小鼠腹主動脈平滑肌細胞背景簡介

血管平滑肌細胞(VSMC)的異常增殖是許多心血管疾病的共同病理基礎，在高血壓、動脈粥樣硬化和血管成形術后再狹窄等許多血管性疾病中，都涉及到血管平滑肌細胞的異常增殖。血管由3個部分組成，自內向外依次是內膜層、中膜層和外膜層，內膜層主要由血管內皮層細胞和少量平滑肌細胞組成，外膜層由成纖維細胞組成，中膜層由血管平滑肌細胞組成，平滑肌細胞主要收縮調節(jié)機體的血流和血壓，其功能障礙在心血管疾病中起著非常重要的作用。因此，對血管平滑肌的生物學特性進行深入研究，才能探明上述血管疾病的發(fā)病機制。在VSMC的研究中，組織塊貼壁法和膠原酶消化法是目前采用的非常廣泛的技術。

小鼠腹主動脈平滑肌細胞分離培養(yǎng)視頻教程

小鼠腹主動脈平滑肌細胞分離培養(yǎng)主要試劑

解剖鏡，平滑肌專用培養(yǎng)基，平滑肌組織專用消化酶，尖頭鑷，PBS緩沖液，雙抗，離心管

小鼠腹主動脈平滑肌細胞分離培養(yǎng)操作過程

1.取腹主動脈：將大鼠/小鼠麻醉后將其頸椎脫臼處死，固定、消毒、暴露胸，腹、主動脈，沿脊柱剪取腹、主動脈到主動脈弓的一段血管， 剪開腹部胸部皮膚，剪去大鼠左側的肋骨可見大鼠的肺，如圖所示，把肺翻起，即可見到主動脈，放入預冷的培養(yǎng)基

2.分離血管中膜：先用一把顯微鑷子和一把直鑷，直鑷固定血管，顯微鑷夾去血管外的血凝塊和脂肪組織。

2.1用顯微剪把血管剪開，用兩把眼科彎鑷，輕輕的刮一下血管內膜，把內皮細胞除去。

2.2刮取血管中膜。血管中膜要使用壓和推，把中膜弄下來，千萬不要用鑷子去撕，撕起來既容易牽拉中膜，組織不完整。用彎鑷子壓住血管，另一彎鑷子也壓住血管，然后往下推，中膜由于受力就會出現破口，并與外膜分離開來。膜與外膜的形態(tài)區(qū)別很容易辨認，中膜刮下來之后還是挺拔的保持著血管的形態(tài)，而外膜就是軟軟的一灘。

3.消化：剪碎組織，加入消化酶，置于37℃ 5%培養(yǎng)箱12-18h, 組織消化至不可見，停止消化，

4.過篩：用70uM細胞篩過濾，離心，去上清，使用平滑肌專用培養(yǎng)基重懸。

5.純化(去除成纖維細胞)：置入細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)1h后，取上清離心，重懸重鋪新同樣大小培養(yǎng)皿，3天換液至長滿。

小鼠腹主動脈平滑肌細胞鑒定

1. 形態(tài)學觀察

細胞主要為長梭狀、帶狀或三角狀，部分細胞有突起胞核位于細胞中央，完全貼壁，胞質完全伸展，第 4~7 d 細胞增殖速度加快，生長 7 d 后細胞匯合度可達 80 %以上，細胞致密呈多層典型 " 峰 - 谷 " 結構出現。

2. 標志物檢測

經α-SMA免疫熒光鑒定，純度達90%以上。