人軟骨細(xì)胞（免疫熒光鑒定報(bào)告）

貨號(hào)：IMP-H166

規(guī)格：5x10⁵cells/T25或1mL凍存管

形態(tài)：長(zhǎng)梭形不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)

培養(yǎng)基：人軟骨細(xì)胞專業(yè)培養(yǎng)基

培養(yǎng)環(huán)境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

人軟骨細(xì)胞傳代時(shí)形態(tài)發(fā)生變化，這是正常現(xiàn)象

價(jià)格：￥8540

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背景介紹培養(yǎng)操作凍存步驟售后服務(wù)

背景簡(jiǎn)介

人軟骨細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶聯(lián)合消化制備而來(lái)，人軟骨細(xì)胞分離自軟骨組織；軟骨組織由軟骨細(xì)胞、基質(zhì)及纖維構(gòu)成。軟骨組織再生能力強(qiáng)，這些增生的幼稚細(xì)胞形似纖維母細(xì)胞，以后逐漸變?yōu)檐浌悄讣?xì)胞，并形成軟骨基質(zhì)，細(xì)胞被埋在軟骨陷窩內(nèi)而變?yōu)殪o止的軟骨細(xì)胞。根據(jù)軟骨組織內(nèi)所含纖維成分的不同，可將軟骨分為透明軟骨、彈性軟骨和纖維軟骨三種，其中以透明軟骨的分布較廣，結(jié)構(gòu)也較典型。軟骨細(xì)胞（chondrocyte）位于軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層，單個(gè)分布，體積較小，呈橢圓形，長(zhǎng)軸與軟骨表面平行，越向深層的軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形，染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。

電鏡下，軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱	原代人軟骨細(xì)胞（免疫熒光鑒定報(bào)告）
種屬來(lái)源	人
組織來(lái)源	關(guān)節(jié)
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)
形態(tài)特征	長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞
質(zhì)量檢測(cè)	Ⅱ型膠原(Collagen Ⅱ)免疫熒光染色為陽(yáng)性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等
產(chǎn)品規(guī)格	5x10⁵cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基	人軟骨細(xì)胞專業(yè)培養(yǎng)基
培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
換液頻率	每2-3天換液一次
消化液	0.25%胰蛋白酶
運(yùn)輸方式	T25培養(yǎng)瓶/順豐快遞（包郵）
人軟骨細(xì)胞培養(yǎng)常見問題
人軟骨細(xì)胞傳代后變形，怎么辦? 軟骨細(xì)胞傳代后變形，可能是大多數(shù)老師在培養(yǎng)過程中都會(huì)遇到的問題。不過，傳代時(shí)形態(tài)發(fā)生變化，這是正?，F(xiàn)象。下面詳解該細(xì)胞形態(tài)的變化過程：第1代細(xì)胞形態(tài)圖第1代人軟骨細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈梭形、多角形。(圖片來(lái)源于客戶，僅供參考) 第2代的細(xì)胞形態(tài) 傳了1代后，細(xì)胞形態(tài)開始發(fā)生改變，細(xì)胞伸出絲狀偽足，形態(tài)似成纖維細(xì)胞(圖片來(lái)源于客戶，僅供參考) 從第1代到第2代，細(xì)胞就發(fā)生了形態(tài)上的改變。那么，繼續(xù)傳代下去，細(xì)胞形態(tài)是否會(huì)繼續(xù)發(fā)生改變呢答案是肯定的。第3代的軟骨細(xì)胞形態(tài)成纖維化會(huì)更為明顯，細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)長(zhǎng)梭形，并且生長(zhǎng)速度開始下降。4代后較為明顯，到第6代細(xì)胞形態(tài)幾乎全部變?yōu)殚L(zhǎng)梭形，似成纖維細(xì)胞樣。所以，建議最好選擇2代或3代的軟骨細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。既然人軟骨細(xì)胞傳代時(shí)，形態(tài)會(huì)發(fā)生變化，那究竟是什么原因造成的呢? 在體外培養(yǎng)人軟骨細(xì)胞時(shí)，軟骨細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng)，原代細(xì)胞大多呈橢圓形和多角形。隨著傳代次數(shù)增加，細(xì)胞逐漸變成長(zhǎng)梭形，向纖維樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化。同時(shí)，該細(xì)胞的功能也會(huì)發(fā)生變化：軟骨標(biāo)志性蛋白Ⅱ膠原合成分泌減少，而Ⅰ、Ⅲ型膠原合成分泌增多。 Ⅱ膠原的合成和分泌，是軟骨細(xì)胞維持其分化表型的特征性指標(biāo)，其在透明軟骨中占膠原的85%~90%，提供了軟骨特有的張力和硬度。其次，軟骨中的其他分子與膠原蛋白結(jié)合，會(huì)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使軟骨具有一定的彈性，同時(shí)對(duì)于維持軟骨形狀，承載外來(lái)負(fù)荷起著非常重要的作用。所以，隨著傳代次數(shù)的增加，維持細(xì)胞形態(tài)的物質(zhì)會(huì)逐漸減少，細(xì)胞的形態(tài)就會(huì)發(fā)生改變。這種形態(tài)和功能的變化稱之為反分化現(xiàn)象，也是單層傳代細(xì)胞的普遍現(xiàn)象。人軟骨細(xì)胞培養(yǎng)技巧 a. 低密度培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞易發(fā)生去分化現(xiàn)象，一般最適接種密度為2~10×104/cm2; b. 軟骨細(xì)胞代謝較為緩慢，換液頻度的增加無(wú)益于細(xì)胞的增殖，反而可能破壞由細(xì)胞分泌而形成的群體化學(xué)環(huán)境。
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
到貨方式	活細(xì)胞（常溫運(yùn)輸）
收貨處理	1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系；如果沒有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
傳代密度	細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代方法	1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
到貨方式	凍存細(xì)胞（干冰運(yùn)輸）
收貨處理	1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復(fù)蘇操作	1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
注意事項(xiàng)	1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 5. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過度解釋或免費(fèi)售后。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞? 如果沒要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。
凍存方法	待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10⁶~1x10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項(xiàng)	凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

