人源心肌細(xì)胞（IPSC誘導(dǎo)心肌細(xì)胞）

貨號：IMP-H184

價格：

￥9200

規(guī)格：

貨號：IMP-H184

培養(yǎng)基：人源心肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基

傳代特征：心肌細(xì)胞是終末分化的功能細(xì)胞，與人體內(nèi)的心肌細(xì)胞性質(zhì)相同，不能增殖擴(kuò)增

細(xì)胞凍存：凍存細(xì)胞存于-80℃冰箱，2周有效期；長期需液氮儲存

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產(chǎn)品描述

背景簡介

人源心肌細(xì)胞（正常型）是一種即用型的高純度心肌細(xì)胞產(chǎn)品。將誘導(dǎo)多能干細(xì)胞高效分化、純化而成。心肌細(xì)胞主要由具備自主電生理活動的心室肌樣細(xì)胞組成，同時也包含少量心房肌和竇房結(jié)樣細(xì)胞。這些細(xì)胞表達(dá)常規(guī)的心肌特異性基因，包括多種收縮蛋白和離子通道。同時，心肌細(xì)胞具備經(jīng)典的心肌細(xì)胞電生理活性，能夠?qū)﹄妼W(xué)、生物化學(xué)和機(jī)械刺激做出心肌細(xì)胞的常規(guī)反應(yīng)。以電生理和鈣轉(zhuǎn)導(dǎo)信號記錄為例，這些細(xì)胞可以作為新藥篩選，毒理學(xué)測定和其他生理學(xué)研究的理想工具。

