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細胞培養(yǎng)常見問題

細胞培養(yǎng)時培養(yǎng)基是否需要預熱

細胞培養(yǎng)時培養(yǎng)基需要預熱?。預熱培養(yǎng)基可以減少環(huán)境的改變對細胞狀態(tài)的影響，避免細胞因溫度變化而產生應激反應，從而保持細胞的健康狀態(tài)和生長環(huán)境的一致性??？梢蕴崆鞍胄r左右，將培養(yǎng)基、PBS和胰酶在37°C下預熱，把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺中紫外照射滅菌。

血清使用前需不需要滅活

一般培養(yǎng)細胞所使用的血清不需要滅活，滅活會導致血清部分營養(yǎng)損失、沉淀增多，滅活的優(yōu)勢(主要是滅活補體以免影響細胞生長)在實際培養(yǎng)過程中對于促進細胞生長并沒有太大意義。部分細胞對于生長條件敏感，可以嘗試滅活血清培養(yǎng)，但大部分細胞并不需要。

血清融化后有沉淀會影響細胞培養(yǎng)嗎

血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經凍融后析出，導致血清內出現沉淀現象，該現象與血清品質無關，大部分品牌的血清都會有這種情況，不會影響細胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細胞污染即可。

細胞為何生長不均勻

細胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒有搖勻，或者放入時搖勻，但在細胞貼壁前，又移動了培養(yǎng)瓶，頻繁開關培養(yǎng)箱引起的振動或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會導致細胞生長不均勻。

細胞抱團怎么處理

一些懸浮細胞抱團生長是正常現象，大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下，很可能會出現部分細胞抱團生長的現象，聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細胞，因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現了細胞團，可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團，也可以嘗試一下方法：將細胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團)。

細胞內有空泡，是否是正常現象

部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個是正?，F象。如果只有少數細胞有內出現極少空泡，則很可能是細胞狀態(tài)不佳，可以通過調整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現空泡，且單個細胞內空泡數目偏多，則可能細胞代次較高，細胞老化所致，需更換代次較早的細胞。

細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系)；或者消化過度，對細胞有嚴重影響；或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞，傳代太??；或者生長較快的細胞，傳代較密，細胞嚴重堆疊生長)。

如何區(qū)分活細胞和死細胞

顯微鏡下觀察：活細胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細胞較暗。也可以通過臺盼藍染色來計算細胞活力。

何用臺盼蘭計數活細胞

用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000 個/毫升，在0.1 毫升的細胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計數板計數細胞。活細胞排斥臺盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞，注意計數需在加入臺盼藍10min內完成。有細胞計數儀的，可直接用計數儀進行

何時須更換培養(yǎng)基

視細胞生長密度而定，常規(guī)細胞2天更換培養(yǎng)基。

細胞何時進行傳代較好

一般情況下細胞生長至完全匯合后就應該傳代，所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了)，但有接觸抑制的細胞，在匯合前就必須進行傳代，這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代，否則會引起細胞分化。

貼壁細胞總有部分圓形還會有一些漂浮的是正常嗎

大部分貼壁細胞培養(yǎng)時都會有一些圓形透亮的細胞存在，也會有一些圓形細胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細胞或由于局部空間不足被擠出的細胞，只要細胞持續(xù)增殖，都會有一些圓形細胞或脫落漂浮細胞，不影響細胞整體增殖和實驗，保持正常換液、傳代周期即可。細胞具體情況也可以參考細胞庫不同細胞照片比對，大部分貼壁細胞都會有圓形細胞、脫落細胞、細胞內顆粒等情況。

細胞內很亮小泡泡是什么東西

一部分情況下細胞內小亮點是細胞內黑色顆粒或者一些粘附在細胞表面的碎片，這種黑點會在調整顯微鏡焦距時呈小黑點或者小亮點，容易被誤認為細胞內小泡，其實只是細胞內部或表面一些物質折光形成的光學現象。也有些是細胞內部脂滴，例如3T3-L1細胞在部分培養(yǎng)條件下可以明顯看到內部脂滴，染色后更加清晰。

部分細胞在培養(yǎng)時確實可能會有空泡，可以參考細胞庫照片比對。若細胞突然出現細胞內空泡增多現象，通常是細胞受到壓力的表現，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌劑、不適當的CO2環(huán)境對培養(yǎng)基中碳酸氫鈉濃度影響或培養(yǎng)基的營養(yǎng)消耗殆盡。

細胞培養(yǎng)出現小黑點、污染如何防范

可從以下幾個方面進行判斷： 細胞小黑點如何判斷 1、運動性：很多會動的小黑點，只是發(fā)生布朗運動的細胞碎片。從運動性上比較，浮躁的細菌活躍的多。 2、培養(yǎng)基的渾濁度：如果在顯微鏡下無法辨認，那就交給時間吧。細胞培養(yǎng)基對于細菌來說是非常營養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細菌就會大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會變渾濁。通常在12小時內就可以發(fā)現，而在48小時內就非常明顯。被污染的細胞培養(yǎng)基變黃且渾濁、未被污染的細胞培養(yǎng)基偏紅且澄清。 3、接種平板：將懷疑污染物接種在微生物培養(yǎng)平板中，觀察菌落形成情況。碎片?細菌?一目了然。

細胞培養(yǎng)形態(tài)與ATCC等官網照片有點區(qū)別正常嗎?

由于每個實驗室培養(yǎng)環(huán)境、操作方法、培養(yǎng)基及血清品牌批次不同，細胞實際培養(yǎng)形態(tài)、狀態(tài)、生長速度等培養(yǎng)特性均有可能發(fā)生改變，甚至顯微鏡拍攝效果對細胞形態(tài)判斷都會有有一定影響。因此細胞形態(tài)只能作為實驗過程中的參考項目，無法作為細胞狀態(tài)或者類型的判斷依據。實際上，細胞在不同細胞庫培養(yǎng)的細胞形態(tài)都可能存在一定差異。

科研細胞購買常見問題

問：為什么官網的培養(yǎng)條件和我看的文獻里細胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細胞是會出現多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細胞的培養(yǎng)條件，為了避免細胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問：凍存細胞運輸與常溫細胞運輸相比有什么區(qū)別？

答：細胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細胞貨期一般一周左右，復蘇活細胞一個T25瓶發(fā)貨；凍存細胞有庫存的話，一般當天或者隔天可以發(fā)貨，細胞系凍存細胞擔心客戶復蘇不成功所以贈送了一管，實際發(fā)貨2管；原代凍存細胞發(fā)貨1管，凍存細胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運輸，所以凍存細胞需額外支付干冰及運輸費200元。

問：培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)瓶可以重復利用嗎？

答：一般不建議重復利用，特別是貼壁不牢固細胞，重復利用會導致吸附性變差，漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無菌操作，避免污染。

問：運輸細胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經消耗得差不多，所以收到細胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請及時按照說明書細胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問：凍存的細胞出現顏色不一致，有的紅有的粉，對復蘇會有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現，與凍存細胞的密度、凍存液配方、溫度導致pH變化等有關，偶爾有遇到這種情況，不是絕對性對細胞狀態(tài)有影響，可以復蘇看下。

問：不同引種單位的同一株細胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個細胞系只有一個RRID。

HT55人結腸癌細胞(STR鑒定)培養(yǎng)方法條件

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HT55人結腸癌細胞(STR鑒定)培養(yǎng)視頻教程

• 第一節(jié):復蘇細胞收貨處理教程

• 第二節(jié):凍存細胞收貨處理教程

• 第三節(jié):細胞復蘇教程

• 第四節(jié):貼壁細胞傳代步驟

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