廢液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，拿起培養(yǎng)皿輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)以便胰酶浸泡到每個(gè)細(xì)胞，消化 1-3min（根據(jù)細(xì)胞貼壁情況判斷，貼壁較牢的消化時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)或者放入 CO2 培養(yǎng)箱中消化幾分鐘）后，在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓變亮，一旦發(fā)現(xiàn)大量細(xì)胞胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大，即將脫離培養(yǎng)皿底，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

6)用 1ml 移液槍輕柔吹打，保證培養(yǎng)皿底的每個(gè)角落都吹打到，邊緣處也不能忽略(吹打時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，因其對(duì)U251MG有傷害;需輕柔吹打，用力吹打?qū)?xì)胞也有傷害)，把培養(yǎng)瓶中所有細(xì)胞懸液用吸 1ml 移液槍移入無菌離心管中。

7)將裝有U251MG懸液的離心管放入離心機(jī)中（配平），1000 轉(zhuǎn)離心 3-5min，用廢液泵取一個(gè)黃色槍頭從凍存管中吸走上清，取 1-2mL 新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后（充分混勻），將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，將培養(yǎng)皿在超凈工作臺(tái)上以畫“8”字法鋪勻細(xì)胞（一般培養(yǎng)皿在臺(tái)子上畫 30 個(gè) 8 字即可鋪勻），最后在顯微鏡下檢測(cè)是否鋪勻細(xì)胞。

8) 確定細(xì)胞已鋪勻后，再把培養(yǎng)皿放入 CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。（盡量平直放入不要晃動(dòng)）。第二天再觀察細(xì)胞密度。

U251MG細(xì)胞凍存準(zhǔn)備

1) 準(zhǔn)備工作：紫外線照臺(tái) 30min，準(zhǔn)備好細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑物品：培養(yǎng)液，胰酶，PBS（試劑提前拿出 37℃預(yù)熱或者常溫放置半小時(shí)以上）；傳代用培養(yǎng)皿，巴士管，離心管（已滅菌），槍頭（已滅菌），移液槍，廢液缸。檢查離心機(jī)，廢液泵；

2)從培養(yǎng)箱拿出U251MG細(xì)胞，在顯微鏡下觀察U251MG細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài)，待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且存活率高的狀態(tài)下，細(xì)胞密度達(dá) 80–90%時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存操作，以T25 瓶為例

U251MG細(xì)胞凍存步驟

a.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液， 在細(xì)胞凍存管上貼上細(xì)胞標(biāo)簽（細(xì)胞標(biāo)簽上包含：細(xì)胞名稱、凍存日期、培養(yǎng)用的 培養(yǎng)基）。

c.將凍存管入庫(kù)到-80 度凍存盒里，放置 24 小時(shí)后，即可移入液氮中保存，標(biāo)記好入庫(kù)位置和凍存日期。

U251MG細(xì)胞總結(jié)

1. 膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，常用作實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停腔蚓庉嬵I(lǐng)域的熱門細(xì)胞 ;

2. U251呈多角形，貼壁生長(zhǎng)，推薦使用DMEM培養(yǎng)基;

3. 是具有代表性的癌癥細(xì)胞，被廣泛用于藥物篩選和分子靶標(biāo)鑒定;

如何提高U251細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率

建議你轉(zhuǎn)染時(shí)用無血清培養(yǎng)液，我是轉(zhuǎn)染前半小時(shí)把細(xì)胞換無血清培養(yǎng)液孵育，然后lipo和質(zhì)粒同體積分別和無血清培養(yǎng)液混勻10min后，再混勻30min，加入細(xì)胞。5h后換回正常培養(yǎng)液。

細(xì)胞密度要控制好，狀態(tài)要好，可以在傳代后1-2天，這樣密度狀態(tài)都比較好。

U251細(xì)胞和U87細(xì)胞的區(qū)別

U251細(xì)胞和U87細(xì)胞是兩種常見的人類膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，它們?cè)谛螒B(tài)學(xué)、生物學(xué)和分子特征方面存在一些區(qū)別。本文將通過對(duì)兩種細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期、分子特征等方面的比較，來深入了解它們之間的差異。

細(xì)胞形態(tài)

細(xì)胞形態(tài)是細(xì)胞生物學(xué)中最基本的特征之一。U251和U87細(xì)胞都是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系，它們的細(xì)胞形態(tài)均呈現(xiàn)出星形，長(zhǎng)有多個(gè)突起，但兩者在細(xì)節(jié)上有一些差異。

