細(xì)胞STR鑒定技術(shù)服務(wù)

研究背景

細(xì)胞系錯誤鑒定問題已有50年歷史，基于國際細(xì)胞庫的分析數(shù)據(jù)顯示：1984年細(xì)胞錯誤鑒定率為35%，1999年為18%，直到最近幾年，應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的細(xì)胞系需要鑒定的問題仍然很少有人關(guān)注。

近年來，大量研究表明 STR 基因分型方法是進(jìn)行細(xì)胞交叉污染和性質(zhì)鑒定的最有效和準(zhǔn)確的方法之一，STR基因分型應(yīng)用于細(xì)胞鑒定已被ATCC等機(jī)構(gòu)強(qiáng)烈推薦。美國的ATCC 細(xì)胞庫、德國的DSMZ細(xì)胞庫以及日本的JCRB細(xì)胞庫等為STR 分型提供了各細(xì)胞株的數(shù)據(jù)供比對。

技術(shù)簡介

STR ( Short Tandem Repeat, 短串聯(lián)重復(fù)序列)基因分型技術(shù)是細(xì)胞身份鑒定最準(zhǔn)確有效的方法，被ATCC、ICLAC等權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)定為細(xì)胞鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。STR基因位點(diǎn)由長度為3~ 7個堿基對的短串連重復(fù)序列組成，廣泛存在于人類基因組中，被稱為細(xì)胞的DNA指紋。通過對這些STR位點(diǎn)的檢測，將檢查結(jié)果與專業(yè)的STR數(shù)據(jù)庫比對，從而確定被測細(xì)胞的真實(shí)身份，或判斷被測細(xì)胞是否與某些細(xì)胞，發(fā)生交叉污染。

人源細(xì)胞STR分型(cell line STR genotyping),是選用D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、PentaE、TH01、D12S391、D2S1338和FGA等19個具有高度多態(tài)性基因座和一個性別基因位點(diǎn)Amelogenin對人源細(xì)胞進(jìn)行STR分型檢測。根據(jù)STR分型結(jié)果對細(xì)胞的生長狀態(tài)(是否存在交叉污染)和細(xì)胞的株系進(jìn)行確認(rèn)的技術(shù)手段。

人源細(xì)胞STR位點(diǎn)信息

D5S818 D13S317 D7S820 D16S539 VWA

TH01 AMEL TPOX CSF1PO D12S391

FGA D2S1338 D21S11 D18S51 D8S1179

D3S1358 D6S1043 PENTAE D19S433 PENTAD

為什么需要做細(xì)胞STR鑒定

細(xì)胞系錯誤鑒定所造成的后果

細(xì)胞系的損失

時間和金錢的損失

在公眾領(lǐng)域(文獻(xiàn)、專利等)提供錯誤信息

造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致或不可重復(fù)

何時需做細(xì)胞STR鑒定

發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費(fèi)前

使用細(xì)胞進(jìn)行臨床治療(試驗(yàn))前

準(zhǔn)備凍存保種或已凍存多年的細(xì)胞

一個涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時

新得到的細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)室傳5代以上的細(xì)胞

細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大

文章發(fā)表或常規(guī)定期鑒定

周期報價

周期：1 周

報價：800 元/樣

檢測流程

1.確定STR位點(diǎn)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，包括熒光標(biāo)記的選擇，引物的設(shè)計(jì)、合成和標(biāo)記，熒光分子量內(nèi)標(biāo)的選用等。

2.按照所設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案完成熒光PCR，利用瓊脂糖電泳檢測結(jié)果;若PCR產(chǎn)物特異性不夠，將進(jìn)行優(yōu)化。

3.PCR產(chǎn)物通過ABI 3730XL測序儀器進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測，獲得擴(kuò)增片段大小的數(shù)據(jù)

4.用GeneScan 3.0/GenoTyper 2.0或GeneMapper 3.2等軟件對收集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，將產(chǎn)物片段大小、數(shù)量多少的信息轉(zhuǎn)化成直觀準(zhǔn)確的波形圖譜，為下一步進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析或連鎖分析等遺傳分析提供可靠的數(shù)據(jù)。

