背景簡介

hPSC-運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元是從人類多能干細(xì)胞（hPSC）分化得來，該細(xì)胞是分化早期的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，具有繼續(xù)向成熟運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元（mMN）分化的能力。分化獲得的成熟運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元（mMN）能表達(dá)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的特異性Marker（如CHAT, MAP2等）。

產(chǎn)品信息

hPSC來源運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞iMN(H1)復(fù)蘇培養(yǎng)步驟

將含有1 mLhPSC來源運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞iMN(H1)懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)混合均勻。

在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)后吹勻。

然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)的基質(zhì)膠或laminin包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培養(yǎng)過夜。24h后，換成不含IMC-014-Y的MN維持培養(yǎng)基(MN貼壁不牢固，換液動(dòng)作需輕緩)，視培養(yǎng)基顏色或隔2天換液。

hPSC來源運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞iMN(H1)細(xì)胞傳代培養(yǎng)步驟

(當(dāng)有實(shí)驗(yàn)需求時(shí)可按培養(yǎng)器皿底面積1:1比例接種傳代)

a、棄去培養(yǎng)基，加入1-2 mL Accutase(含10μM IMC-014-Y)，置于37℃培養(yǎng)箱消化2-5min。

b、2-5 min后每孔加入等量 MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)，輕輕吹打細(xì)胞，使細(xì)胞解離成單細(xì)胞。

c、將細(xì)胞懸液收集到15 mL離心管中，室溫下300 g離心5 min。

d、仔細(xì)抽吸上清液，不干擾細(xì)胞，用1mL恢復(fù)室溫的MN維持培養(yǎng)基重懸細(xì)胞(含10μM IMC-014-Y)，輕輕地上下移液以確保細(xì)胞溶液均勻。

e、使用MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)稀釋細(xì)胞，將細(xì)胞以1:1比例接種到基質(zhì)膠或laminin包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培養(yǎng)過夜(按底面積算，1個(gè)T25相當(dāng)于六孔板2.5個(gè)孔，六孔板1孔可傳12孔板的2孔，24孔板的4孔，96孔板的6孔)。24h后，換成不含IMC-014-Y的MN維持培養(yǎng)基(MN貼壁不牢固，換液動(dòng)作需輕緩)，視培養(yǎng)基顏色或隔2天換液。

hPSC來源運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞iMN(H1)培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h。

4. 客戶可購買逸漠生物MN維持培養(yǎng)基(含MN維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基，貨號(hào)IMI-MN01M1 ;MN維持培養(yǎng)基補(bǔ)充劑，貨號(hào)IMI-MN01MA )。

5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

6.該細(xì)胞僅供科研使用。

備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。