相信很多科研小伙伴在培養(yǎng)懸浮細胞中會遇到死亡細胞，那么如何有效去除懸浮細胞培養(yǎng)中死細胞呢，可以試試磁珠標記、.流式分選、活細胞短暫貼壁法、沉降法、低速離心法等方法。

我們知道在懸浮細胞的培養(yǎng)過程中，根據(jù)整體細胞生長分裂的狀況可以將整個細胞培養(yǎng)周期分為四個時期：潛伏期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期、衰亡期。細胞進入對數(shù)生長期的時候是分裂最旺盛的時候，活性也是最高，隨著分裂次數(shù)的增加，代謝產物增加，度增大，到了對數(shù)生長期后期有一小部分細胞會出現(xiàn)凋亡的跡象。

進入穩(wěn)定期后細胞密度達到最大，如果這個時候不及時補充營養(yǎng)更換新鮮培養(yǎng)基的話凋亡的細胞就會越來越多，即死細胞越來越多。如果死細胞太多的話會影響降低整體細胞活性，同時也會抑制影響正常細胞的生長代謝。如果涉及藥篩實驗等，死細胞比例更會大幅增加，以下方法可以有效去除懸浮細胞中的死細胞。

懸浮細胞如何去除死細胞常用方法

1.磁珠標記

MACS(magnetic-activated cell sorting),原理就是用結合了磁珠的抗體去標記細胞，讓目的細胞帶上磁珠，也可以正向選擇死細胞，通過磁場將結合了磁珠與沒結合磁珠的細胞分離開來。MACS是細胞分選的重要手段，優(yōu)點是細胞活性好，缺點就是能分選的細胞類型有限，且成本較高。

2.流式分選

FACS(fluorescence-activated cell sorting)，也就是流式分選，與流式分析一致。利用熒光素標記不同的分子，通過調節(jié)合適的電壓、補償?shù)龋ㄟ^熒光將目的細胞與非目的細胞區(qū)分開來。

3.活細胞短暫貼壁法

可以用一種叫Con.A(刀豆球蛋白)來包被培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，懸浮細胞中的活細胞可短暫貼壁，此時棄去上清，一段時間后，細胞又可以重新懸浮。市面上有一些經過特殊處理的養(yǎng)貼壁細胞的培養(yǎng)瓶也可達到這種效果，但是建議使用之前根據(jù)所養(yǎng)的懸浮細胞生長狀況測試一下分離效果。

4.沉降法

部分懸浮細胞如NK92成團生長，成團的細胞狀態(tài)較好，單個細胞基本沒有增殖能力，根據(jù)這一特性，便可以將細胞懸液收集在離心管中，注意動作要輕柔，不要將細胞團吹散，將離心管直立，觀察離心管底出現(xiàn)“白霧”層時，可小心將上清去除，來收獲狀態(tài)良好的細胞團。

5.低速離心法

一般來說，懸浮細胞中的死細胞及細胞碎片的密度相對較低，此時，可以通過低速(500-800rpm)來去除一些上清中的死細胞，每次傳代或換液進行此操作，使活細胞有生長優(yōu)勢，可以慢慢提高活細胞比例。

懸浮細胞如何看活細胞還是死細胞

活細胞在100倍下觀察可以很明顯看到細胞形態(tài)是圓潤發(fā)亮的，死細胞很明顯是呈現(xiàn)黑灰色的，狀態(tài)不好的個別細胞是不夠圓潤。

去除懸浮細胞中的死細胞操作指南

操作參考一

一般可以通過低速(800rpm)來去除一些上清中的死細胞，每次傳代或換液進行此操作，使活細胞有生長優(yōu)勢，可以慢慢提高活細胞比例。

操作參考二

將培養(yǎng)瓶豎立放一段時間(50min左右)，然后用吸管輕輕吸取上面1ml的細胞懸液，移入另一個新的已加培基的培養(yǎng)瓶中?；蛘遞icoll分離，就像分離PBMC一樣，先把細胞混勻，然后小心緩慢地把細胞加入到ficol中，1000g離心20分鐘，收集位于ficoll和培養(yǎng)基之間的透明層，即為你的活細胞，這是在存在大量死亡細胞的時候采用，如果死亡細胞不是特別多的話，換液勤一點。

操作參考三

可以試驗一下以下方法:1稀釋法。細胞稀釋后還能增殖，會越來越多，而細胞碎片相應地會越來越少。2.自然沉降法。將細胞懸液移到離心管中，等細胞大部分下沉時，可將上液吸棄，再加入培養(yǎng)液懸浮細胞，此方法可反復使用，同時每次可顯微鏡下觀察是否符合你的要求。