常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
貨號：IM-H121 來源：ATCC
規(guī)格：1x106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
培養(yǎng)基：90%1640+10%FBS+PS
傳代比例：1:2至1:3，每周 2-3次
NCI-H292 人肺癌細胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)細胞說明書
價格：1200
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥800
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
NCI-H292細胞源自肺支氣管黏液上皮樣癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶；先用成份限定的培養(yǎng)基分離得到，然后換成含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)條件下，NCI-H292細胞保留了黏液上皮的特性，可從其超微結(jié)構(gòu)的表現(xiàn)和多種鱗狀上皮分化標記的表達而判斷。NCI-H292細胞支持HBV的生長，左旋多巴脫羧酶陰性。NCI-H292細胞可以作為篩選模型，將人類亞基因組片段轉(zhuǎn)染入細胞來研究HBV及其自身基因在病毒性肝炎和肝癌發(fā)生中的作用。NCI-H292細胞角蛋白、波形蛋白、黏液洋紅染色陽線，但神經(jīng)絲三聯(lián)蛋白陰性。
| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | NCI-H292人肺癌細胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)（STR鑒定報告） | |||
| 細胞別稱 | H292; H-292; NCI-HUT-292; Hut292; NCIH292；人肺癌細胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 女；32歲 | |||
| 組織來源 | 肺 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 | |||
| 細胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| STR位點 | Amelogenin：X；CSF1PO：10；D13S317：11，12；D16S539：9，13；D18S51：16；D19S433：12，13.2；D21S11：28；D2S1338：21，24；D3S1358：16；D5S818：13；D7S820：10；D8S1179：11，14；FGA：22，26；TH01：8；TPOX：8，11；vWA：16； | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 生物安全等級 | 1 | |||
| 細胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-1848 | |||
| 培養(yǎng)基 | 90%1640+10%FBS+PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 倍增時間 | ~48 hours | |||
| 致瘤性 | Yes, in nude mice; tumors histologically resemble the original biopsy specimen and retain mucoepidermoid features. | |||
| 基因表達情況 | keratin; vimentin,The cells retain their mucoepidermoid characteristics in culture as determined by their ultrastructure and expression of multiple markers of squamous differentiation. TANK cells show reactivity with human alloantisera specific for the HLA A1, A3, A10, A19, B12, B17, B22 and B40 cross-reactive groups. | |||
| 細胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 復蘇細胞/T25瓶運輸 | |||
| 收貨處理 | 1.收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 | |||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細胞/1ml凍存管運輸 | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運輸?shù)募毎截洠垯z查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞，如若不能復蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復蘇操作 | 1.將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細胞密度。 | |||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細胞發(fā)貨2管，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。 4. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。 | |||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。 如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 2.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 | |||
問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件，為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問：凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別？
答：細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細胞貨期一般一周左右，復蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細胞有庫存的話，一般當天或者隔天可以發(fā)貨，細胞系凍存細胞擔心客戶復蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細胞發(fā)貨1管，凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。
問：培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復利用嗎？
答：一般不建議重復利用，特別是貼壁不牢固細胞，重復利用會導致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。
問：運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問：凍存的細胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復蘇會有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響，可以復蘇看下。
問：不同引種單位的同一株細胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個細胞系只有一個RRID。
細胞重發(fā)標準
1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；
2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；
3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)；
4.常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)；
5.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)；
6.視具體情況而定。
細胞不予重發(fā)標準
1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)；
2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；
6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)；
7.視具體情況而定。
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細胞聚團的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團細胞的生成;首先確認當前細胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進行傳代,此時細胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數(shù)量也···
細胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細胞空泡情況有1.細胞老化2.培養(yǎng)液錯誤配制;3.細胞消化時操作不當;4.污染等等,如細胞老化,解決方法,原代細胞使用較低代次進行實驗,傳代細胞避免傳代次數(shù)過高
細胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細胞全換液;如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細胞半換液;"細胞半換液"又稱"細胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進去,選它的原因其實與前面不加···
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
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