人脂肪干細(xì)胞（免疫熒光鑒定報告）

貨號：IMP-H048 來源：IMMOCELL

規(guī)格：5×10⁵cells/T25或1mL凍存管

形態(tài)：成纖維樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)

培養(yǎng)基：人脂肪干細(xì)胞專用培養(yǎng)基

傳代方法：1:2，每周2- 3次

價格：￥5780

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配套相關(guān)培養(yǎng)產(chǎn)品

背景介紹培養(yǎng)操作凍存步驟售后服務(wù)

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱	原代人脂肪干細(xì)胞（免疫熒光鑒定報告）
種屬來源	人
組織來源	脂肪
生長特性	貼壁生長
形態(tài)特征	成纖維細(xì)胞樣
支原體檢測	無
背景介紹	脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞是從脂肪組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞。主要恢復(fù)組織細(xì)胞的修復(fù)功能，促進(jìn)細(xì)胞的再生，恢復(fù)年輕面容的同時，身體機能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞能夠在體外穩(wěn)定增殖且衰亡率低，同時它具有取材容易、少量組織即可獲取大量干細(xì)胞，適宜大規(guī)模培養(yǎng)，對機體損傷小等優(yōu)點，而且其來源廣泛，體內(nèi)儲備量大，適宜自體移植，逐漸成為近年來新的研究熱點之一。
產(chǎn)品規(guī)格	5×10⁵cells/T25或1mL凍存管
培養(yǎng)基	人脂肪干細(xì)胞專用培養(yǎng)基
培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件	無血清凍存液，液氮儲存
細(xì)胞代數(shù)	第1代
產(chǎn)品貨期	現(xiàn)貨，1周左右
供應(yīng)限制	僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
特別說明	以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
到貨方式	活細(xì)胞（常溫運輸）
收貨處理	1.收到細(xì)胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
傳代密度	細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代方法	1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
到貨方式	凍存細(xì)胞（干冰運輸）
收貨處理	1.干冰運輸?shù)募?xì)胞到貨，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復(fù)蘇操作	1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
注意事項	1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 申請售后時請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 5. 細(xì)胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方	無血清凍存液，液氮儲存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細(xì)胞按計數(shù)需要的細(xì)胞量凍存即可。如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。
凍存方法	待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10⁶~1x10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項	凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案

原代細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

如何判斷原代細(xì)胞衰老了

1.形態(tài)學(xué)的觀察，細(xì)胞突起變大、或細(xì)胞扁平;2.β半乳糖苷染色判斷細(xì)胞是否衰老;3.增殖速率明顯下降;4.對相關(guān)的標(biāo)志物進(jìn)行檢測。

如何確保分離的原代細(xì)胞的活性

1.組織離體時間不能太久;2.低溫冰上分離，但也不能直接從-80℃冰箱上取出一塊冰;3.無菌操作體系;4.消化酶的濃度和消化時間的把控。

原代細(xì)胞可以無限的增殖

與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴增能力。建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細(xì)胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細(xì)胞形態(tài)，因為少量混雜的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細(xì)胞。

如何讓原代細(xì)胞一直保持增殖能力

原代細(xì)胞傳代有限，可以通過構(gòu)建永生化細(xì)胞株使其獲得無限增殖的能力，即轉(zhuǎn)變?yōu)橛郎?xì)胞系。

原代細(xì)胞一般第幾代做實驗比較好

5代以內(nèi)，3代最好。有些細(xì)胞比如特殊，如神經(jīng)元、巨噬為終末分化細(xì)胞，增殖能力很弱，建議客戶收到細(xì)胞請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)后直接用于后續(xù)實驗，不建議傳代進(jìn)行擴增培養(yǎng)和凍存。

原代細(xì)胞可以凍存嗎？凍存復(fù)蘇后活率差的原因是什么?

這取決于細(xì)胞的類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等，可以擴增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長性能的改變。凍存后復(fù)蘇活率低需要考慮凍存前細(xì)胞活性，細(xì)胞量以及凍存體系，凍存體系是指用的含血清的凍存液，還是一步凍存液，不同凍存方法對應(yīng)的操作方法不同需要注意。

通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因為這可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。

貼壁的原代細(xì)胞很難消化是怎么回事

細(xì)胞初代培養(yǎng)時在細(xì)胞皿上培養(yǎng)的時間過長，解決方法可以將酶的濃度降低，37℃培養(yǎng)箱中延長消化時間，或者分步消化。

原代上皮細(xì)胞傳代之后形態(tài)發(fā)生變化

上皮細(xì)胞，傳代容易變形，上皮細(xì)胞傳代后，不容易再次貼壁，這個時候可以使用代膜的培養(yǎng)瓶或者瓶子包被一下(基質(zhì)膠，鼠尾膠原，多聚賴氨酸等)都可以，上皮細(xì)胞，傳代非常有限，且生長比較慢，一般建議盡快實驗，不適合長時間去大量擴增培養(yǎng)。

因原代細(xì)胞體外傳代有限，傳代次數(shù)皆為大部分人使用后的平均數(shù)據(jù)，受操作手法，培養(yǎng)環(huán)境，培養(yǎng)條件等因素綜合影響，建議收到后，盡快完成實驗，不建議反復(fù)凍存一直傳代擴增。

提取原代細(xì)胞經(jīng)常發(fā)生污染可以怎樣改善

首先要確保細(xì)胞分離實驗室是否存在細(xì)菌污染，如果存在問題，需要將實驗室進(jìn)行消毒，培養(yǎng)箱滅菌，檢查試劑耗材是否可用，第二個就是注意無菌操作，保證試劑、剪刀鑷子等無菌，第三是可以在培養(yǎng)液中加抗生素，雙抗、兩性霉素等。