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱	原代人源心肌細(xì)胞（IPSC誘導(dǎo)心肌細(xì)胞）
種屬來源	人
產(chǎn)品規(guī)格	5x10⁵cells/T25或1mL凍存管
培養(yǎng)基	人源心肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基
產(chǎn)品優(yōu)勢	高純度人源細(xì)胞：與傳統(tǒng)鼠源心肌細(xì)胞不同，心肌細(xì)胞是一種高純度的體外人源細(xì)胞。嚴(yán)格的質(zhì)檢把控，確保心肌細(xì)胞純度達(dá)95%以上。特有人類心肌細(xì)胞屬性。動作電位：具備正常人類心臟的標(biāo)準(zhǔn)電生理學(xué)特征，受到電刺激后產(chǎn)生搏動。收縮功能：具備正常人類心臟的電收縮偶聯(lián)，具備心臟特有的收縮功能，自主搏動節(jié)律接近成人竇性心律。離子通道：具備正常人類心肌細(xì)胞的絕大部分離子通道，為科學(xué)研究提供更準(zhǔn)確的模型疾病特異型細(xì)胞通過重編程疾病特異型體細(xì)胞，例如表皮成纖維細(xì)胞及CD34+血細(xì)胞。
傳代特征	心肌IPSC誘導(dǎo)心肌細(xì)胞是終末分化的功能細(xì)胞，與人體內(nèi)的心肌細(xì)胞性質(zhì)相同，不能增殖擴(kuò)增
凍存細(xì)胞	凍存細(xì)胞存于-80℃冰箱，2周有效期；長期需液氮儲存
產(chǎn)品視頻
產(chǎn)品貨期	7-8周左右
運(yùn)輸方式	T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）
供應(yīng)限制	僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
特別說明	以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
需要材料	1.DPBS, No Calcium, No Magnesium 2.RPMI1640 3.FBS
心肌細(xì)胞進(jìn)行再接種	a.如果需要將心肌細(xì)胞按合適密度接種到新的培養(yǎng)皿/瓶中，可對心肌細(xì)胞進(jìn)行再接種，再接種操作會導(dǎo)致20%左右的細(xì)胞死亡，即損失20%的細(xì)胞。 b.室溫平衡心肌細(xì)胞復(fù)蘇液、DPBS溶液，37℃預(yù)熱心肌細(xì)胞消化液。 c.取出心肌細(xì)胞鋪板液包被過的培養(yǎng)皿/瓶，吸去心肌細(xì)胞鋪板液并加入適量心肌細(xì)胞復(fù)蘇液，置于5%CO 2 的37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中。 d.吸除心肌細(xì)胞培養(yǎng)基，加入DPBS溶液清洗一次。 e.移除DPBS，加入預(yù)熱的心肌細(xì)胞消化液使之完全覆蓋皿/瓶底。 f.37℃孵育3-5分鐘，顯微鏡下觀察到大部分細(xì)胞相互分離，表明達(dá)到理想的消化時間。 g.向皿/瓶中加入消化液3-5倍體積的RPMI1640+10%FBS終止消化，用槍扇形吹打培養(yǎng)皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的心肌細(xì)胞脫落，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15ml 離心管中，再加入適量中和液沖洗皿/瓶底，收集剩余細(xì)胞加入15ml離心管中，300g離心5分鐘。 I .小心移除上清，用心肌細(xì)胞復(fù)蘇液重懸細(xì)胞，輕柔吹打混勻，并接種到包被過的培養(yǎng)皿/瓶中，十字晃動使細(xì)胞均勻分布。 II.5%CO 2 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時后，更換為心肌細(xì)胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。 III.心肌細(xì)胞需要在二氧化碳培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2-8天恢復(fù)搏動；此期間心肌細(xì)胞需要每隔48h換一次心肌細(xì)胞培養(yǎng)基。重要提醒：吹打力度要輕柔，避免損傷細(xì)胞。亦可用心肌細(xì)胞培養(yǎng)基+10%FBS終止消化。
培養(yǎng)材料準(zhǔn)備	心肌細(xì)胞鋪板液包被培養(yǎng)皿/瓶：在4℃冰面上，往培養(yǎng)皿/瓶中添加心肌細(xì)胞鋪板液至完全覆蓋皿/瓶底(建議1ml/六孔板單孔)，37℃包被1小時。如果暫時不用，可用塑封膜封口后2-8℃儲存，并于1周內(nèi)使用，保存期間心肌細(xì)胞鋪板液需始終保持完全覆蓋皿底。重要提醒：操作時需要將鋪板液始終置于冰上；正確操作下鋪板液應(yīng)呈清亮，若操作時間過長或溫度過高，鋪板液會變得粘稠甚至呈膠狀，不宜使用。
心肌細(xì)胞復(fù)蘇(適用于凍存的細(xì)胞）	a.將心肌細(xì)胞復(fù)蘇液從4°C冰箱中取出，室溫平衡30分鐘。 b.打開水浴鍋，設(shè)定溫度為37°C。 c.開啟生物安全柜進(jìn)行紫外滅菌30分種。 d.在冰上將1ml心肌細(xì)胞鋪板液加入6孔板的一個孔中(0.1ml/cm 2 )，隨即前后左右晃動6孔板，使鋪板液均勻覆蓋孔的表面。 e.將剩余鋪板液迅速放回冰箱，將6孔板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育1小時。 f.取出孵育好的6孔板，放于生物安全柜中，吸除心肌細(xì)胞鋪板液后，立刻在孔內(nèi)加入1ml 心肌細(xì)胞復(fù)蘇液。 g.從高效液氮儲存罐中取出需要復(fù)蘇的細(xì)胞，將其放于干冰中暫存。 h.從干冰中取出細(xì)胞，迅速將凍存管的下1/2沒入水浴鍋中，輕柔晃動1-2分鐘至管中僅剩一小塊冰時，將其取出。 i.75%酒精擦拭凍存管表面后，將其放入生物安全柜中，擰開管蓋，用1ml槍尖輕柔的將管中液體盡可能多的轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，用1ml心肌細(xì)胞復(fù)蘇液輕柔沖洗凍存管，以5秒鐘一滴的速度將沖洗液緩慢滴加入15ml離心管，邊滴加邊輕柔晃動離心管。 j.再用槍尖以同樣速度，滴加1ml心肌細(xì)胞復(fù)蘇液至15ml離心管，邊滴加邊輕柔晃動離心管。 k.用移液管由慢（2秒鐘一滴）到快的滴加9ml心肌細(xì)胞復(fù)蘇液，同時輕柔晃動離心管。300g離心5分鐘。 l.在生物安全柜內(nèi)吸除上清，用2ml移液管取1ml心肌細(xì)胞復(fù)蘇液輕柔吹打細(xì)胞沉淀3-5次后，將其加入6孔板中，前后左右十字晃動混勻（可按比例稀釋計數(shù)）。 m.顯微鏡下觀察，細(xì)胞均勻分布。 n.在6孔板上標(biāo)記好細(xì)胞名稱、日期以及操作人員后，將其放入細(xì)胞培養(yǎng)箱，再次前后左右晃動混勻，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱種培養(yǎng)24-48小時至絕大多數(shù)細(xì)胞貼壁后即可換液為心肌細(xì)胞培養(yǎng)基。重要提醒：心肌細(xì)胞復(fù)蘇計數(shù)后，可按需求接種至需要的培養(yǎng)容器；心肌細(xì)胞培養(yǎng)時，按照推薦的密度接種，能夠抑制成纖維細(xì)胞生長速度；重要提醒：心肌細(xì)胞復(fù)跳后，建議繼續(xù)培養(yǎng)1-2天穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
心肌細(xì)胞維持	a.將心肌細(xì)胞培養(yǎng)基室溫平衡30分鐘。 b.將心肌細(xì)胞用心肌細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，每48小時換液一次。更換時，貼壁加入培養(yǎng)基避免刮碰細(xì)胞；亦可加入標(biāo)準(zhǔn)量150%的心肌細(xì)胞培養(yǎng)基，每72小時換液一次。重要提醒：細(xì)胞在6-8周內(nèi)性狀穩(wěn)定。如果需要長期培養(yǎng)，為了維持細(xì)胞穩(wěn)定性和純度，需要定期采用心肌細(xì)胞純化液進(jìn)行處理,一般每6周處理一次
注意事項	1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 3. 申請售后時請?zhí)峁┘?xì)胞收貨時及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 5. 細(xì)胞在不同實驗室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長速度、貼壁情況均可能有所差異，對于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長的行為，不予過度解釋或免費(fèi)售后。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方	無血清凍存液，液氮儲存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時方法計數(shù)，剩下的細(xì)胞按計數(shù)需要的細(xì)胞量凍存即可。如果沒要求，那就按平時，一個皿凍一管。
凍存方法	待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10⁶~1x10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項	凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案