4t1細(xì)胞是什么細(xì)胞

4T1細(xì)胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥(niǎo)嘌噙抗性細(xì)胞株。當(dāng)4T1細(xì)胞注射到BALB/c小鼠中時(shí)，4T1細(xì)胞會(huì)自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺、肝、淋巴結(jié)和大腦，同時(shí)在注射部位形成始發(fā)灶，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時(shí)不需要摘除始發(fā)灶。4T1細(xì)胞在BALB/c小鼠中的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動(dòng)物模型。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動(dòng)力學(xué)相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細(xì)胞誘導(dǎo)的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比，由于4T1細(xì)胞的抗6-硫鳥(niǎo)嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細(xì)胞團(tuán)(少到僅僅1個(gè))也可以在許多遠(yuǎn)端器官中檢測(cè)到，沒(méi)必要數(shù)淋巴結(jié)或稱重器官。

小鼠乳腺癌細(xì)胞4T1形態(tài)

逸漠細(xì)胞庫(kù)4T1細(xì)胞圖片

4T1細(xì)胞用什么培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

4T1細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

提前開(kāi)啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺(tái)開(kāi)燈通風(fēng)10min，用75%酒精擦拭臺(tái)面。

器材耗材：玻璃瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭(白色0-10ul;黃色20-200ul;藍(lán)色100-1000ul)、濾器、吸管、多孔培養(yǎng)皿、6cm皿、10cm皿，培養(yǎng)瓶等。

試劑：DMEM培養(yǎng)液、緩沖液、PBS、消化液、血清、抗生素。

4T1細(xì)胞培養(yǎng)條件

形態(tài)特征：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基： 90%DMEM+10% FBS+PS

生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 3次

凍存條件：無(wú)血清凍存液(或者冷凍保存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配)，液氮儲(chǔ)存

4T1細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1.運(yùn)輸4T1細(xì)胞用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

2.收到4T1細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

4T1細(xì)胞養(yǎng)操作步驟

4T1細(xì)胞復(fù)蘇方法

1.將含有1 mL4T1細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻;

2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻;

3.將所有4T1細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜);

4.第三天換液并檢查4T1細(xì)胞密度。

4T1細(xì)胞傳代方法

如果4T1細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細(xì)胞消化情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

3.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4T1細(xì)胞凍存方法

待4T1細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例

1.收集4T1細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，然后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)4T1細(xì)胞數(shù)量對(duì)應(yīng)加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題

1.4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)怎么處理?

4T1細(xì)胞團(tuán)比較重，低離沒(méi)有用，貼的不牢就Pbs洗一下，用巴氏管吹不能用槍頭。這種不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，不處理也行。

2.4T1細(xì)胞消化時(shí)間是建議多久呢?

4T1放培養(yǎng)箱5分鐘左右鏡下觀察在終止，4T1細(xì)胞是易脫落也易報(bào)團(tuán)，所以不能看細(xì)胞脫落了就終止，要多消化一下。

3.4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)?

a.4T1細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，細(xì)胞匯合度越高越難消化，建議分次消化。一次消化至有細(xì)胞移動(dòng)漂浮時(shí)終止，再進(jìn)行二次消化剩余的細(xì)胞，盡量消化成單顆細(xì)胞，細(xì)胞傳代第二天有少量細(xì)胞團(tuán)貼壁未展開(kāi)為正?，F(xiàn)象，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞會(huì)展開(kāi);

b.若在培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞變圓現(xiàn)象，有可能是細(xì)胞密度過(guò)大，無(wú)法展開(kāi)的原因，可通過(guò)降低傳代密度來(lái)改善。

4.4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞變得瘦長(zhǎng)?

可能細(xì)胞密度過(guò)大，沒(méi)有及時(shí)換液，可以血清多補(bǔ)加5%看下。

5.小鼠4T1細(xì)胞不長(zhǎng)怎么處理?

這些因素都會(huì)影響細(xì)胞長(zhǎng)得慢：a.沒(méi)有保證密度，細(xì)胞長(zhǎng)不起來(lái);b.操作時(shí)力度沒(méi)控制好，將細(xì)胞吹碎，狀態(tài)變差;c.血清質(zhì)量不好，影響細(xì)胞生長(zhǎng)。

6.4t1細(xì)胞形態(tài)特征?

4T1細(xì)胞形態(tài)特征為上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)。

7.4t1細(xì)胞用高糖DMEM嗎?

是的，用高糖DMEM。

8.4T1細(xì)胞能成瘤嗎?

Yes，forms tumors and metastasizes in BALB/c mice.

9.小鼠4T1細(xì)胞傳代密度是多少?

4T1細(xì)胞建議在生長(zhǎng)至80%匯合度時(shí)即應(yīng)傳代，以免細(xì)胞狀態(tài)變差。

10.4T1細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點(diǎn)，怎么處理?

