常見細胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法
常見細胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
貨號：IMP-H054
規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管
形態(tài)：成纖維細胞樣，貼壁生長
培養(yǎng)基：原代間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)體系
傳代比例：首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代是1個T25瓶傳2個T25瓶或2個6cm皿
價格：￥8840
產(chǎn)品規(guī)格：500ml
￥2280
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥500
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥98
產(chǎn)品規(guī)格：100mL
￥68
人骨髓間充質(zhì)干細胞采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，人骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細胞總數(shù)的0.001%-0.1%，含量極低。骨髓間充質(zhì)干細胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過程中，受貼壁時間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。
| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | 原代人骨髓間充質(zhì)干細胞（免疫熒光鑒定報告） | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 組織來源 | 骨髓 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 形態(tài)特征 | 成纖維細胞樣 | |||
| 質(zhì)量檢測 | CD44免疫熒光染色為陽性，CD45免疫熒光染色為陰性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等 | |||
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 培養(yǎng)基 | 原代間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)體系 | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 換液頻率 | 每2-3天換液一次 | |||
| 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 | |||
| 產(chǎn)品貨期 | 2周 | |||
| 供應(yīng)限制 | 僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 到貨方式 | 活細胞（常溫運輸） | |||
| 收貨處理 | 1.收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請您用75%酒精消毒細胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B(tài)請在10X和20X物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 | |||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | |||
| 傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | |||
| 到貨方式 | 凍存細胞（干冰運輸） | |||
| 收貨處理 | 1.干冰運輸?shù)募毎截?，請檢查干冰是否完全揮發(fā)，細胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細胞，如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 | |||
| 培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | |||
| 復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細胞密度。 | |||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 申請售后時請?zhí)峁┘毎肇洉r及反饋售后當(dāng)天細胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 5. 細胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費售后。 | |||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細胞按計數(shù)需要的細胞量凍存即可。 如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。 | |||
| 凍存方法 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 2.根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案 | |||
如何判斷原代細胞衰老了
1.形態(tài)學(xué)的觀察，細胞突起變大、或細胞扁平;2.β半乳糖苷染色判斷細胞是否衰老;3.增殖速率明顯下降;4.對相關(guān)的標志物進行檢測。
如何確保分離的原代細胞的活性
1.組織離體時間不能太久;2.低溫冰上分離，但也不能直接從-80℃冰箱上取出一塊冰;3.無菌操作體系;4.消化酶的濃度和消化時間的把控。
原代細胞可以無限的增殖
與細胞系不同，原代細胞具有有限的擴增能力。建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。
如何讓原代細胞一直保持增殖能力
原代細胞傳代有限，可以通過構(gòu)建永生化細胞株使其獲得無限增殖的能力，即轉(zhuǎn)變?yōu)橛郎毎怠?/P>
原代細胞一般第幾代做實驗比較好
5代以內(nèi)，3代最好。有些細胞比如特殊，如神經(jīng)元、巨噬為終末分化細胞，增殖能力很弱，建議客戶收到細胞請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)后直接用于后續(xù)實驗，不建議傳代進行擴增培養(yǎng)和凍存。
原代細胞可以凍存嗎？凍存復(fù)蘇后活率差的原因是什么?
這取決于細胞的類型。一些細胞類型像神經(jīng)細胞，神經(jīng)膠質(zhì)細胞和一些生長緩慢的上皮細胞，不推薦擴增培養(yǎng)和再次凍存。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質(zhì)細胞等等，可以擴增培養(yǎng)和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細胞生長性能的改變。凍存后復(fù)蘇活率低需要考慮凍存前細胞活性，細胞量以及凍存體系，凍存體系是指用的含血清的凍存液，還是一步凍存液，不同凍存方法對應(yīng)的操作方法不同需要注意。
通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓Ｔ毎浅Ｃ舾?，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細胞死亡或損傷。
貼壁的原代細胞很難消化是怎么回事
細胞初代培養(yǎng)時在細胞皿上培養(yǎng)的時間過長，解決方法可以將酶的濃度降低，37℃培養(yǎng)箱中延長消化時間，或者分步消化。
原代上皮細胞傳代之后形態(tài)發(fā)生變化
上皮細胞，傳代容易變形，上皮細胞傳代后，不容易再次貼壁，這個時候可以使用代膜的培養(yǎng)瓶或者瓶子包被一下(基質(zhì)膠，鼠尾膠原，多聚賴氨酸等)都可以，上皮細胞，傳代非常有限， 且生長比較慢，一般建議盡快實驗，不適合長時間去大量擴增培養(yǎng)。
因原代細胞體外傳代有限，傳代次數(shù)皆為大部分人使用后的平均數(shù)據(jù)，受操作手法，培養(yǎng)環(huán)境，培養(yǎng)條件等因素綜合影響，建議收到后，盡快完成實驗，不建議反復(fù)凍存一直傳代擴增。
提取原代細胞經(jīng)常發(fā)生污染可以怎樣改善
首先要確保細胞分離實驗室是否存在細菌污染，如果存在問題，需要將實驗室進行消毒，培養(yǎng)箱滅菌，檢查試劑耗材是否可用，第二個就是注意無菌操作，保證試劑、剪刀鑷子等無菌，第三是可以在培養(yǎng)液中加抗生素，雙抗、兩性霉素等。
1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液，細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況等，重發(fā)
2.客戶操作造成細胞污染，細胞狀態(tài)不好，非我司推薦細胞培養(yǎng)體系，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)
3.原代細胞不建議客戶自行凍存，收貨后及時傳代并安排實驗，超出代數(shù)的細胞可能出現(xiàn)突變、狀態(tài)變差等現(xiàn)象導(dǎo)致細胞無法進一步傳代或者進行實驗，對于自行凍存的細胞一律不予免費售后
常見細胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨,氣候濕潤的季節(jié)容易出現(xiàn);真菌污染屬于微生···
細胞聚團的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團細胞的生成;首先確認當(dāng)前細胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進行傳代,此時細胞狀態(tài)較好,且用于傳代的數(shù)量也···
細胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細胞空泡情況有1.細胞老化2.培養(yǎng)液錯誤配制;3.細胞消化時操作不當(dāng);4.污染等等,如細胞老化,解決方法,原代細胞使用較低代次進行實驗,傳代細胞避免傳代次數(shù)過高
細胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細胞全換液;如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細胞半換液;"細胞半換液"又稱"細胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再加一半新的進去,選它的原因其實與前面不加···
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
產(chǎn)品規(guī)格：5*10^5
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