背景簡介
UMNSAH/DF-1細(xì)胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞細(xì)胞株,自發(fā)永生化。分離原代雞胚成纖維細(xì)胞并在培養(yǎng)液中培養(yǎng);傳代直到衰老;在衰老過程中離心以保持細(xì)胞培養(yǎng)在30%到60%滿;不衰老的克隆進(jìn)行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖,說明這些細(xì)胞是永生化而沒有轉(zhuǎn)化。該細(xì)胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達(dá)和重組病毒生產(chǎn)的基質(zhì)。
一、細(xì)胞基本屬性 |
細(xì)胞名稱 | UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞 (種屬鑒定報告) |
細(xì)胞別稱 | UMNSAH-DF-1; UMNSAH-DF 1; UMNSAH-DF1; UMNSAH/DF#1; DF-1; DF1; Douglas Foster-1;雞胚胎成纖維細(xì)胞;UMNSAH/DF-1 |
種屬來源 | 雞;10日齡 |
組織來源 | 胚胎,自發(fā)永生化 |
生長特性 | 貼壁生長 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
特別注意 | UMNSAH/DF-1細(xì)胞密度過高時會出現(xiàn)空泡,傳代后狀態(tài)可恢復(fù) 1、DF-1細(xì)胞培養(yǎng)難度較高,溫度波動會導(dǎo)致細(xì)胞空泡增多; 2、DF-1細(xì)胞為38℃~40℃培養(yǎng),最佳培養(yǎng)溫度為39℃,37℃培養(yǎng)會影響細(xì)胞狀態(tài),建議提前準(zhǔn)備專用培養(yǎng)箱; 3、受溫度波動影響,收貨常見細(xì)胞空泡較多,穩(wěn)定培養(yǎng)后可恢復(fù)。 |
致瘤性 | No, in immunosuppressed mice. No, in semisolid medium. |
細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) |
生物安全等級 | 1 |
細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
支原體檢測 | 無 |
保藏機(jī)構(gòu) | ATCC; CRL-12203 |
培養(yǎng)基 | DMEM+10%FBS+1%PS |
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:38℃~40℃ |
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 |
倍增時間 | ~22-36小時 |
UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)常見問題 |
1.UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞收貨后很多空泡?這是因為UMNSAH/DF-1細(xì)胞在發(fā)貨過程中,容易受到溫度波動影響,而導(dǎo)致的細(xì)胞空泡增多。當(dāng)細(xì)胞受到外界環(huán)境因素影響如溫度時,細(xì)胞會發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)。細(xì)胞溫度降低時,細(xì)胞膜上磷脂分子的運(yùn)動減慢,流動性降低,從而降低了細(xì)胞膜對物質(zhì)的通透性,鈣離子內(nèi)流,從而導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中色素堆積,空泡形成。 處理方法 將收到的細(xì)胞正常傳代,觀察空泡是是否有減少,若空泡仍有很多,可增加傳代次數(shù),一般正常傳代后這種情況就會有所好轉(zhuǎn)。 2.UMNSAH/DF-1雞胚胎成纖維細(xì)胞培養(yǎng)注意事項?
