產(chǎn)品簡介

hESC/iPSC鋪板工作液是使用VTN 包被蛋白(Vitronectin)配制的即用型工作液，VTN是一種成分確定的，無異源成分的細胞基質(zhì)，能夠支持人類胚胎干細胞(human embryonic stem cell, hESC)以及人類誘導多能干細胞(human induced pluripotent stem cell, hiPSC)的生長和分化，可以與多能干細胞完全培養(yǎng)基一起使用，用于hESC/iPSC體外無飼養(yǎng)層培養(yǎng)。

產(chǎn)品信息

VTN純度≥95% 內(nèi)毒素含量≤25 EU/mg

儲存條件

基礎培養(yǎng)基2~8℃，VTN-20℃;2~8℃解凍，禁止反復凍融。

VTN使用說明

1：VTN 的推薦包被濃度為 1 ug/cm2，以 6 孔板為例，6 孔板每孔面積 10 cm2，則需要使用 10 ug VTN 包被蛋白。

不同培養(yǎng)容器VTN工作液推薦用量

容器孔面積VTN用量

6孔板10 cm2/孔10 ug

60-mm培養(yǎng)皿20 cm220 ug

100-mm培養(yǎng)皿60 cm260 ug

T-25培養(yǎng)瓶25 cm225 ug

2：舉例，一塊 6 孔板總共有 60 cm2，包被需要 60 ug VTN ，即 120 ul (500 ug/ml)，可以將 VTN 分裝成 120 uL(60 ug)/管，于 -20℃保存，每次使用時候取 1 管 VTN (120 ul，60 ug)，用基礎培養(yǎng)基稀釋成工作液，即可包被 1 塊 6 孔板。

VTN分裝

以分裝120ul/每管為例，可根據(jù)實驗要求和使用說明進行分裝。

1：VTN于4℃冰箱過夜解凍。

2：提前準備無菌槍頭，EP管于-20℃冰箱預冷。

3：將解凍的VTN與EP管置于冰上放入生物安全柜。

4：用預冷的槍頭將VTN按120ul/每管分裝至EP管中，放入-20℃冰箱保存。

工作液配制與培養(yǎng)板包被

以包被 6 孔板為例，操作程序同樣適用于其他培養(yǎng)容器。

1. 取 1 管分裝好的VTN(120 ul，60 ug)，4℃冰箱解凍。

2. 準備 1 個 15 ml離心管，4℃冰箱取基礎培養(yǎng)基分裝出9 mL，立即將解凍的 VTN 加入冷的基礎培養(yǎng)基中，輕柔混勻稀釋的 VTN 10-20次，不要渦旋震蕩。

3. 立即使用配制的工作液進行包被，按照1.5mL/孔用量來包被 6孔板。

4. 輕輕晃動培養(yǎng)皿，使稀釋后的工作液均勻地鋪在皿底表面。

5. 室溫(15~25℃)靜置至少 1 小時后使用。 TIPS：如不立即使用，密封培養(yǎng)皿以防止工作液蒸發(fā)。建議 4℃條件保存包被后的培養(yǎng)皿，1 周內(nèi)使用。使用時將培養(yǎng)皿置于室溫(15 ~25℃)環(huán)境， 復溫 10~30 分鐘，才可用于下一步實驗。

6. 使用時，將培養(yǎng)皿傾斜，用移液管或槍頭吸盡工作液即可。確保包被后的培養(yǎng)皿底部表面無劃痕，也無需額外加相關溶液洗滌。