U251細(xì)胞：U251細(xì)胞呈現(xiàn)出明顯的星狀形態(tài)，其胞體較大，細(xì)胞核較大，細(xì)胞長(zhǎng)約為20-30μm。細(xì)胞質(zhì)濃縮，呈現(xiàn)出淡紫色，細(xì)胞核圓形或卵圓形，核周有一圈較寬的細(xì)胞質(zhì)。突起相對(duì)較短，數(shù)量較少，且常常呈現(xiàn)出多分枝的狀態(tài)。

U87細(xì)胞：U87細(xì)胞也是星形細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)量較少，細(xì)胞長(zhǎng)約為15-20μm。細(xì)胞核相對(duì)較小，呈現(xiàn)出橢圓形。突起比U251細(xì)胞多，長(zhǎng)短不一，常呈現(xiàn)出較長(zhǎng)的狀態(tài)。

通過上述對(duì)兩種細(xì)胞的形態(tài)特征比較，可以發(fā)現(xiàn)它們?cè)诩?xì)胞體積、核體積、突起數(shù)量和長(zhǎng)度等方面存在差異，這些差異可能與細(xì)胞生長(zhǎng)和分子特征有關(guān)。

細(xì)胞生長(zhǎng)

細(xì)胞生長(zhǎng)是細(xì)胞生物學(xué)中的重要指標(biāo)，也是研究細(xì)胞生物學(xué)的基礎(chǔ)。U251和U87細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)如下：

U251細(xì)胞：U251細(xì)胞具有較快的增殖速度，平均倍增時(shí)間為30小時(shí)左右。此外，U251細(xì)胞的增殖受到外界因素的影響較大，如細(xì)胞培養(yǎng)條件、細(xì)胞密度等。在適宜的培養(yǎng)條件下，U251細(xì)胞可以形成較為緊密的單層細(xì)胞群。

U87細(xì)胞：U87細(xì)胞的生長(zhǎng)速度較慢，平均倍增時(shí)間為50小時(shí)左右。此外，U87細(xì)胞的生長(zhǎng)不受細(xì)胞密度的限制，即使在高密度培養(yǎng)條件下，它們?nèi)匀豢梢哉ＩL(zhǎng)和分裂。

通過上述對(duì)兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)比較，可以發(fā)現(xiàn)它們的生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)受到的影響因素有所不同，這些差異可能與細(xì)胞周期和分子特征有關(guān)。

細(xì)胞周期

細(xì)胞周期是細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂的基礎(chǔ)過程，它由G1、S、G2和M四個(gè)階段組成。U251和U87細(xì)胞的細(xì)胞周期如下：

U251細(xì)胞：U251細(xì)胞的細(xì)胞周期長(zhǎng)約為24小時(shí)，其中G1期長(zhǎng)約為11小時(shí)，S期長(zhǎng)約為7小時(shí)，G2期長(zhǎng)約為5小時(shí)，M期長(zhǎng)約為1小時(shí)。此外，U251細(xì)胞的G1期較長(zhǎng)，表明它們?cè)诩?xì)胞分裂前需要較長(zhǎng)的時(shí)間進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)和準(zhǔn)備工作。

U87細(xì)胞：U87細(xì)胞的細(xì)胞周期長(zhǎng)約為30小時(shí)，其中G1期長(zhǎng)約為15小時(shí)，S期長(zhǎng)約為7小時(shí)，G2期長(zhǎng)約為6小時(shí)，M期長(zhǎng)約為2小時(shí)。此外，U87細(xì)胞的G1期較長(zhǎng)，表明它們?cè)诩?xì)胞分裂前需要更長(zhǎng)的時(shí)間進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)和準(zhǔn)備工作。

通過上述對(duì)兩種細(xì)胞的細(xì)胞周期比較，可以發(fā)現(xiàn)它們的細(xì)胞周期長(zhǎng)度和各個(gè)階段的持續(xù)時(shí)間存在差異，這些差異可能與分子特征有關(guān)。

分子特征

細(xì)胞的分子特征是細(xì)胞生物學(xué)研究中的熱點(diǎn)和難點(diǎn)，它反映了細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能特點(diǎn)。U251和U87細(xì)胞的分子特征如下：

1. 基因型

U251細(xì)胞和U87細(xì)胞都具有TP53和EGFR基因的過度表達(dá)，這些基因在膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。此外，U251細(xì)胞中還存在一些特異性基因表達(dá)，如NF1、CDKN2A、PTEN等，這些基因的異常表達(dá)也與膠質(zhì)瘤的發(fā)生有關(guān)。