人軟骨細(xì)胞文獻(xiàn)溯源

1972年始，迄今為止，關(guān)于人軟骨細(xì)胞(HC細(xì)胞)的文獻(xiàn)已有2005篇。

人軟骨細(xì)胞文獻(xiàn)溯源圖1

人軟骨細(xì)胞文獻(xiàn)溯源圖2

在pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)中用“human chondrocyte cell line”搜索該關(guān)鍵詞，第一篇為1972年M T Corvol在Endocrinology.發(fā)表的“A pituitary growth-promoting factor for articular chondrocytes in monolayer culture”。

人軟骨細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域

人軟骨細(xì)胞(HC)來(lái)源于正常的人關(guān)節(jié)軟骨，它們產(chǎn)生并維持軟骨的細(xì)胞外基質(zhì)，包括II型膠原蛋白。在研究中，這些細(xì)胞是細(xì)胞重編程和分化的金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照。

針對(duì)HC的表型特征描述和觀察其分化為破骨細(xì)胞。

研究使用HC來(lái)描述細(xì)胞受體的分子生物學(xué)、信號(hào)級(jí)聯(lián)、細(xì)胞因子激活和基因調(diào)控。

HC涉及在炎癥性疾病(如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和萊姆病相關(guān)的關(guān)節(jié)炎)中看到的凋亡、細(xì)胞毒性和軟骨降解。

通過檢查剪切應(yīng)力和機(jī)械轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的效果，一些研究人員希望利用HC開發(fā)出治療侵蝕性關(guān)節(jié)病變的方法。

一些實(shí)驗(yàn)室利用HC研究單克隆抗體治療或針對(duì)關(guān)節(jié)炎治療的侵蝕性基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的抑制。

因HC在潛在的臨床應(yīng)用中受到關(guān)注，因?yàn)镠C能粘附在醫(yī)療植入物上并滲透到用于軟骨再生的支架中。

人軟骨細(xì)胞標(biāo)志物

Collagen Type II和Aggrecan，以及Sox9。還有CD73、CD105、CD146、Collagen Type I、Osteopontin、MMP-13和C3等。這些標(biāo)志物對(duì)于識(shí)別和研究軟骨細(xì)胞非常重要。

科研細(xì)胞購(gòu)買常見問題

問：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？

答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。

問：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？

答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過3次，其次需要注意無(wú)菌操作，避免污染。

問：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請(qǐng)及時(shí)按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對(duì)復(fù)蘇會(huì)有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。

問：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。

科研細(xì)胞售后服務(wù)

細(xì)胞重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)

1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)；

3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；

4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；

5.細(xì)胞活性問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)；

6.視具體情況而定。

細(xì)胞不予重發(fā)標(biāo)準(zhǔn)

1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；

5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；

6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)；

7.視具體情況而定。

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背景簡(jiǎn)介

人軟骨細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

人軟骨細(xì)胞傳代后變形，怎么辦?

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第一節(jié):復(fù)蘇細(xì)胞收貨處理教程

第二節(jié):凍存細(xì)胞收貨處理教程

第三節(jié):細(xì)胞復(fù)蘇教程

第四節(jié):貼壁細(xì)胞傳代步驟

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國(guó)際細(xì)胞系身份認(rèn)證委員會(huì)(簡(jiǎn)稱ICLAC)

ExPASy瑞士細(xì)胞數(shù)據(jù)庫(kù)

中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)

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