產(chǎn)品簡介

潮霉素B是一種由吸水鏈霉菌代謝產(chǎn)生的氨基糖苷類抗生素。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀進而抑制蛋白質(zhì)的合成，殺死原核(細菌)、真核(例如酵母菌，真菌)和高等哺乳動物真核細胞。

大腸桿菌來源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的抗性選擇標記，可用來篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418、Zeocin或Blasticidin S聯(lián)合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。此外，潮霉素B還能用作抗病毒劑，或混合入動物飼料中起到驅(qū)蟲功能。

本產(chǎn)品為無菌的潮霉素B溶液(50 mg/mL)，可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。常用工作濃度為200-500 μg/mL。對于第一次使用的實驗體系，建議通過建立劑量反應曲線來確定最佳篩選濃度。

產(chǎn)品信息

Hygromycin B（潮霉素B）使用說明

1. 潮霉素B劑量反應曲線的確定

對于初次使用的細胞，一般需要通過實驗來確定適合自身實驗體系的劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)。

(1) 第一天：24孔板中以5~8×104cells/孔的密度接種未轉(zhuǎn)染細胞，接種足夠量的孔以便進行后續(xù)的劑量梯度實驗。細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。

(2) 第二天： 在培養(yǎng)過夜后的細胞中更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基，該篩選培養(yǎng)基為含不同濃度潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基(如 0、50、100、250、500、750、1000 μg/mL 等)，更換培養(yǎng)基后在細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。接下來每3-4天更換新的含抗生素培養(yǎng)基。

(3) 按照固定的周期進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的合適濃度，選擇在7-10天能殺死絕大多數(shù)細胞的最低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。

2. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

轉(zhuǎn)染含有抗性基因的質(zhì)?；蛘吒腥竞性摶虻牟《竞螅纯珊Y選穩(wěn)定表達株。

(1) 細胞轉(zhuǎn)染或感染48 h后，將細胞置于含有適當濃度潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

注意：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用最明顯。細胞過于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降，所以細胞的密度最好不超過 25%。建議同時做一個正常細胞的對照組。轉(zhuǎn)染或感染48 h后，如果細胞過密也可以消化后重新接種細胞，培養(yǎng)過夜后即可進行潮霉素B篩選。

(2) 每隔3-4天，更換含有抗生素的新鮮培養(yǎng)基。

(3) 篩選7天后，對照組正常細胞應該100%死亡，轉(zhuǎn)染組中存活的細胞為表達潮霉素B抗性基因的細胞。然后根據(jù)實驗目的進行多克隆或單克隆細胞的篩選。

(4) 挑選出的穩(wěn)定抗性克隆繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7-10天，之后更換正常培養(yǎng)基即可。

注意事項

1. 使用本產(chǎn)品時應注意無菌操作，避免污染;

2. 本產(chǎn)品為濃縮液，請根據(jù)需要稀釋后使用;

3. 本產(chǎn)品可能對人體有一定的毒害作用，請注意適當防護，以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。