常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
貨號：IM-H613
規(guī)格：1×106cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長
培養(yǎng)基：RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
傳代方法：1:4至1:6，每周 2-3次
價格：￥2600
產品規(guī)格：100mL
￥500
產品規(guī)格：100mL
￥98
產品規(guī)格：100mL
￥68
細胞培養(yǎng)時培養(yǎng)基是否需要預熱
細胞培養(yǎng)時培養(yǎng)基需要預熱?。預熱培養(yǎng)基可以減少環(huán)境的改變對細胞狀態(tài)的影響，避免細胞因溫度變化而產生應激反應，從而保持細胞的健康狀態(tài)和生長環(huán)境的一致性?。可以提前半小時左右，將培養(yǎng)基、PBS和胰酶在37°C下預熱，把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺中紫外照射滅菌。
血清使用前需不需要滅活
一般培養(yǎng)細胞所使用的血清不需要滅活，滅活會導致血清部分營養(yǎng)損失、沉淀增多，滅活的優(yōu)勢(主要是滅活補體以免影響細胞生長)在實際培養(yǎng)過程中對于促進細胞生長并沒有太大意義。部分細胞對于生長條件敏感，可以嘗試滅活血清培養(yǎng)，但大部分細胞并不需要。
血清融化后有沉淀會影響細胞培養(yǎng)嗎
血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經凍融后析出，導致血清內出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，該現(xiàn)象與血清品質無關，大部分品牌的血清都會有這種情況，不會影響細胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細胞污染即可。
細胞為何生長不均勻
細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導致細胞生長不均勻。
細胞抱團怎么處理
一些懸浮細胞抱團生長是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團)。
細胞內有空泡，是否是正?，F(xiàn)象
部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個是正?，F(xiàn)象。如果只有少數細胞有內出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現(xiàn)空泡，且單個細胞內空泡數目偏多，則可能細胞代次較高，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。
細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因
很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系)；或者消化過度，對細胞有嚴重影響；或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞，傳代太?。换蛘呱L較快的細胞，傳代較密，細胞嚴重堆疊生長)。
如何區(qū)分活細胞和死細胞
顯微鏡下觀察：活細胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細胞較暗。也可以通過臺盼藍染色來計算細胞活力。
何用臺盼蘭計數活細胞
用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000 個/毫升，在0.1 毫升的細胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計數板計數細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞，注意計數需在加入臺盼藍10min內完成。有細胞計數儀的，可直接用計數儀進行
何時須更換培養(yǎng)基
視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2天更換培養(yǎng)基。
細胞何時進行傳代較好
一般情況下細胞生長至完全匯合后就應該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細胞，在匯合前就必須進行傳代，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化。
貼壁細胞總有部分圓形還會有一些漂浮的是正常嗎
大部分貼壁細胞培養(yǎng)時都會有一些圓形透亮的細胞存在，也會有一些圓形細胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細胞或由于局部空間不足被擠出的細胞，只要細胞持續(xù)增殖，都會有一些圓形細胞或脫落漂浮細胞，不影響細胞整體增殖和實驗，保持正常換液、傳代周期即可。細胞具體情況也可以參考細胞庫不同細胞照片比對，大部分貼壁細胞都會有圓形細胞、脫落細胞、細胞內顆粒等情況。
細胞內很亮小泡泡是什么東西
一部分情況下細胞內小亮點是細胞內黑色顆?；蛘咭恍┱掣皆诩毎砻娴乃槠@種黑點會在調整顯微鏡焦距時呈小黑點或者小亮點，容易被誤認為細胞內小泡，其實只是細胞內部或表面一些物質折光形成的光學現(xiàn)象。也有些是細胞內部脂滴，例如3T3-L1細胞在部分培養(yǎng)條件下可以明顯看到內部脂滴，染色后更加清晰。
部分細胞在培養(yǎng)時確實可能會有空泡，可以參考細胞庫照片比對。若細胞突然出現(xiàn)細胞內空泡增多現(xiàn)象，通常是細胞受到壓力的表現(xiàn)，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌劑、不適當的CO2環(huán)境對培養(yǎng)基中碳酸氫鈉濃度影響或培養(yǎng)基的營養(yǎng)消耗殆盡。
細胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點、污染如何防范
可從以下幾個方面進行判斷： 細胞小黑點如何判斷 1、運動性：很多會動的小黑點，只是發(fā)生布朗運動的細胞碎片。從運動性上比較，浮躁的細菌活躍的多。 2、培養(yǎng)基的渾濁度：如果在顯微鏡下無法辨認，那就交給時間吧。細胞培養(yǎng)基對于細菌來說是非常營養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細菌就會大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會變渾濁。通常在12小時內就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時內就非常明顯。被污染的細胞培養(yǎng)基變黃且渾濁、未被污染的細胞培養(yǎng)基偏紅且澄清。 3、接種平板：將懷疑污染物接種在微生物培養(yǎng)平板中，觀察菌落形成情況。碎片?細菌?一目了然。
細胞培養(yǎng)形態(tài)與ATCC等官網照片有點區(qū)別正常嗎?
由于每個實驗室培養(yǎng)環(huán)境、操作方法、培養(yǎng)基及血清品牌批次不同，細胞實際培養(yǎng)形態(tài)、狀態(tài)、生長速度等培養(yǎng)特性均有可能發(fā)生改變，甚至顯微鏡拍攝效果對細胞形態(tài)判斷都會有有一定影響。因此細胞形態(tài)只能作為實驗過程中的參考項目，無法作為細胞狀態(tài)或者類型的判斷依據。實際上，細胞在不同細胞庫培養(yǎng)的細胞形態(tài)都可能存在一定差異。
問：為什么官網的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢？
答：部分細胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件，為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
問：凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別？
答：細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細胞貨期一般一周左右，復蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細胞有庫存的話，一般當天或者隔天可以發(fā)貨，細胞系凍存細胞擔心客戶復蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細胞發(fā)貨1管，凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。
問：培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復利用嗎？
答：一般不建議重復利用，特別是貼壁不牢固細胞，重復利用會導致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。
問：運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?
答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經消耗得差不多，所以收到細胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
問：凍存的細胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對復蘇會有影響嗎？
答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導致pH變化等有關，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響，可以復蘇看下。
問：不同引種單位的同一株細胞，RRID都是一樣的嗎？
答：是的，同一個細胞系只有一個RRID。
常見細胞污染類型如何辨別及預防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細胞聚團的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團細胞的生成;首先確認當前細胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進行傳代,此時細胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數量也···
細胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細胞空泡情況有1.細胞老化2.培養(yǎng)液錯誤配制;3.細胞消化時操作不當;4.污染等等,如細胞老化,解決方法,原代細胞使用較低代次進行實驗,傳代細胞避免傳代次數過高
細胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細胞全換液;如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細胞半換液;"細胞半換液"又稱"細胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進去,選它的原因其實與前面不加···
產品規(guī)格：1*10^6
產品規(guī)格：1*10^6
產品規(guī)格：5*10^5
產品規(guī)格：1*10^6
產品規(guī)格：1*10^6
產品規(guī)格：1*10^6
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