細(xì)胞培養(yǎng)的最佳溫度主要取決于細(xì)胞供體的體溫,此外也受到解刨部位體溫差異的影響。對于不同的動物細(xì)胞,所需要的培養(yǎng)溫度也有所不同,對于禽類動物細(xì)胞,最佳培養(yǎng)溫度為39℃,所以UMNSAH/DF-1細(xì)胞的最佳培養(yǎng)溫度也為39℃。37℃培養(yǎng)會影響細(xì)胞狀態(tài),建議提前準(zhǔn)備專用培養(yǎng)箱。 若我們在培養(yǎng)細(xì)胞過程中出現(xiàn)了空泡,也有可能是細(xì)胞凋亡或是營養(yǎng)不夠等原因,針對不同的情況需要采用不同的解決辦法。在實驗中,我們可以通過時刻關(guān)注細(xì)胞的狀態(tài),及時換液,采用優(yōu)質(zhì)血清,保證細(xì)胞所需營養(yǎng)充足等,避免空泡的出現(xiàn)。 |
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 |
到貨方式 | 復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸 |
收貨處理 | 1.收到細(xì)胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有,請立即和我們聯(lián)系;如果沒有,請您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁,再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài),在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)時,最好在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度??醇?xì)胞的形態(tài)請在10X和20X物鏡下,同時給剛收到的細(xì)胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時提供收到細(xì)胞時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。 |
傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) |
傳代方法 | 1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,棄去消化液,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心4 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
到貨方式 | 凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸 |
收貨處理 | 1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨,請檢查干冰是否完全揮發(fā),細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞,如若不能復(fù)蘇請立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。 |
培養(yǎng)皿/瓶 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 |
復(fù)蘇操作 | 1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
注意事項 | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管,客戶先復(fù)蘇一支,若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請售后時請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息,建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 5.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同,導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異,對于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為,不予過度解釋或免費(fèi)售后。 |
三、細(xì)胞凍存操作 |
凍存液配方 | 無血清凍存液,液氮儲存 |
凍存密度 | 如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞,那就用1ml完培重懸后,取部分按平時方法計數(shù),剩下的細(xì)胞按計數(shù)需要的細(xì)胞量凍存即可。 如果沒要求,那就按平時,一個皿凍一管。 |
凍存方法 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,加1 mL血清重懸細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
注意事項 | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案 |
UMNSAH/DF-1細(xì)胞文獻(xiàn)溯源
2007年始,迄今為止,關(guān)于雞胚胎成纖維細(xì)胞的文獻(xiàn)已有5篇。


在pubmed數(shù)據(jù)庫中用“UMNSAH/DF-1”搜索該關(guān)鍵詞,第一篇為2007年Jiyoung Park在Mol Cell
Endocrinol.發(fā)表的“Glucocorticoids modulate NF-kappaB-dependent gene expression by
up-regulating FKBP51 expression in Newcastle disease virus-infected
chickens”。
UMNSAH/DF-1細(xì)胞文獻(xiàn)概述
FK506結(jié)合蛋白51(FKBP51,由FKBP5基因編碼)是一個共伴蛋白分子,與伴侶蛋白HSP90和糖皮質(zhì)激素受體(GR)在非活化的GR復(fù)合物中相互作用。FKBP51是糖皮質(zhì)激素作用的負(fù)調(diào)節(jié)因子,當(dāng)激素與GR結(jié)合時,它被FK506結(jié)合蛋白52(FKBP52,由FKBP4基因編碼)取代,使GR復(fù)合物活化。
該研究發(fā)現(xiàn),新城疫病毒(NDV)感染的雞的12個器官中FKBP51
mRNA的表達(dá)被強(qiáng)烈誘導(dǎo)。相比非感染對照組的雞,感染NDV的雞的器官中皮質(zhì)酮水平也升高了,大約是2倍至6.5倍。地塞米松處理重現(xiàn)了FKBP51
mRNA表達(dá)的誘導(dǎo),表明糖皮質(zhì)激素在全身誘導(dǎo)FKBP51 mRNA表達(dá)中起到了作用。
