背景簡(jiǎn)介

SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞來源于一個(gè)50歲的男性結(jié)腸癌患者，SW480 [SW-480]細(xì)胞源自原位直腸腺癌，和SW620細(xì)胞源自同一病人一年后的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。CSAp和直腸抗體3陰性；角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。p53基因第273位密碼子的G→A突變引起Arg→His替代，309位密碼子的C→T突變導(dǎo)致Pro→Ser替代。細(xì)胞p53蛋白表達(dá)水平提高，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達(dá)呈陽性，癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測(cè)。SW480 [SW-480]細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞溶解酶，一種與腫瘤入侵相關(guān)的金屬蛋白酶。有報(bào)道稱，SW480 [SW-480]細(xì)胞表達(dá)GM-CSF。SW480 [SW-480]細(xì)胞ras原癌基因的12位密碼子有一個(gè)突變，可以用作PCR法檢測(cè)該突變的陽性對(duì)照。1978年11月，A·Leibovitz將其提交給ATCC時(shí)已傳代至第91代。

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱	SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞(STR鑒定報(bào)告)
細(xì)胞別稱	SW-480; SW 480; SW480E
種屬來源	人
年齡性別	男  50歲
組織來源	結(jié)直腸癌
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
染色體	51~57
細(xì)胞代數(shù)	10代以內(nèi)
特別注意	SW480細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO2，如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。
STR位點(diǎn)	Amelogenin：X；CSF1PO：13，14；D13S317：12；D16S539：13；D18S51：13；D19S433：13；D21S11：30，30.2；D2S1338：17，24；D3S1358：15；D5S818：13；D7S820：8；D8S1179：13；FGA：24；TH01：8；TPOX：11；vWA：16；
STR鑒定圖片
生物安全等級(jí)	1
細(xì)胞規(guī)格	1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)	無
保藏機(jī)構(gòu)	ATCC; CCL-228 DSMZ; ACC-313 ECACC; 87092801；中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫
倍增時(shí)間	~30-50 hours
致瘤性	Yes. Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells.
受體表達(dá)情況	epidermal growth factor (EGF)
基因表達(dá)情況	carcinoembryonic antigen (CEA) 0.7 ng/10^6 cells/10 days; keratin; transforming growth factor beta, myc+; myb+ ; ras+; fos+; sis+; p53+; abl -; ros -; src -, HLA A2, B8, B17; Blood Type A; Rh+, The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining., The line is positive for expression of c-myc, K-ras, H-ras, N-ras, myb, sis and fos oncogenes.
培養(yǎng)基	90%L-15+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件	氣相：100%空氣；溫度：37℃
凍存條件	無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
細(xì)胞貨期	現(xiàn)貨，1周左右
運(yùn)輸方式	復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞
供應(yīng)限制	僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
特別說明	以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
到貨方式	復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸
收貨處理	1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
傳代密度	細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代方法	1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
到貨方式	凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸
收貨處理	1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復(fù)蘇操作	1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
注意事項(xiàng)	1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 5.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過度解釋或免費(fèi)售后。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方	無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞? 如果沒要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。
凍存方法	待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項(xiàng)	凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

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