產(chǎn)品簡介 

Zeocin即phleomycin D1，中文名稱博來霉素或者腐草霉素D1，是從輪狀鏈霉菌(Streptomyces verticillus)的一個(gè)突變體菌株中分離而來的博來霉素/腐草霉素(bleomycin/phleomycin)的抗生素家族成員。它對(duì)細(xì)菌、真菌(包括酵母)、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞均有抑制作用和細(xì)胞毒性。 

 Zeocin是一種堿性、水溶性的、銅離子螯合的糖肽抗生素。Cu2+螯合的Zeocin溶液呈現(xiàn)藍(lán)色，無活性。當(dāng)其進(jìn)入細(xì)胞后，Zeocin上的Cu2+被還原為一價(jià)銅離子(Cu+)，并被細(xì)胞內(nèi)的巰基化合物(sulfhydryl compound)清除，導(dǎo)致Zeocin被活化，能夠結(jié)合到細(xì)胞內(nèi)DNA上并使其斷裂，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

 對(duì)Zeocin產(chǎn)生抗性的蛋白是來源于印度鏈球菌(Streptoalloteichus hindustanus)的Shble基因編碼一種14kDa大小的蛋白，它能夠以一定比率結(jié)合Zeocin，使其不能結(jié)合細(xì)胞DNA，抑制其DNA斷裂活性，從而使細(xì)胞對(duì)Zeocin產(chǎn)生抗性。因此，Zeocin可用來篩選表達(dá)Zeocin抗性基因的多克隆或單克隆細(xì)胞，或用于相應(yīng)的多克隆或單克隆細(xì)胞的維持性培養(yǎng)。

Zeocin對(duì)于絕大多數(shù)好氧細(xì)胞均有效，常用于細(xì)菌(如大腸桿菌)、真核微生物(如酵母)及動(dòng)植物細(xì)胞的篩選。大腸桿菌篩選推薦濃度為25~50μg/mL (低鹽LB培養(yǎng)基，NaCl濃度不能超過5g/L)；酵母篩選推薦濃度為50~300μg/mL (YPD或基本培養(yǎng)基)；哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選推薦濃度為50~1000μg/mL(合適培養(yǎng)基，根據(jù)細(xì)胞系的類型而不同)。實(shí)際應(yīng)用時(shí)，應(yīng)針對(duì)不同的細(xì)胞系測試Zeocin的濃度梯度，以確定最佳使用濃度。

產(chǎn)品信息

Zeocin(博來霉素/腐草霉素 D1)使用說明

1.細(xì)菌的篩選(以大腸桿菌為例)。

a.使用不含Tn5轉(zhuǎn)座子元件的宿主細(xì)胞如Top10、DH5和DH10等進(jìn)行篩選

b.需使用低鹽LB培養(yǎng)基(10g胰蛋白胨，5g NaCl，5g酵母提取物，調(diào)整pH至7.5，加水定容至1L)以維持Zeocin的活性。

c.Zeocin篩選的推薦濃度為25~50μg/mL。

2.真菌的篩選(以酵母為例)。

a.適用于釀酒酵母和畢赤酵母。

b.培養(yǎng)基的選擇：含1M山梨醇的YPD培養(yǎng)基(適用于電穿孔法轉(zhuǎn)染細(xì)胞);YPD或基本培養(yǎng)基(適用于化學(xué)法轉(zhuǎn)染細(xì)胞)。調(diào)整培養(yǎng)基pH至6.5~8.0，并選擇使用最低有效濃度的Zeocin進(jìn)行篩選。

c.轉(zhuǎn)染方法：需使用電穿孔或鋰離子轉(zhuǎn)染法。不要使用酵母原生質(zhì)球(spheroplasting)進(jìn)行Zeocin抗性的轉(zhuǎn)染及篩選，因?yàn)閆eocin會(huì)導(dǎo)致原生質(zhì)球的完全死亡。

d.Zeocin篩選的推薦濃度為50~300μg/mL。具體濃度與酵母菌株、培養(yǎng)基pH以及離子強(qiáng)度有關(guān)。

3.哺乳動(dòng)物穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選。

Zeocin用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞篩選常用濃度為50-1000μg/mL (平均常用濃度為250-400μg/mL)。影響篩選濃度的主要因素包括離子強(qiáng)度、細(xì)胞類型、細(xì)胞生長密度以及生長速率。根據(jù)細(xì)胞類型的不同，需要1-2周可以篩選到Zeocin抗性的細(xì)胞。在篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株之前，需要先確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的Zeocin最佳工作濃度。Zeocin的最佳工作濃度需要通過劑量效應(yīng)曲線來確定。下表中列出了部分細(xì)胞中Zeocin的篩選濃度范圍以供參考。

表. 部分常見哺乳動(dòng)物細(xì)胞的Zeocin推薦篩選濃度表

Zeocin(博來霉素/腐草霉素 D1)注意事項(xiàng)

1.Zeocin人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意有效防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

2.Zeocin對(duì)光敏感，需避光保存于-20℃。含有該抗生素的平板或培養(yǎng)基也需避光保存。

3.高離子強(qiáng)度、酸或堿性都會(huì)抑制Zeocin的活性，該抗生素在過高或過低pH及弱氧化劑的條件下不穩(wěn)定，且變性不可逆。在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需適當(dāng)降低細(xì)菌培養(yǎng)基的鹽濃度(低鹽LB培養(yǎng)基，NaCl濃度不能超過5g/L)并調(diào)整pH至7.5，從而使其保持活性。

4. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

5. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。