在雞的UMNSAH/DF-1細(xì)胞中,核因子kappaB(NF-kappaB)以FKBP51依賴方式被激活。在UMNSAH/DF-1細(xì)胞中研究了三個NF-kappaB依賴的抗凋亡基因bcl-2,bcl-x和bfl-1
/ A1的調(diào)節(jié)。地塞米松處理UMNSAH/DF-1細(xì)胞導(dǎo)致bcl-2的上調(diào),bcl-x和bfl-1 / A1的下調(diào)。FKBP51的表達(dá)也導(dǎo)致bfl-1 /
A1的下調(diào),但對bcl-2和bcl-x無影響,這表明胰高血糖素-FKBP51-NF-kappaB信號通路參與了UMNSAH/DF-1細(xì)胞中bfl1/A1的表達(dá)調(diào)節(jié)。我們觀察到在NDV感染和地塞米松處理的雞的器官中,bcl-2,bcl-x和bfl-1/A1的表達(dá)顯示器官特異性的上調(diào)或下調(diào)。NDV感染和地塞米松處理對bfl-1/A1,bcl-2和bcl-x的差異調(diào)控表明其他因素參與了這些基因的調(diào)節(jié)。這些結(jié)果表明,NDV感染的雞中FKBP51的全身升高激活了NF-kappaB,該因子與其他因素合作以調(diào)節(jié)NF-kappaB依賴基因的表達(dá)。
UMNSAH/DF-1細(xì)胞應(yīng)用領(lǐng)域
雞胚胎成纖維細(xì)胞(UMNSAHDF-1)
是一種自發(fā)永生的雞細(xì)胞系。該細(xì)胞可用作病毒增殖(新城疫病毒、流感病毒、馬立克氏病病毒等)、重組蛋白表達(dá)(禽流感病毒H9N2等)和重組病毒生產(chǎn)的基質(zhì),因此該細(xì)胞在疫苗開發(fā)中具有重要作用。此外,UMNSAH/DF-1細(xì)胞系也可作為重組蛋白表達(dá)系統(tǒng),用于生產(chǎn)用于疫苗、診斷試劑或治療性蛋白的生物制品。
UMNSAH/DF-1
細(xì)胞系作為一種多功能和多用途的細(xì)胞模型,已被廣泛應(yīng)用于多個研究領(lǐng)域。同時,由于UMNSAH/DF-1細(xì)胞系來源于雞,它們在評估藥物對家禽的潛在毒性方面具有獨(dú)特優(yōu)勢,可用于藥物篩選和毒理學(xué)研究。
在細(xì)胞凋亡和信號傳導(dǎo)研究中,UMNSAH/DF-1細(xì)胞系已被用于研究藥物或病毒感染引起的細(xì)胞凋亡過程,以及相關(guān)的信號傳導(dǎo)途徑,如NotcH1細(xì)胞和Δ-like-1的表達(dá)。UMNSAH/DF-1細(xì)胞系也是進(jìn)行基因克隆、基因編輯(如CRISPR/Cas9技術(shù))和基因表達(dá)研究的良好模型。
該細(xì)胞系還可用于評估生物材料的生物相容性,以及它們對細(xì)胞附著、增殖和分化的影響。此外,UMNSAH/DF-1細(xì)胞系在癌癥研究、細(xì)胞衰老研究和神經(jīng)生物學(xué)研究中也有廣泛應(yīng)用。
參考文獻(xiàn)
Phosphorylation of VP1 Mediated by CDK1-Cyclin B1 Facilitates Infectious
Bursal Disease Virus Replication. J Virol. 2023 Jan 31;97(1):e0194122. doi:
10.1128/jvi.01941-22. Epub 2023 Jan 5. PMID: 36602364; PMCID: PMC9888224.
作者:Hu X, Chen Z, Wu X, Ding Z, Huang Y, Fu Q, Chen Z, Wu H.
細(xì)胞:Chicken fibroblast line DF-1 cells
2022年影響因子/JCR分區(qū):6.549/Q2
PRMT5 Facilitates Infectious Bursal Disease Virus Replication through
Arginine Methylation of VP1.
作者:Xifeng Hu,Zheng Chen,Xiangdong Wu,Qiuling Fu,Zhen Chen,Yu Huang,Huansheng
Wu.
細(xì)胞:DF-1 cells
2022年影響因子/JCR分區(qū):6.549/Q2
答:部分細(xì)胞是會出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件,我們公司優(yōu)先選擇引種來源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件,出現(xiàn)差異的原因是不同實驗室在保藏過程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件,為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng),建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。
答:細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式,常溫細(xì)胞貨期一般一周左右,復(fù)蘇活細(xì)胞一個T25瓶發(fā)貨;凍存細(xì)胞有庫存的話,一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨,細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈送了一管,實際發(fā)貨2管;原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管,凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸,所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。
答:一般不建議重復(fù)利用,特別是貼壁不牢固細(xì)胞,重復(fù)利用會導(dǎo)致吸附性變差,漂浮增多;一個T25瓶建議使用最多不超過3次,其次需要注意無菌操作,避免污染。
答:不能回收使用的,運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多,所以收到細(xì)胞之后,培養(yǎng)箱靜置4-6h之后,請及時按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。
答:這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn),與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān),偶爾有遇到這種情況,不是絕對性對細(xì)胞狀態(tài)有影響,可以復(fù)蘇看下。
4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實后,重發(fā);
5.細(xì)胞活性問題,請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā);