產(chǎn)品簡介

慢病毒包裝試劑盒(Lentiviral Packaging Kit)由優(yōu)化的慢病毒包裝輔助質(zhì)粒A與B(Lentiviral Mix A/B)、表達(dá)GFP蛋白的對照質(zhì)粒、高效轉(zhuǎn)染試劑(PEI)和慢病毒感染增強(qiáng)劑(Polybrene)組成，Lentiviral Mix能夠表達(dá)病毒包裝需要的各種必需成分如：gag基因，編碼病毒主要的結(jié)構(gòu)蛋白;pol基因，編碼病毒特異性的酶;rev基因，編碼調(diào)節(jié)gag和pol基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因子;還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白。慢病毒包裝系統(tǒng)產(chǎn)生的慢病毒感染目的細(xì)胞后不會再感染其他細(xì)胞，也不會利用宿主細(xì)胞產(chǎn)生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代，屬于假型病毒。

本試劑盒具有慢病毒包裝時(shí)間周期短(一周之內(nèi)即可獲得純化好的高滴度慢病毒)和病毒滴度高，可應(yīng)用于針對不同基因和藥物靶標(biāo)的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和整體動物實(shí)驗(yàn)。非常適合于病毒包裝初試者。

產(chǎn)品規(guī)格

慢病毒包裝試劑盒使用說明

(1)細(xì)胞培養(yǎng)。293T細(xì)胞傳代接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿(Φ 100 mm)，置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后細(xì)胞密度達(dá)到70%～90%。(細(xì)胞密度不宜過大，否則影響轉(zhuǎn)染效率)

(2)轉(zhuǎn)染。向720 μL 1×HBS溶液中加入慢病毒包裝質(zhì)粒Lenti-Mix(A：3 μg、B：6 μg)，再加入9 μg慢病毒骨架質(zhì)粒(目的蛋白過表達(dá)或RNAi質(zhì)粒，或一管GFP對照質(zhì)粒)，混勻，加入54 μL轉(zhuǎn)染試劑PEI，混合10次，室溫靜置20 min，滴加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，輕輕搖勻。

(3)換液。轉(zhuǎn)染6-12 h，更換成新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

(4)慢病毒收集。轉(zhuǎn)染48 h，收集第一批含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清(暫時(shí)置于4 ℃保存)。

(5)293T細(xì)胞中再加入10 mL新鮮的細(xì)胞培養(yǎng)液，48 h后，收集第二批含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清(第二批細(xì)胞培養(yǎng)上清中的慢病毒滴度高于第一批)。

(6)離心。含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清轉(zhuǎn)入離心機(jī)，4000 g，4 ℃離心20 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)入新的無菌離心管，即是含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清。

(7)二次離心。含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清轉(zhuǎn)入離心機(jī)，12000 g，4 ℃離心30 min，棄沉淀，上清轉(zhuǎn)入新的無菌離心管，即是含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清。

慢病毒感染

(1)目的細(xì)胞培養(yǎng)。目的細(xì)胞傳代后接種到6孔板中，24 h后細(xì)胞密度達(dá)到30%-60%。

(2)慢病毒感染。棄培養(yǎng)液，加入2mL含有慢病毒的細(xì)胞培養(yǎng)上清液，再加入2 μL的polybrene(與細(xì)胞培養(yǎng)液按照1:1000稀釋)，輕搖，混勻。

(3)換液。病毒感染12-24 h后，更換成新鮮的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，若無細(xì)胞毒性，可以不換液。

(4)檢測。慢病毒感染72 h，熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)情況，或檢測目的基因表達(dá)水平。

慢病毒包裝所需其他材料(選用)

1.1×HBS：

2.293T：慢病毒包裝所用工具細(xì)胞(293T cat.NO IM-H222)

慢病毒包裝試劑盒注意事項(xiàng)

1.本產(chǎn)品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區(qū)。

2. 為了您的安全和健康，請穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。