背景簡介

Blasticidin S 是來源于灰色鏈霉菌（Streptomyces griseochromogenes）一種核苷類抗生素，中文名為滅瘟素S。Blasticidin S 用于篩選攜帶有 bsr/BSD/bls 基因（常標記為bsrr/bsdr、Blastr）質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。殺稻瘟菌素具有快速而強效的作用模式，很低的抗生素濃度便能導致細胞迅速死亡。

Blasticidin S 通過干擾核糖體結(jié)合肽段而特異性抑制原核細胞或真核細胞的蛋白合成。目前已經(jīng)有3種滅瘟素耐受基因，一種是分離自鏈霉菌(Streptoverticillum sp.)的乙?；D(zhuǎn)移酶基因 bls;另外兩種是脫氨酶基因，分別是從蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）中分離的bsr和從土霉菌（Aspergillus terreus）中分離的BSD基因。bsr和BSD基因是最常用的篩選標志，用于哺乳動物和植物細胞的穩(wěn)定細胞株篩選。Blasticidin S 也可用于大腸桿菌等原核細胞的篩選。

Blasticidin S(殺稻瘟菌素)使用說明

一、推薦工作濃度

1. Escherichia coli

E.coli 對 Blasticidin S 的敏感性稍差，但是轉(zhuǎn)化子對Blasticidin S 具有耐受性，可以用低鹽LB培養(yǎng)基(pH 8)進行篩選，濃度范圍為50-100μg/ mL Blasticidin S。高pH值可以提高Blasticidin S 的活性。

2. 哺乳動物細胞

哺乳動物細胞中Blasticidin S 的工作濃度范圍在1-50μg/ mL。初次實驗建議通過劑量反應曲線來確定最佳使用濃度。

一些哺乳動物細胞的建議工作濃度

二、哺乳動物穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選

Blasticidin S 通常使用濃度為10μg/mL。攜帶 bsr 或 BSD 基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，在含有 Blasticidin S 的正常生長培養(yǎng)基中孵育，用于篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株。

1.細胞轉(zhuǎn)染后48h，用含有適宜濃度 Blasticidin S 的新鮮培養(yǎng)基將細胞傳代(注:細胞處于活躍分裂期時抗生素工作最好。細胞密度太高，抗生素效率降低。細胞分盤時覆蓋率最好不超過 25%。建議同時做一個正常細胞的對照組。轉(zhuǎn)染或感染48小時后，如果細胞過密也可以消化后重組接種細胞，培養(yǎng)過夜后即可進行 Blasticidin S 篩選)。

2.每3-4天去除培養(yǎng)基，加入含 Blasticidin S 的新鮮培養(yǎng)基。

3.篩選7-10天后，對照組正常細胞應該100%死亡，處理組中存活的細胞為表達bsr或BSD基因的細胞。然后根據(jù)實驗目的進行多克隆或單克隆細胞的篩選，根據(jù)宿主細胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要一周或更多的時間。

4.克隆形成后，轉(zhuǎn)移5-10個耐受克隆到35mm 細胞盤中，加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7天。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。

使用注意事項

1.本產(chǎn)品對人體有急性毒性，操作時請?zhí)貏e小心，并確保有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

2. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。