293細(xì)胞是人腎上皮細(xì)胞系，有多種衍生株，比如HEK293，293T/17等，來源都是人胚胎腎細(xì)胞，其極少表達(dá)細(xì)胞外配體所需的內(nèi)生受體，且比較容易轉(zhuǎn)染，是一個(gè)很常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。

293人腎上皮細(xì)胞系背景簡介

HEK293 細(xì)胞是人類胚胎腎細(xì)胞，起初由荷蘭生物學(xué)家 Alex Van der Eb 在 1970 年代初期分離和培養(yǎng)。Van der Eb 實(shí)驗(yàn)室的博士后 Frank Graham 用剪切的腺病毒 5 (Ad5) DNA 進(jìn)行轉(zhuǎn)染 。這是他們的第 293 次實(shí)驗(yàn)，所以就命名該細(xì)胞系為 HEK293 ，細(xì)胞系的主要作用是通過細(xì)胞的基因改造實(shí)現(xiàn)重組蛋白合成。

產(chǎn)品基本信息

細(xì)胞名稱：HEK293，人腎上皮細(xì)胞系

種屬來源：人

組織來源：胚胎腎

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：90% DMEM+10% FBS+PS

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

特別注意：293細(xì)胞貼壁不牢，運(yùn)輸過程中細(xì)胞會(huì)有脫落，如細(xì)胞脫落，請(qǐng)離心收集，消化后重新鋪瓶。

293細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)技術(shù)

1.293細(xì)胞明顯適應(yīng)酸性環(huán)境，pH值在6.9～7.1時(shí),可順利貼壁生長, 換液時(shí)動(dòng)作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基。

2.傳代：倒去廢液，PBS洗一次(輕)，用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細(xì)胞，培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細(xì)胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s，鏡下觀察細(xì)胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復(fù)吹打至細(xì)胞全成單個(gè)懸浮細(xì)胞即可。12小時(shí)-24小時(shí)90%以上細(xì)胞貼壁。293細(xì)胞傳代時(shí)機(jī)為達(dá)80-90%匯合，傳代比例為1：2。

3.293細(xì)胞在低代時(shí)容易貼壁，生長良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團(tuán)，且貼壁不牢，用PBS沖洗時(shí)即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細(xì)胞懸液，最好購入時(shí)先大量凍存。

4.復(fù)蘇293細(xì)胞的另一生長特性是貼壁所需時(shí)間長且貼壁不牢。細(xì)胞冷凍后復(fù)蘇時(shí),都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細(xì)胞長滿瓶底的 70%～80%時(shí)消化凍存，復(fù)蘇時(shí)將其全部接種至2個(gè)50ml瓶中時(shí)較為合適。剛復(fù)蘇的293貼壁很慢，復(fù)蘇接種后24小時(shí)內(nèi)，應(yīng)盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動(dòng)而影響細(xì)胞貼壁。復(fù)蘇后48小時(shí)左右觀察貼壁情況并進(jìn)行首次更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細(xì)胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預(yù)熱。

293細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)

1.用大瓶培養(yǎng)較小瓶要好，可能是更有利于293均勻的分布，利于營養(yǎng)的攝取。

2.培養(yǎng)液要新鮮，每次只配1000ml，分為2-4瓶，不用的培養(yǎng)液，凍存在-20度。

3.要及時(shí)傳代，最好是細(xì)胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底部，但是細(xì)胞之間還沒有完全貼緊，總是多少有空隙的時(shí)候最好。

4.如果細(xì)胞貼壁不好，可能是消化過久，或是培養(yǎng)瓶不夠干凈，當(dāng)然要除外細(xì)胞污染。

5.如果使用用玻璃培養(yǎng)瓶或皿，可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預(yù)處理培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿，方法是將明膠加入培養(yǎng)皿，使之浸泡到底面的各個(gè)部分，然后吸出，置超凈臺(tái)內(nèi)晾干即可使用。這樣處理后細(xì)胞貼壁效果好且鏡下細(xì)胞立體感強(qiáng)。如果是新的塑料培養(yǎng)瓶就不用處理。