服務(wù)內(nèi)容

細(xì)胞收集，基因組DNA提取

熒光弓|物PCR擴(kuò)增21個str位點(diǎn)

產(chǎn)物經(jīng)測序儀電泳，獲得細(xì)胞基因分型結(jié)果

結(jié)果與ATCC、DSMZ、JCRB和RIKEN等細(xì)胞庫比對和分析

樣品要求

1. PCR產(chǎn)物或基因組DNA：濃度≥200ng/ul，總體積≥20ul，OD260/280在1.7至2.0之間;新鮮組織樣品：總量≥100mg的新鮮組織樣品或1～2ml血液樣品

2. PCR產(chǎn)物或基因組DNA請?zhí)峁悠返碾娪緳z測圖

3. 由于在實(shí)驗(yàn)過程中，可能會出現(xiàn)某些STR位點(diǎn)難以檢測的情況，建議提供3～4個備選STR位點(diǎn)

4. 建議使用6FAM, VIC, NED以及PET四種熒光標(biāo)記

5. 為盡量避免多種熒光信號的相互干擾，不建議同管檢測使用的熒光多于2種，多種熒光同管檢測，PCR產(chǎn)物大小需相差50bp以上

6. STR檢測中常會出現(xiàn)一些比正常產(chǎn)物短2～4個堿基的峰，這是由截斷PCR造成的，屬于正?，F(xiàn)象，并不會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。

您的細(xì)胞系認(rèn)證服務(wù) STR 概況報告包含

簡單易懂的STR等位基因表

支持每個位點(diǎn)的等位基因調(diào)用的電泳圖

結(jié)果的綜合解釋

STR 分型圖譜和細(xì)胞鑒定結(jié)果的書面報告 (中英文報告)

公司優(yōu)勢

通用熒光引物，大幅降低3730實(shí)驗(yàn)成本

提供21個str位點(diǎn)選擇，極大提高鑒定的分辨率

數(shù)據(jù)分析基于3730測序平臺，結(jié)果穩(wěn)定可靠

可提供英文報告，用于文章發(fā)表

實(shí)驗(yàn)周期短，價格優(yōu)惠，售后服務(wù)完善

項(xiàng)目案例

以PLC/PRF/5細(xì)胞為例，進(jìn)行STR鑒定

人源細(xì)胞STR位點(diǎn)信息

STR分型圖譜

STR檢測結(jié)果

STR鑒定應(yīng)用

STR分析已廣泛應(yīng)用于遺傳制圖、連鎖性分析、親子鑒定、疾病基因定位和物種多態(tài)性研究等諸多領(lǐng)域。高度多態(tài)的微衛(wèi)星還可以用來在人群進(jìn)行個體識別。刑事案件的偵破離不開法醫(yī)學(xué)的幫助,其中Y-STR檢測手段在鑒定中發(fā)揮的作用尤為突出。

Y-STR檢驗(yàn)是法醫(yī)學(xué)對精子的一種DNA檢測手段，Y-STR基因座是位于男性Y染色體上的人類多態(tài)性STR位點(diǎn)，一般情況下，只有男性個體才有Y染色體，因此，Y-S T R具有男性遺傳，男性特異性的特點(diǎn)。Y-S T R即可作為性別鑒定的依據(jù)，同時在法醫(yī)學(xué)精斑及混合斑檢驗(yàn)中發(fā)揮著重要作用。Y染色體為男性個體特有且呈現(xiàn)男性伴性遺傳,Y-STR檢測技術(shù)可以對嫌疑人或被害人的身份認(rèn)定進(jìn)行有效確認(rèn),故作為一種補(bǔ)充檢驗(yàn)技術(shù),此項(xiàng)技術(shù)在個體識別、親子鑒定、血緣關(guān)系鑒定及族譜DNA分析等方面具有十分重要的研究和應(yīng)用價值。