如果在顯微鏡下觀察到了小黑點(diǎn)，基本上可以將范圍縮小到是細(xì)菌污染或者細(xì)胞碎片這兩種情況。

到底是污染還是碎片，可從以下幾個(gè)方面進(jìn)行判斷：

1) 運(yùn)動(dòng)性

很多會(huì)動(dòng)的小黑點(diǎn)，只是發(fā)生布朗運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞碎片。在顯微鏡下觀察黑點(diǎn)大小和形狀是否規(guī)則，是否運(yùn)動(dòng)，是做布朗運(yùn)動(dòng)還是呈直線型快速移動(dòng)。如果黑點(diǎn)大小不規(guī)則，做布朗運(yùn)動(dòng)，黑點(diǎn)可能是細(xì)胞碎片(可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳或者消化過(guò)度引起的)，也可能是血清反復(fù)凍融產(chǎn)生的蛋白沉淀引起的，也可能是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物。

處理方法：消化離心棄上清后，PBS重懸洗洗，750rpm低速離心4分鐘，重新鋪下，鋪回去鏡下觀察一下是不是干凈的

如果黑點(diǎn)大小一致，快速移動(dòng)，很可能是細(xì)菌污染。

2)培養(yǎng)基的渾濁度

如果在顯微鏡下無(wú)法辨認(rèn)，那就交給時(shí)間吧。細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)于細(xì)菌來(lái)說(shuō)是非常營(yíng)養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細(xì)菌就會(huì)大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會(huì)變渾濁。通常在12小時(shí)內(nèi)就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時(shí)內(nèi)就非常明顯。

4T1細(xì)胞在研究中的應(yīng)用

4T1是一種可移植的小鼠乳腺癌細(xì)胞系。它被廣泛地用作體外腫瘤模型，用于研究人類乳腺癌。4T1細(xì)胞有高度的侵襲性和腫瘤形成能力；它們傾向于從乳腺的原發(fā)腫瘤部位轉(zhuǎn)移至其他部位，包括肝臟、淋巴結(jié)、肺、骨骼和腦部，因此是研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的理想選擇。

4T1是一種乳腺腫瘤細(xì)胞系，起源于BALB/c小鼠的自發(fā)性乳腺腫瘤。這些高度侵襲性和腫瘤原性的細(xì)胞在生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散方面，與人類乳腺癌的行為非常相似。具體而言，4T1腫瘤模型研究三陰性乳腺癌(TNBC)。

4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥(niǎo)嘌噙抗性細(xì)胞株，它的高腫瘤發(fā)生率和存活率使其成為動(dòng)物水平乳腺癌研究的理想細(xì)胞模型。

乳腺癌是全球女性最常見(jiàn)的癌癥之一，對(duì)公眾健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。在多種乳腺癌亞型中，4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)特性及腫瘤轉(zhuǎn)移潛能引起了科研人員的特別關(guān)注。4T1細(xì)胞來(lái)源于410-6乳腺癌細(xì)胞，其能在BALB/c小鼠中產(chǎn)生自發(fā)性的肺轉(zhuǎn)移，這一特性使其在研究乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制及探索新型治療策略方面成為一個(gè)有價(jià)值的模型。

4T1小鼠乳腺癌細(xì)胞具有高度的侵襲性和轉(zhuǎn)移潛能，其通過(guò)激活Src通路、誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)以及引發(fā)免疫逃避等機(jī)制促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。此外，4T1細(xì)胞還能產(chǎn)生大量的炎性細(xì)胞因子，如IL-6、IL-8和MCP-1，從而引發(fā)炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。

4T1細(xì)胞在癌癥治療中的應(yīng)用

4T1細(xì)胞的自發(fā)性轉(zhuǎn)移能力使其在癌癥治療研究中具有很高的價(jià)值。例如，研究人員可以利用4T1細(xì)胞建立乳腺癌原位模型，然后評(píng)估各種藥物對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的抑制效果。由于4T1細(xì)胞能引發(fā)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，研究人員也可以利用其探索炎癥在腫瘤進(jìn)展中的作用，以及探索如何通過(guò)抑制炎癥來(lái)抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。

此外，4T1細(xì)胞還能用于研究腫瘤免疫逃逸的機(jī)制以及探索免疫治療在乳腺癌治療中的應(yīng)用。例如，通過(guò)敲除某些免疫相關(guān)的基因，研究人員可以觀察到腫瘤免疫微環(huán)境的改變，進(jìn)而研究這些改變對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響。

4T1細(xì)胞提供了一種研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的模型，可以用來(lái)研究乳腺癌的發(fā)病機(jī)制、預(yù)測(cè)癌細(xì)胞的侵襲性和研究針對(duì)乳腺癌的治療方法。4T1細(xì)胞的轉(zhuǎn)移特性使其成為研究腫瘤治療新藥的理想模型，因?yàn)樗鼈兛梢韵虿煌钠鞴俎D(zhuǎn)移，這是許多其他腫瘤細(xì)胞系所缺乏的。

近年來(lái)，基于4T1細(xì)胞的乳腺癌轉(zhuǎn)移模型已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于研究抗癌治療的新藥物，包括免疫治療、靶向治療等新型治療方法。這些治療方法都是通過(guò)抑制或干擾腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化或擴(kuò)散，來(lái)阻止腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，從而提高患者的生存率。