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• BXPC-3細胞專用培養(yǎng)基

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• 無血清細胞凍存液

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• 0.25%胰蛋白酶溶液（溶于PBS）（胰酶）

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細胞培養(yǎng)常見問題

細胞培養(yǎng)時培養(yǎng)基是否需要預(yù)熱

細胞培養(yǎng)時培養(yǎng)基需要預(yù)熱?。預(yù)熱培養(yǎng)基可以減少環(huán)境的改變對細胞狀態(tài)的影響，避免細胞因溫度變化而產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而保持細胞的健康狀態(tài)和生長環(huán)境的一致性??？梢蕴崆鞍胄r左右，將培養(yǎng)基、PBS和胰酶在37°C下預(yù)熱，把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺中紫外照射滅菌。

血清使用前需不需要滅活

一般培養(yǎng)細胞所使用的血清不需要滅活，滅活會導(dǎo)致血清部分營養(yǎng)損失、沉淀增多，滅活的優(yōu)勢(主要是滅活補體以免影響細胞生長)在實際培養(yǎng)過程中對于促進細胞生長并沒有太大意義。部分細胞對于生長條件敏感，可以嘗試滅活血清培養(yǎng)，但大部分細胞并不需要。

血清融化后有沉淀會影響細胞培養(yǎng)嗎

血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經(jīng)凍融后析出，導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無關(guān)，大部分品牌的血清都會有這種情況，不會影響細胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細胞污染即可。

細胞為何生長不均勻

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導(dǎo)致細胞生長不均勻。

細胞抱團怎么處理

一些懸浮細胞抱團生長是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團)。

細胞內(nèi)有空泡，是否是正?，F(xiàn)象

部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細胞代次較高，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。

細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系)；或者消化過度，對細胞有嚴重影響；或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞，傳代太??；或者生長較快的細胞，傳代較密，細胞嚴重堆疊生長)。

如何區(qū)分活細胞和死細胞

顯微鏡下觀察：活細胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細胞較暗。也可以通過臺盼藍染色來計算細胞活力。

何用臺盼蘭計數(shù)活細胞

用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000 個/毫升，在0.1 毫升的細胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞，注意計數(shù)需在加入臺盼藍10min內(nèi)完成。有細胞計數(shù)儀的，可直接用計數(shù)儀進行

何時須更換培養(yǎng)基

視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2天更換培養(yǎng)基。

細胞何時進行傳代較好

一般情況下細胞生長至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細胞，在匯合前就必須進行傳代，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化。

貼壁細胞總有部分圓形還會有一些漂浮的是正常嗎

大部分貼壁細胞培養(yǎng)時都會有一些圓形透亮的細胞存在，也會有一些圓形細胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細胞或由于局部空間不足被擠出的細胞，只要細胞持續(xù)增殖，都會有一些圓形細胞或脫落漂浮細胞，不影響細胞整體增殖和實驗，保持正常換液、傳代周期即可。細胞具體情況也可以參考細胞庫不同細胞照片比對，大部分貼壁細胞都會有圓形細胞、脫落細胞、細胞內(nèi)顆粒等情況。

細胞內(nèi)很亮小泡泡是什么東西

一部分情況下細胞內(nèi)小亮點是細胞內(nèi)黑色顆?；蛘咭恍┱掣皆诩毎砻娴乃槠?，這種黑點會在調(diào)整顯微鏡焦距時呈小黑點或者小亮點，容易被誤認為細胞內(nèi)小泡，其實只是細胞內(nèi)部或表面一些物質(zhì)折光形成的光學(xué)現(xiàn)象。也有些是細胞內(nèi)部脂滴，例如3T3-L1細胞在部分培養(yǎng)條件下可以明顯看到內(nèi)部脂滴，染色后更加清晰。

部分細胞在培養(yǎng)時確實可能會有空泡，可以參考細胞庫照片比對。若細胞突然出現(xiàn)細胞內(nèi)空泡增多現(xiàn)象，通常是細胞受到壓力的表現(xiàn)，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌劑、不適當(dāng)?shù)腃O2環(huán)境對培養(yǎng)基中碳酸氫鈉濃度影響或培養(yǎng)基的營養(yǎng)消耗殆盡。

細胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點、污染如何防范

可從以下幾個方面進行判斷： 細胞小黑點如何判斷 1、運動性：很多會動的小黑點，只是發(fā)生布朗運動的細胞碎片。從運動性上比較，浮躁的細菌活躍的多。 2、培養(yǎng)基的渾濁度：如果在顯微鏡下無法辨認，那就交給時間吧。細胞培養(yǎng)基對于細菌來說是非常營養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細菌就會大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會變渾濁。通常在12小時內(nèi)就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時內(nèi)就非常明顯。被污染的細胞培養(yǎng)基變黃且渾濁、未被污染的細胞培養(yǎng)基偏紅且澄清。 3、接種平板：將懷疑污染物接種在微生物培養(yǎng)平板中，觀察菌落形成情況。碎片?細菌?一目了然。

細胞培養(yǎng)形態(tài)與ATCC等官網(wǎng)照片有點區(qū)別正常嗎?

由于每個實驗室培養(yǎng)環(huán)境、操作方法、培養(yǎng)基及血清品牌批次不同，細胞實際培養(yǎng)形態(tài)、狀態(tài)、生長速度等培養(yǎng)特性均有可能發(fā)生改變，甚至顯微鏡拍攝效果對細胞形態(tài)判斷都會有有一定影響。因此細胞形態(tài)只能作為實驗過程中的參考項目，無法作為細胞狀態(tài)或者類型的判斷依據(jù)。實際上，細胞在不同細胞庫培養(yǎng)的細胞形態(tài)都可能存在一定差異。

科研細胞購買常見問題

問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件，為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問：凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別？

答：細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細胞有庫存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細胞系凍存細胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細胞發(fā)貨1管，凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。

問：培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？

答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細胞，重復(fù)利用會導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。

問：運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問：凍存的細胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復(fù)蘇會有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。

問：不同引種單位的同一株細胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個細胞系只有一個RRID。

科研細胞株售后規(guī)定

1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液，細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況等，重發(fā)

2.細胞免費售后期為一周，一周內(nèi)細胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時拍照反饋。超出一周沒有任何反饋視為細胞培養(yǎng)正常，后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問題不再免費重發(fā)

3.申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當(dāng)天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，若無清晰照片及相應(yīng)信息，不予免費售后

4.售后僅針對由于細胞自身狀態(tài)問題導(dǎo)致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細胞多次，出現(xiàn)死亡或者污染時不予免費售后

5.凍存細胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶未反饋并復(fù)蘇2管失敗，我方將不提供免費售后服務(wù)。凍存細胞售后均發(fā)復(fù)蘇培養(yǎng)，若要重發(fā)凍存細胞，需補加200元干冰運輸費用

6.客戶自行凍存細胞一定要注意凍存后復(fù)蘇一管檢查凍存活性，避免凍存死亡導(dǎo)致絕種。我方不對客戶凍存細胞死亡負責(zé)，客戶凍存細胞死亡時不予免費售后

細胞百科知識

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細胞培養(yǎng)操作視頻

• 第一節(jié):復(fù)蘇細胞收貨處理教程

• 第二節(jié):凍存細胞收貨處理教程

• 第三節(jié):細胞復(fù)蘇教程

• 第四節(jié):貼壁細胞傳代步驟

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