2. 細(xì)胞周期調(diào)控

U251細(xì)胞和U87細(xì)胞的細(xì)胞周期都受到多種細(xì)胞周期調(diào)控因子的調(diào)控，如CDK、p21、p27等。其中，U251細(xì)胞的CDK2、CDC2和CDK4的表達(dá)較高，而U87細(xì)胞則以CDK4為主。

3. 細(xì)胞凋亡和增殖

U251細(xì)胞和U87細(xì)胞的凋亡和增殖也存在一些差異。U251細(xì)胞的凋亡率較高，增殖速度也相對(duì)較快，而U87細(xì)胞則相反，凋亡率較低，增殖速度較慢。

通過上述對(duì)兩種細(xì)胞的分子特征比較，可以發(fā)現(xiàn)它們?cè)诨蛐?、?xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡和增殖等方面存在差異，這些差異可能是導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)和分裂特點(diǎn)不同的原因之一。

總結(jié)

U251細(xì)胞和U87細(xì)胞是兩種常見的人類膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，它們?cè)谛螒B(tài)學(xué)、生物學(xué)和分子特征方面存在一些差異。通過對(duì)兩種細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期、分子特征等方面的比較，可以發(fā)現(xiàn)它們?cè)诩?xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)速度、細(xì)胞周期長(zhǎng)度、各個(gè)階段的持續(xù)時(shí)間、基因型、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡和增殖等方面存在一定的差異，這些差異可能與膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。

u251細(xì)胞文獻(xiàn)溯源

1982年始，迄今為止，關(guān)于人類星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞的文獻(xiàn)已有435篇。

在pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中用“U251MG cell line”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為1982年Yoshida J在J Colloid Interface Sci.發(fā)表的“Tumor microenvironment sensitization via dual-catalysis of carbon-based nanoenzyme for enhanced photodynamic therapy”。

文獻(xiàn)概述

研究人員對(duì)一種新的水溶性亞硝酰脲藥物ACNU進(jìn)行了抗腫瘤活性測(cè)試，對(duì)象是四種腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系。

測(cè)試了四個(gè)因素以確定ACNU的抗腫瘤活性：細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、形態(tài)學(xué)觀察、DNA直方圖分析和微孔板敏感性測(cè)試。

ACNU對(duì)兩種細(xì)胞系(EA285和U251-MG)表現(xiàn)出細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，但對(duì)另外兩種細(xì)胞系(YE2-2和T98)耐藥。

目前的敏感性測(cè)試結(jié)果與其它檢查一致，表明這種測(cè)試在選擇藥物和確定有效劑量方面是有幫助的。

u215細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域

U251，人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系，該細(xì)胞系是利用外植體技術(shù)，從惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中分離得到。U251在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的研究中常用作實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，可用于提取腫瘤干細(xì)胞以及膠質(zhì)細(xì)胞瘤發(fā)展機(jī)制、藥物抗膠質(zhì)細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的研究等，適合于基因敲除、基因敲低和基因敲入，是基因編輯領(lǐng)域的熱門細(xì)胞系。

星形細(xì)胞瘤是最常見的神經(jīng)上皮性腫瘤，源自星形膠質(zhì)細(xì)胞，也可能源于神經(jīng)膠質(zhì)祖細(xì)胞或神經(jīng)干細(xì)胞。這些腫瘤可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的任何部位發(fā)生，成年人和兒童的發(fā)生部位有所不同。根據(jù)惡性程度，星形細(xì)胞瘤分為低度(I和II級(jí))和高度(III和IV級(jí))兩類。低度腫瘤通常進(jìn)展緩慢，預(yù)后較好;而高度腫瘤惡性程度高，預(yù)后較差。

在研究中，學(xué)者常用人類星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251MG)研究該細(xì)胞細(xì)胞凋亡機(jī)制(信號(hào)通路研究)與抗腫瘤藥物如紫杉醇的敏感性和療效。

研究人員還利用U251MG細(xì)胞研究人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的凋亡與相關(guān)抗腫瘤藥物、新型治療策略、放射敏感性與放射治療、免疫反應(yīng)與炎癥、藥物敏感性與耐藥性等治療特性。細(xì)胞標(biāo)志物：1. 波形蛋白(Vimentin)2. 膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)3. 微管相關(guān)蛋白tau(MAPT)4. 神經(jīng)微絲蛋白(NF-200)5. 神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)